HGF/c-Met轴介导EPCs治疗大鼠HPAH的初步实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）/c-Met轴介导内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）移植入低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary artery hypertension,HPAH）大鼠对大鼠的肺动脉压力和肺血管重构的影响。方法：构建HPAH模型大鼠;大鼠骨髓原代EPCs提取、培养和鉴定;构建c-Met腺病毒并转染EPCs;将大鼠分为c-Met-EPCs细胞组、EPCs细胞组、肺动脉高压组和正常组,每组10只。前2组大鼠通过尾静脉分别输注c-Met-EPCs细胞和EPCs细胞,后2组大鼠输注生理盐水;饲养一周后检测平均肺动脉压力（mean pulmonary arterial pressure,mPAP）和右心室肥大指数（right ventricle hypertrophy index,RVHI）;透射电镜检测肺动脉超微结构改变,肺组织病理切片观察肺小动脉改变;ELISA法测定血清内皮素-1（endothelin-1,ET-1）含量,Griess法测定血清一氧化氮（nitric oxide,NO）含量。结果：c-Met-EPCs细胞组、EPCs细胞组、肺动脉高压组和正常组4组大鼠的mPAP值分别为（23.17±3.07）、（30.85±3.15）、（33.55±5.47）、（20.30±1.99） mmHg;RVHI值分别为（32.48±2.38）%、（37.54±4.42）%、（38.53±2.81）%、（26.05±3.05）%;血清ET-1值分别为（69.45±6.32）、（95.76±7.31）、（99.14±8.39）、（62.35±6.06） ng/L;血清NO值分别为（99.63±11.40）、（56.07±3.32）、（48.83±6.56）、（125.50±12.26） μmol/L。EPCs细胞组、肺动脉高压组大鼠的mPAP、RVHI和血清ET-1含量明显高于正常组（P<0.05）;c-Met-EPCs细胞组较EPCs细胞组、肺动脉高压组明显降低（P<0.05）。EPCs细胞组、肺动脉高压组大鼠的血清NO含量明显低于正常组（P<0.05）;c-Met-EPCs细胞组较EPCs细胞组、肺动脉高压组明显升高（P<0.05）。透射电镜显示EPCs细胞组、肺动脉高压组肺动脉中膜平滑肌细胞线粒体和内质网肿胀、内皮细胞中断不连续,而c-Met-EPCs细胞肺动脉中膜平滑肌细胞线粒体和内质网肿胀不显著。肺组织病理切片显示EPCs细胞组、肺动脉高压组肺血管重构明显,而c-Met-EPCs细胞组肺血管重构减轻。结论：HGF/c-Met轴介导内皮祖细胞移植入低氧性肺动脉高压大鼠后可明显降低肺动脉压力和和改善肺血管重构,其机制可能与抑制ET-1释放和促进NO产生有关。     

HGF/c-Met促进大鼠骨髓内皮祖细胞迁移能力

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met对大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)迁移能力的影响及其机制。方法提取、培养和鉴定大鼠骨髓EPCs;重组腺病毒载体介导c-Met基因转染EPCs,用real-time PCR、Western blot和CCK8分别检测c-Met的表达和细胞增殖;分别用0、5、10、20和50 ng/m L HGF处理Ad-c-Met-EPCs,并通过Transwell迁移系统检测Ad-c-Met-EPCs的迁移能力;选取适宜浓度的HGF处理EPCs、Ad-GFP-EPCs和Ad-c-MetEPCs,并设置PBS对照组和磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY294002组(同时加入HGF和10 g/L的LY294002),通过Transwell迁移系统和Western blot分别检测各组细胞的迁移能力、Akt和P-Akt的表达。结果 1)Ad-c-Met-EPCs中c-Met基因与蛋白均为高表达(P0.05)。2)c-Met基因对EPCs的增殖无明显影响。3)HGF在0~50 ng/m L范围内呈浓度依赖性促进Ad-c-Met-EPCs迁移。4)HGF+Ad-c-Met-EPCs组的迁移能力和P-Akt的表达显著高于对照组、HGF+EPCs组、HGF+Ad-GFP-EPCs组和HGF+LY294002+Ad-c-Met-EPCs组(P0.05)。结论 HGF/c-Met能够显著提高EPCs的迁移能力;HGF/c-Met可能通过PI3K/Akt信号通路促进EPCs的迁移。     

Ⅰ型先天性食管闭锁的临床治疗经验

目的:总结Ⅰ型先天性食管闭锁(congenital esophageal atresia,CEA)临床诊疗经验。方法:7例Ⅰ型CEA患者中男5例,女2例,胎龄为34.85~39.30周,出生体质量为2 100~3 000 g,其中早产儿1例,低体质量儿4例;合并先天性心血管畸形4例,肠道畸形1例,未合并畸形2例。入院后行胃造瘘术,术后2周行结肠代食管治疗。随访术后并发症、进食情况、生长发育等。结果:7例患者中1例患者胃造瘘后出现核黄疸未再次手术,其余6例2周后均行结肠代食管手术治疗,术后1例患者合并严重肺部感染脱机困难,其余5例术后均无吻合口瘘,随访1~5年进食正常,未见吻合口处狭窄,无胃食管返流,生长发育与同龄儿无异。结论:结肠代食管术后并发症低,总体治疗效果满意,可作为治疗Ⅰ型CEA的一种可靠的方法。     

儿童肋骨分叉畸形的临床诊治

目的探讨儿童肋骨分叉畸形的临床诊治经验,以期提高对该疾病的认识,降低漏诊和误诊的发生率。方法回顾性分析重庆医科大学附属儿童医院心胸外科2011年4月至2015年4月收治的44例肋骨分叉畸形患儿的临床资料,其中男29例、女15例,年龄2.5~14.0(5.9±2.8)岁,均行手术治疗。分析总结临床特点、诊断、治疗方法和手术时机等。结果 44例患儿中男女比例约为2∶1;右侧畸形32例(72.7%),左侧畸形10例(22.7%),双侧多发畸形2例(4.5%),右左侧畸形比例约为3∶1;右侧第4肋骨畸形有15例(34.1%),右侧第5肋骨畸形有16例(36.4%);合并其他疾病者13例(29.5%)。其中29例采用畸形肋骨切除术,15例采用畸形肋骨切除术和胸廓矫形术,术后病理均符合肋骨分叉畸形。术后随访1~5年,患者胸廓形态恢复良好,均无远期并发症发生。结论 CT三维成像是肋骨分叉畸形诊断的有效辅助手段。肋骨分叉畸形一经确诊需密切随访,若发展较快或严重影响胸廓形态,推荐手术治疗,通过随访提示手术治疗效果良好。     

过表达c-Met蛋白诱导内皮祖细胞分布于肺动脉高压大鼠肺组织

目的探讨过表达c-Met蛋白对内皮祖细胞(EPCs)在低氧性肺动脉高压(HPAH)大鼠中的分布情况。方法复制HPAH模型,原代培养大鼠骨髓源性EPCs并鉴定,构建带有c-Met基因的腺病毒并转染EPCs,细胞分为对照组、空载病毒组和c-Met过表达组,用real time PCR和Western blot检测c-Met mRNA和蛋白表达,用CM-Dil活细胞染色剂标记EPCs,通过尾静脉将各处理组EPCs输注到HPAH大鼠模型体内,1周后观察EPCs在主要脏器中的分布。结果对照组、空载病毒组和c-Met过表达组c-Met mRNA表达量分别为:0.19、0.17和1.85;c-Met蛋白的表达量分别为:0.24、0.17和0.82。正常EPCs组中细胞在肺脏、肝脏、脾脏和肾脏的阳性率分别是:1.7%、0.5%、7.9%和9.4%,空载病毒组细胞阳性率分别是:1.5%、0.4%、8.3%和8.5%,c-Met EPCs组细胞阳性率分别为9.3%、0.2%、1.3%和0.3%。c-Met EPCs组中肺脏的细胞阳性率明显升高,在肾脏和脾脏的分布明显下降(P0.001)。结论过表达c-Met蛋白促进EPCs优势分布于HPAH模型的肺组织。