荧光原位杂交联合染色体分析提高急性白血病的诊断率

目的:探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测联合染色体分析提高急性白血病(acute leukemia,AL)的临床诊断率。方法:无菌抽取2011年1月到2012年12月410例初诊为AL患儿的骨髓标本,经细胞培养后,采用G显带方法进行染色体分析,其中57例患儿用FISH技术进行相应的基因检测。结果:在410例AL患儿中,包括明确诊断为急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)132例,急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)251例,未明确诊断27例,染色体异常检出率为41%(168/410)。在57例AL患儿检测的染色体和FISH中,染色体异常检出率为52.6%(30/57);而FISH检测异常率为68.4%(39/57),两种方法检测的一致性为82.5%。结论:FISH方法是检测白血病患儿染色体异常的有效技术,可提高染色体异常检出率,明显优于单纯G显带染色体分析法,联合应用FISH及染色体分析对急性白血病的诊断结果更加准确、可靠,更适合于临床诊断、疗效判定。     

乳铁蛋白对脂多糖激活的U937细胞TLR4信号通路相关膜分子表达的影响

目的:研究重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rh LF)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活的U937细胞Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)信号通路相关膜分子TLR4、CD14、MD2表达的影响。方法:经佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导成熟的U937细胞随机分为6组:对照组、LPS组(给予100 ng/ml LPS)、LPS+50μg/ml rh LF组、LPS+100μg/ml rh LF组、LPS+200μg/ml rh LF组、LPS+500μg/ml rh LF组,采用RT-PCR和Western blot检测各组细胞TLR4、CD14、MD2 m RNA和蛋白的表达,ELISA检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量。结果:LPS组U937细胞TLR4、CD14、MD2 m RNA和蛋白的表达均明显高于对照组(P<0.05),LPS+50μg/ml rh LF组三者m RNA和蛋白的表达与LPS组差异不明显(P>0.05),LPS+100μg/ml rh LF组、LPS+200μg/ml rh LF组、LPS+500μg/ml rh LF组均明显降低了LPS诱导的TLR4、CD14、MD2 m RNA和蛋白的表达(P<0.05);LPS组TNF-α的含量明显高于对照组(P<0.05),LPS+50μg/ml rh LF组、LPS+100μg/ml rh LF组、LPS+200μg/ml rh LF组、LPS+500μg/ml rh LF组均明显降低了LPS诱导的TNF-α的产生(P<0.05)。结论:rh LF通过抑制TLR4介导的LPS跨膜信号转导和炎症因子TNF-α的分泌,对LPS所致的脓毒血症具有潜在的治疗作用。     

IL-31和他克莫司对Hacat细胞NT4表达的影响

目的:探讨白介素-31(interleukin-31,IL-31)、他克莫司对角质形成细胞神经营养素-4(neurotrophin-4,NT4)表达的影响。方法:培养人角质形成细胞株(Hacat细胞),采用不同浓度他克莫司作用24 h,噻唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖活性。IL-31、他克莫司单独或共同作用于Hacat细胞24 h后,采用real-time PCR法检测NT4 m RNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测12、24 h各组细胞上清液中NT4含量。结果:低浓度他克莫司(10、100)ng/ml对细胞活性无明显影响(P>0.05),高浓度(1 000 ng/ml)时细胞活性受到抑制(P=0.002)。IL-31作用Hacat细胞后,其NT4m RNA表达和上清中NT4含量均增加(P<0.05);100 ng/ml他克莫司作用24 h后他克莫司组和联合作用组细胞NT4 m RNA表达量和细胞上清中NT4含量均分别低于对照组和IL-31组(P<0.05)。结论:IL-31可促进角质形成细胞NT4表达,他克莫司可能通过降低角质形成细胞NT4表达水平而发挥其抗瘙痒作用。     

白血病细胞中Beta-Arrestin1与EZH2分子结合研究

目的：检测急性淋巴细胞白血病细胞（acute lymphoblastic leukemia,ALL）CCRF-CEM和Raji细胞中Beta-抑制蛋白1（Beta-Arrestin1）与Zeste增强子同源物-2蛋白（enhancer of Zeste homolog 2,EZH2）是否存在结合。方法：白血病细胞中,Western blot检测Beta-Arrestin1与EZH2表达水平,激光共聚焦（Confocal）检测 Beta-Arrestin1与EZH2在细胞中的位置与共定位;免疫共沉淀（CO-IP）检测Beta-Arrestin1与EZH2结合能力。结果：Beta-Arrestin1与EZH2在白血病K562、CCRF-CEM和Raji细胞中均有表达。激光共聚焦结果显示Beta-Arrestin1与EZH2均在K562、CCRF-CEM和Raji细胞内共定位,CO-IP结果显示在K562,CCRF-CEM和Raji细胞中Beta-Arrestin1与EZH2结合。结论：在CCRF-CEM和Raji中,Beta-Arrestin1可与EZH2结合。     

心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因的时序性表达规律研究

目的 观察在心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因时序性表达规律,为心肌肥大机制研究提供线索.方法 用异丙肾上腺素(ISO)干预心肌细胞,用CCK-8、细胞计数仪、免疫组化分别检测细胞存活率、细胞直径及表面积,用RT-PCR、Western blotting分别检测相关基因mRNA及蛋白表达水平.结果 用ISO成功构建心肌细胞肥大模型.ISO干预后,GATA结合蛋白4(GATA4)、肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA5、脑钠肽(BNP)、心房利钠因子(ANP)于24h开始升高,P300、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、T-框蛋白5(TBX5)于12h开始升高,血清应答因子(SRF)、β-MHC mRNA于6h开始升高(P＜0.05);其中GATA4、d-MHC、β-MHC、SRF、P300 mRNA表达呈先升后降的趋势,至干预72h GATA4、SRF、α-MHC、β-MHC、P300 mRNA表达仍高于正常(P＜0.05),而MEF2C降至正常(P＞0.05);GATA5、TBX5、ANP、BNP mRNA表达与对照组相比持续升高(P＜0.05),而NKX2.5 mRNA(P＞0.05)无明显变化.ISO干预48h后,GATA4蛋白表达水平升高,HEY2蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 在心肌细胞肥大过程中,MEF2C的时序表达规律与心脏发育过程相似,而GATA4、GATA5、SRF、TBX5的时序性表达规律与心脏发育过程不完全一致,提示其在心肌细胞肥大由代偿转为失代偿过程中的重要作用.同时GATA4、MEF2C、SRF与乙酰化酶P300的时序性表达规律相似,提示在心肌细胞肥大过程中其时序性表达可能受P300调控.     

喹诺酮信号分子对铜绿假单胞菌毒力的影响

目的探讨喹诺酮信号分子（PQS）对铜绿假单胞菌（PA）毒力的影响。方法选择PAO1作为实验菌,分为PQS组、PQS与
抑制剂组、抑制剂组以及正常组。QPCR方法检测Ⅲ型分泌系统（T3SS）的调节基因ExsA和毒力蛋白基因ExoS的转录水平;分
光光度计检测绿脓素生成量;作用肺泡上皮细胞A549,用平板计数法比较PAO1粘附和侵袭力;构建小鼠腹膜炎模型,观察PQS
对小鼠存活时间的影响。结果PQS增多和减少不影响PAO1 的成长情况。与正常组相比,PQS组的ExsA与其调控表达的
ExoS 毒力蛋白基因转录水平均显著升高（P<0.01）;PQS组PAO1 产生的绿脓素也明显升高,抑制组却明显下降（P<0.01）;与
A549细胞作用时,抑制剂组PAO1的粘附和侵袭力均显著降低;腹膜炎模型小鼠PQS组存活时间也降低明显（P均<0.01）。抑
制剂组Exos的转录水平有降低,差异有统计学意义（P<0.05）。与正常组比较,抑制剂组的ExsA转录水平无明显差异,PQS组
PAO1的粘附力和侵袭力没有改变（P均>0.05）。结论在PA感染宿主的整个过程中,PQS能维持粘附和侵袭能力,PQS的浓度
与绿脓素的产生有正相关关系,从而最终使宿主的存活时间成负相关。