BrdU标记人脐带间充质干细胞及对细胞生物学行为影响的体外研究

目的：探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU）标记人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）的方法及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响。方法：将hUC-MSCs分离培养并进行细胞表面标志物及多向分化潜能鉴定,取第5代细胞以终浓度分别为10、15、20、25 ?滋mol/L BrdU进行标记,采用空白BrdU作为对照组,分别培养24、48、72 h及96 h后,台盼蓝排斥实验检测细胞活力;MTT法检测细胞增殖能力;AnnexinV-FITC检测细胞存活率及凋亡率,免疫组化法检测各组标记率。结果：台盼蓝排斥实验检测细胞活力都在96%以上,实验组与对照组比较均无统计学意义（不同浓度组间比较P=0.89,各时间点比较P=0.61,时间与不同浓度的交互作用P=0.89）。MTT结果显示BrdU对细胞增殖无抑制（P ＞0.05）。不同浓度标记组间细胞增殖率及凋亡率的差异（增殖率F=12.02,P＜0.001,凋亡率F=6.14,P=0.009）。结论：BrdU标记hUC-MSCs是安全可靠的,BrdU标记hUC-MSCs的最佳剂量和时间为20 ?滋mol/L、72 h,适于hUC-MSCs在临床前实验研究的体内示踪。     

USPIO作为T1-T2双增强对比剂的初步动物成像研究

目的：研究粒径对超顺磁性氧化铁（superparamagnetic iron oxide,SPIO）纳米颗粒T1和T2弛豫效能的影响,并选取超小粒径SPIO（ultra-small SPIO,USPIO）探究其作为磁共振T1-T2双增强对比剂在体内成像应用中的特点。方法：采用共沉淀法制备3种不同粒径的SPIO。测定样本基本理化性能和磁学特性,采用临床3.0T MRI成像仪,研究不同MRI序列下USPIO大鼠体内对比增强成像特点。结果：成功制备3种不同粒径的SPIO：[A：（14.14±4.94） nm;B：（28.30±7.65） nm;C：（93.81±33.01） nm],测得在不同磁场强度下的T1、T2弛豫效能。小粒径的SPIO纳米颗粒具有更低的r2/r1（0.5 T：2.14）,是潜在的T1、T2双增强对比剂,且低磁场下具有更低的r2/r1,有利于T1增强显影。大鼠成像显示,USPIO在T2加权成像序列下能明显降低肝脏T2成像信号,在短TE的T1加权序列下能明显提高肝脏、心血管T1信号,具有较小分子对比剂更长的成像时间窗。结论：粒径是影响SPIO弛豫效能的重要参数,USPIO具有更低的r2/r1比,是潜在的T1、T2双增强对比剂。     

HGF/c-Met轴介导EPCs治疗大鼠HPAH的初步实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）/c-Met轴介导内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）移植入低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary artery hypertension,HPAH）大鼠对大鼠的肺动脉压力和肺血管重构的影响。方法：构建HPAH模型大鼠;大鼠骨髓原代EPCs提取、培养和鉴定;构建c-Met腺病毒并转染EPCs;将大鼠分为c-Met-EPCs细胞组、EPCs细胞组、肺动脉高压组和正常组,每组10只。前2组大鼠通过尾静脉分别输注c-Met-EPCs细胞和EPCs细胞,后2组大鼠输注生理盐水;饲养一周后检测平均肺动脉压力（mean pulmonary arterial pressure,mPAP）和右心室肥大指数（right ventricle hypertrophy index,RVHI）;透射电镜检测肺动脉超微结构改变,肺组织病理切片观察肺小动脉改变;ELISA法测定血清内皮素-1（endothelin-1,ET-1）含量,Griess法测定血清一氧化氮（nitric oxide,NO）含量。结果：c-Met-EPCs细胞组、EPCs细胞组、肺动脉高压组和正常组4组大鼠的mPAP值分别为（23.17±3.07）、（30.85±3.15）、（33.55±5.47）、（20.30±1.99） mmHg;RVHI值分别为（32.48±2.38）%、（37.54±4.42）%、（38.53±2.81）%、（26.05±3.05）%;血清ET-1值分别为（69.45±6.32）、（95.76±7.31）、（99.14±8.39）、（62.35±6.06） ng/L;血清NO值分别为（99.63±11.40）、（56.07±3.32）、（48.83±6.56）、（125.50±12.26） μmol/L。EPCs细胞组、肺动脉高压组大鼠的mPAP、RVHI和血清ET-1含量明显高于正常组（P<0.05）;c-Met-EPCs细胞组较EPCs细胞组、肺动脉高压组明显降低（P<0.05）。EPCs细胞组、肺动脉高压组大鼠的血清NO含量明显低于正常组（P<0.05）;c-Met-EPCs细胞组较EPCs细胞组、肺动脉高压组明显升高（P<0.05）。透射电镜显示EPCs细胞组、肺动脉高压组肺动脉中膜平滑肌细胞线粒体和内质网肿胀、内皮细胞中断不连续,而c-Met-EPCs细胞肺动脉中膜平滑肌细胞线粒体和内质网肿胀不显著。肺组织病理切片显示EPCs细胞组、肺动脉高压组肺血管重构明显,而c-Met-EPCs细胞组肺血管重构减轻。结论：HGF/c-Met轴介导内皮祖细胞移植入低氧性肺动脉高压大鼠后可明显降低肺动脉压力和和改善肺血管重构,其机制可能与抑制ET-1释放和促进NO产生有关。     

潮气呼气流速-容量环对支气管肺发育不良患儿肺功能的监测

目的：探讨潮气呼吸流速-容量环对支气管肺发育不良（brouchopulmonary dysplasia,BPD）患儿肺功能的评估作用。方法：选取无严重心肺疾病的非BPD早产儿（113例）为对照组,BPD早产儿为观察组,根据BPD诊断标准分为轻、中、重3组（分别为48例,42例,16例）。在校正胎龄44周时检测各组潮气呼吸流速-容量曲线（tidal breath flow-volume loop,TBFVL）和功能残气量（functional residual capacity,FRC）、肺清除指数（lung clearance index,LCI）。结果：（1）TBFVL形态分析：与对照组相比,BPD轻、中、重组呼气达峰提前,呼气峰流量明显高于吸气峰流量,呼气降支陡峭,BPD轻组呼气降支斜率增加,BPD中、重组呼气降支明显向容量轴凹陷。（2）肺功能指标：除BPD中组外,BPD轻、重组呼气达峰容积比均比对照组低（均P<0.05）;BPD重组吸气峰流量、呼气峰流量、75%潮气量时呼气流速均比BPD轻组和对照组高（均P<0.05）;25%潮气量时呼气流速除BPD重组比对照组高外,BPD轻、中组均比对照组低（均P<0.05）;BPD中、重组FRC比对照组低,LCI只有BPD中组比对照组高（均P<0.05）。（3）相关性：除LCI外,呼气达峰容积/呼气量、吸气峰流量、呼气峰流量、75%潮气量时呼气流速、25%潮气量时呼气流速、FRC均与BPD严重程度相关（均P<0.05）。结论：BPD患儿由于肺泡、终末小气道发育不良,导致TBFVL呼气降支斜率增加,中、重度BPD患儿呼气降支出现凹陷。TBFVL能直观反映BPD患儿肺功能状况,可结合FRC、LCI用于BPD患儿肺发育的监测。     

ERK5信号通路参与BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化

目的：研究细胞外信号调节激酶5（extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5）信号通路在骨形态发生蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法：用AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞,流式细胞术检测转染效率,Western blot检测磷酸化ERK5（phosphorylation ERK5,p-ERK5）和ERK5的表达水平,免疫荧光检测p-ERK5在细胞内的表达位置;ERK5特异性抑制剂BIX02189预处理细胞再经AdBMP9诱导,Western blot检测p-ERK5和ERK5表达水平,RT-qPCR检测心肌特异性基因肌细胞增强因子（myocyte enhancer factor,MEF）2C、GATA结合蛋白4（GATA binding protein 4,GATA4）表达,Western blot检测心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白４３（connexin 43,CX43）、心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T,cTnT）表达。结果：AdGFP与AdBMP9的转染效率达50%左右,经AdBMP9诱导后的细胞p-ERK5表达明显增高（P＜0.01）,免疫荧光结果显示BMP9组p-ERK5表达明显增强且主要集中于胞核;15 ?滋mol/L BIX02189可完全抑制p-ERK5的表达（P＜0.01）,且明显降低了由AdBMP9诱导的C3H10T1/2细胞GATA4、MEF2C基因与CX43、cTnT蛋白表达（P=0.000）。结论：BMP9可以通过激活ERK5信号通路调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。     

儿童心肌致密化不全20例临床分析

目的：探讨儿童心肌致密化不全（noncompaction of the ventricular myocardium,NVM）的临床特点及治疗效果。方法：对2007年9月至2012年11月期间收治的20例NVM患儿的临床表现、辅助检查（胸部X线片、心电图、超声心动图、心脏磁共振等）、临床治疗以及随访结果等资料进行回顾性分析,并对部分患儿进行随访。结果：20例NVM患儿中,有家族史者2例,以心功能不全为主要临床表现者16例（80%）,心律失常10例（50%）,无血栓及血栓事件发生;胸部X线检查示心脏扩大者12例（60%）,20例患儿超声心动图均提示心脏NVM典型表现,其中单纯左室病变17例,双室病变2例,合并先天性心脏病9例（45%）,合并有扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy,DCM）3例（15%）及心内膜弹力纤维增生症（endocardial fibroelastosis,EFE）4例（20%）;20例NVM首次住院治疗后,16例好转出院,4例放弃治疗;20例NVM患者平均随访7.86个月（1~15月）,其中5例（5%）死亡,主要死因为心力衰竭加重;8例长期随访者心功能不全的临床症状明显缓解,改良Ross评分较前降低,定期复查心脏彩超提示心功能改善尚可,左室射血分数（left ventricular ejection fraction,EF）改善明显,差异有统计学意义（t=-3.248,P=0.018）;左室短轴缩短率（shortening fraction,FS）、收缩末期左室内径（left ventricular end diastolic diameter,LVED）、收缩末期右室内径（right ventricular end diastolic diameter,RVED）及非致密化心肌厚度/致密化心肌厚度比值（ratio of noncompacted to compacted myocardial layers,N/C）差异均无统计学意义（t=-1.348,P＝０.２２６;t=0.343,P=0.744;t=0.969,P=0.370;t=0.467,P=0.657）。结论：儿童NVM以心功能不全为主要表现,超声心动图是诊断NVM的主要手段;NVM在经积极内科对症治疗后临床症状可得到缓解,短期心脏功能改善可,但总体预后较差。     

腹腔镜肾盂输尿管成型术中CO2气腹对儿童机体酸碱平衡的影响

目的：探讨腹腔镜肾盂输尿管成型术中CO2气腹对儿童机体酸碱平衡的影响及其防治措施。方法：选择2010年1月至2011年6月在我科完成的经腹腔镜及开放式肾盂输尿管成型术各64例,分为腹腔镜组和开放组,并按年龄分为婴幼儿组、学龄前组和学龄组。选择2011年7月至2012年2月完成的腹腔镜肾盂输尿管成型术26例,术毕采取用空气充分置换腹腔残余CO2措施,作为腹腔镜空气置换组。所有病例均于术后4 h行动脉血气分析检测。结果：腹腔镜组术后高碳酸血症发生率为35.9%,高于开放组（18.7%）（?字2=4.578,P=0.029）。婴幼儿组、学龄前组酸碱失衡发生率分别为91.3%、84.2%（腹腔镜组）及84.4%、76.5%（开放组）,均高于学龄组（50.0%、33.3%）（P<0.05）。腹腔镜空气置换组术后高碳酸血症发生率为11.5%,低于腹腔镜组（35.9%）（P<0.05）。结论：腹腔镜肾盂输尿管成型术中腹腔残余CO2是导致儿童术后高碳酸血症的重要因素。年龄越小,CO2气腹对机体酸碱平衡影响越大。术毕充分置换腹腔残余CO2是降低术后高碳酸血症发生率的重要措施。     

肺动脉吊带的临床诊疗经验

目的：探讨肺动脉吊带（pulmonary artery sling,PAS）的临床诊疗经验。方法：分析2009年 12月至2013年3月在重庆医科大学附属儿童医院心胸外科PAS患儿的临床资料。结果：16例PAS患儿于我科行手术治疗,所有患儿均以反复咳嗽、吼喘等呼吸道症状就诊,年龄2个月～3.5岁,体质量4.5～15 kg,按Cotton气管狭窄分期,Ⅰ期（管腔阻塞<70%）：14例,单纯行左肺动脉移植术,13例痊愈出院,1例死亡;Ⅱ期（管腔阻塞70%～90%）：0例,Ⅲ期（管腔阻塞>90%）：2例,行气管成形术,均死亡。结论：PAS患儿多为继发于异常走行血管压迫产生的Ⅰ期气管狭窄,不需要手术矫正气道狭窄;而合并Ⅱ、Ⅲ期气管狭窄,是否应积极行气管狭窄根治术,仍需进一步讨论。     

可吸收螺钉在小儿肱骨外髁骨折中的应用

目的：探讨可吸收螺钉用于治疗小儿肱骨外髁骨折的可行性及优缺点。方法：2009年1月1日至2010年12月31日在本院诊断为肱骨外髁骨折的手术患儿183例,其中男100例,女83例,平均年龄6.5岁。结果：183例均获得随访,随访时间6～32个月,平均16个月,根据Hardacre的疗效判定标准,发生并发症骨愈合延迟1例,其余疗效均达到优,无延迟愈合,无外髁过度生长,无肘关节内外翻等其他并发症。结论：与传统克氏针内固定术相比,小儿肱骨外髁骨折采用可吸收螺钉内固定,并发症显著下降,并未出现理论上存在的吸收钉损伤骺板引起的并发症。     

儿童闭合性肝脏外伤的诊治体会

目的：探讨儿童闭合性肝脏外伤的诊断及治疗方法。方法：回顾分析本中心6年来收治儿童闭合性肝脏外伤共32例。创伤原因包括车祸伤11例,跌伤9例,钝物挤压及击打伤7例,高处坠落伤5例。根据1989年美国创伤外科学会的分级法,Ⅰ级19例（60%）、Ⅱ级9例（28%）、Ⅲ级3例（9%）、Ⅳ级1例（3%）。28例行保守治疗,4例行手术治疗。结果：28例行保守治疗后痊愈,4例手术治疗行肝脏裂伤修补术,1例术后再次出血手术,皆痊愈出院。结论：儿童闭合性肝脏外伤多数在严密监护及积极保守治疗下均可获得满意的疗效。如何根据儿童生命体征变化及B超、CT等资料判断是否及时中转手术是治疗儿童肝脏外伤的关键,即使并无明显腹腔积血等,如CT提示肝脏裂伤程度较重,也应积极行手术修补裂伤。