双重实时荧光PCR快速鉴别人参和西洋参＊

目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对，设计特异性的引物探针，建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq （Probe qPCR） 10 μL，人参上下游引物各0.5 μL，西洋参上下游引物各0.3 μL，人参与西洋参特异性探针各0.4 μL，DNA模板2 μL，灭菌去离子水补至20 μL。反应条件为95℃预变性30 s；然后以95℃变性5 s，60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品，包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA，以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测，用以确定该方法的灵敏度。结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线，人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线，其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。     

复方五凤草液对大鼠慢性溃疡的药效学筛选研究

目的:观察复方五凤草液对大鼠几种常见慢性溃疡的治疗改善作用,进行药效学初筛研究。方法:构建下肢静脉性溃疡、烧伤性溃疡、压力性溃疡、糖尿病溃疡4种大鼠模型,每种模型24只,分为模型组、复方五凤草液组、阳性药组。分别于造模后第3d、第7d、第10d、第14d对大鼠溃疡创面进行相机拍照,采用Adobe Photoshop CS5软件图像处理创面,得创面面积,计算创面愈合率。结果:下肢静脉性溃疡实验结果表明,复方五凤草液给药前期显著促进了大鼠创面的愈合(P0.05, P0.05),效果优于阳性药复方黄柏液;烧伤实验结果表明,复方五凤草液给药后期能显著促进大鼠创面的愈合(P0.05,P0.01),效果优于阳性药康复新;压力性溃疡实验结果表明,复方五凤草液对大鼠创面的愈合没有显著影响,而阳性药康复新在给药后期显著促进了大鼠创面的愈合(P0.01,P0.05);糖尿病溃疡实验结果表明,复方五凤草液对大鼠创面的愈合没有显著影响,而阳性药复方黄柏液给药后期能显著促进大鼠创面的愈合(P0.05)。结论:复方五凤草液能有效促进大鼠下肢静脉性溃疡、烧伤创面的愈合,可以考虑进行进一步的药效与机制研究。     

北京市海淀区居民超重/肥胖流行现状及其影响因素

目的了解北京市海淀区18~79岁常住居民超重/肥胖流行现状及其危险因素,为预防和控制超重/肥胖提供科学依据。方法采用多阶段整群随机抽样的方法,抽取海淀区20个街道18~79岁常住居民6 598人,对超重/肥胖及危险因素等情况进行流行病学调查。结果调查对象超重和肥胖率分别为38.53%和18.84%,标化率分别为34.82%和16.59%。多因素logistic回归分析显示:高年龄组、在婚、饮酒、口味偏咸是超重和肥胖的危险因素,女性、文化程度高中以上是超重和肥胖的保护因素。结论北京海淀区居民超重、肥胖患病形式严峻,需采取综合措施,有针对性的开展干预工作。     

磁场辅助治疗小儿构音障碍的疗效观察

构音障碍,也就是人们俗称的“大舌头”,是由于某些音素的发音障碍,导致相应的一些字或词读音不准,包括单音素构音障碍和多音素构音障碍两种类型。单音素构音障碍是指只有一个音素发音障碍者,如最常见的声母“L”发音障碍,则凡是含有此声母的音如“来”、“老”、“了”就都发不准。多音素构音障碍是指有两个以上的音素发音障碍,导致较多的字发音不准,如常见的声母“G、K”、“J、Q、X”发音障碍等。3年多来,笔者采用磁场辅助治疗小儿构音障碍209例,取得了相当显著的效果,现报告如下。1对象与方法209例构音障碍患者均为吉林市儿童医院收治…     

重症肺炎支原体肺炎CD3+HLA-DR表达与VitA水平相关性分析

  目的   探讨重症肺炎支原体肺炎外周血淋巴细胞CD3+HLA-DR表达、血清Vitamin A（VitA）水平及其相关性。  方法   回顾性分析2017年1月至2020年12月入住昆明医科大学第二附属医院儿科病房,符合重症肺炎支原体肺炎诊断标准的24例患儿,随机选取同期住院的普通肺炎支原体肺炎47例为普通组;单纯上呼吸道感染、身材矮小症住院的23例为对照组;入院次日晨采集空腹静脉血,其中非抗凝血1 mL和抗凝血3 mL送检;肺炎支原体抗体滴度测定选用微量血被动凝集法,CD19,CD4,CD8,CD3+HLA-DR选用美国贝曼流式细胞仪及试剂测定,血清VitA检测:采用高效液相色谱法;统计学分析:采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验;相关性分析采用 Pearson 分析;危险因素采用Logistic分析。  结果  （1） 重症肺炎支原体肺炎者 24 例,男14 例、女 10 例,年龄（4.97±1.79）岁;普通肺炎支原体肺炎者 47 例,男30 例、女 17 例,平均年龄（4.87±1.79）岁;同期单纯上呼吸道感染、身材矮小症住院的23例患儿,男12例、女11 例,平均年龄（4.77±2.11）岁,3组患儿年龄、性别比较,差异无统计学意义（P > 0.05） ;（2）3组患儿CD19,CD4,CD8,CD3+HLA-DR,VitA值比较:重症组淋巴细胞CD4,CD3+HLA-DR表达及血清VitA水平明显降低[（34.2±4.54）,（11.83±2.57）,（0.23±0.10）],CD19（18.66±2.56）明显增高,与普通组[（38.1±4.04）,（17.11±2.71）,（0.33±0.14）]和对照组[（39.35±3.86）,18.78±1.86）,0.40±0.14）]比较,差异有统计学意义（P < 0.05）;VitA与CD4,CD3+HLA-DR正相关（r = 0.371,0.688,P < 0.05）;Logistic回归分析结果显示,血清VitA水平、CD3+HLA-DR表达的下降均是SMMP的独立危险因素（OR = 4.42、2.38,P < 0.05）。  结论  淋巴细胞活化参与了MPP的发生发展,过强的免疫反应不仅会诱发过分的免疫反应,而且还会导致自身免疫损伤（免疫麻痹）,重症发生的基础,推测VitA也参与调控淋巴细胞的活化。     

八珍汤加减治疗透析低血压的临床观察

目的:观察八珍汤加减对治疗维持性血液透析患者透析中低血压的疗效。方法:入选规律血液透析低血压的患者。给予煎服八珍汤,50ml/次,每日1次,连续1个月。观察治疗前后连续1个月透析中低血压发生率。结果:试验组患者透析中低血压的发生率较治疗前明显下降(P<0.05)。结论:八珍汤能减少患者低血压的发生率。     

农村留守儿童学校生活满意度、自尊与校园欺凌行为的关系

目的 研究农村留守儿童校园欺凌行为的现状以及学校生活满意度、自尊与校园欺凌行为的关系,为关注留守儿童心理健康提供依据。方法 2017年8月-2018年1月采取整群随机抽样的方法,从湖南、河南、辽宁、广西四省6所农村学校共抽取605名小学5年级学生作为研究对象,其中留守儿童273名,非留守儿童332名,采用学校生活满意度问卷、自尊量表、校园欺凌问卷进行测量。结果 留守儿童比非留守儿童遭受了更多的校园欺凌行为(t=2.90,P＜0.01);校园欺凌行为和受欺凌行为均与学校生活满意度呈显著负相关(r=-0.296,-0.219,P<0.01);自尊与学校生活满意度呈显著正相关(r=0.388,P＜0.01);自尊在学校生活满意度与校园受欺凌行为之间起部分中介作用(β=-0.25,P＜0.05)。结论 留守儿童比非留守儿童遭受更多的校园欺凌行为,学校方面应尽量为儿童创造和谐的校园环境,提高留守儿童的生活满意度,同时通过开展心理活动健康教育,减少校园欺凌行为的发生。     

褪黑素对阿尔兹海默病的作用及高通量筛选在其药物研发中的应用

阿尔兹海默病（AD）属进行性记忆减退、认知学习障碍和人格改变为特征的脑退行性病变。随着社会老龄化的到来, AD 也已成为临床常见病,但其确切的病因机制尚不明确,目前也无阻止病情进展的有效药物,临床上广泛使用的胆碱酯酶抑制剂也仅能轻微改善患者症状［1］。AD 疾病的进展可导致脑功能损伤,造成患者痴呆,其属于脑老化性疾病,神经内分泌功能减退是 AD 发病机制研究中的一个重要方面,其中病理生理研究发现褪黑素（MT）的缺失与 AD 的发生具有密切的相关性。松果体腺是哺乳动物分泌褪黑素的主要器官,其属于脂溶性吲哚类激素,对生物节律、免疫系统、内分泌系统和炎性反应都具有调节作用。研究表明褪黑素的特异性结合位点广泛分布于与学习记忆相关的脑区,如下丘脑和海马等,对海马突触的可塑性具有调节作用,参与记忆过程的易化作用。王琳等［2］研究发现褪黑素受体激动剂 Neu-P11与褪黑素均能增强大鼠物体识别记忆,且 Neu-P11的效应是给药时间非依赖的。随着年龄的增长,松果腺腺体发生钙化,褪黑素的分泌也逐渐减少,AD 患者存在褪黑素合成和分泌减少、分泌节律异常。近年来褪黑素及其类似物成为治疗 AD 的潜在药物被广泛研究,本文结合 AD 的发病机制对其治疗作用加以阐述。     

视网膜色素上皮细胞氧化应激相关microRNA的鉴定

目的：应用miRNA表达谱芯片筛选视网膜色素上皮细胞与氧化应激相关的miRNA,为更加全面深入地研究年龄相关性黄斑病变(age-related macular degeneration,AMD)发生的分子机制提供新的思路。

方法：培养D407细胞,分别使用100、200、400μmol/L H₂O₂处理细胞24h后,Trizol试剂抽提细胞总RNA,使用Exiqon miRCURY LNA^TM microRNA表达谱芯片(miRBase 16.0数据库)检测不同浓度处理后D407细胞miRNA的表达差异,并将不同浓度处理后的变化进行聚类分析。使用Stem loop realtime PCR对芯片结果进行验证,并运用生物信息学方法预测差异miRNA调控的靶基因。

结果：芯片所包含的1 425个已知miRNA中,共有367个在不同浓度H₂O₂处理后表达发生变化。通过Treeview软件进行聚类分析发现miR-31等17个miRNA随H₂O₂浓度的升高呈现逐渐降低的趋势,miR-206等7个则逐渐升高。PCR验证显示芯片结果准确性较好。

结论：H₂O₂作用前后RPE的miRNA表达存在明显差异,miRNA作为转录后水平的调节分子,参与了细胞氧化应激反应,可能在AMD的发生发展中起有重要作用。