小儿胰腺损伤诊治分析

目的探讨小儿胰腺损伤临床特点及诊治方法。方法我院自2004年8月～2011年12月共收治胰腺损伤患儿13例,其中Ⅰ度胰腺损伤3例,Ⅱ度7例,Ⅲ度2例,Ⅳ度1例;淀粉酶升高4例。13例患儿均经病史、腹部查体、淀粉酶检测、B超及CT明确诊断,4例经手术探查证实。结果 3例Ⅰ度及6例Ⅱ度经非手术治疗;1例Ⅱ度行腹腔广泛引流;1例Ⅲ度胰腺损伤因膜膜炎行剖探查术,术中见腹腔中等量积液,胰腺中部断裂,胰管未断裂,行断裂修补,局部引流;1例Ⅲ度因形成胰腺假性囊肿行胰腺囊肿-空肠Roux-Y吻合术;1例Ⅳ度行胰腺断裂近端缝合、远端胰腺空肠Roux-Y吻合术。所有患儿均临床治愈。结论小儿胰腺损伤因其症状往往较为隐匿,诊断较为困难,了解胰腺损伤的机制及高度警戒心理有利于胰腺损伤的早期诊断及恰当治疗。胰淀粉酶及脂肪酶升高在胰腺损伤诊断中并不可靠;螺旋CT增强扫描检查应作为胰腺损伤首选检查方法;轻度胰腺损伤多可非手术治愈,重型胰腺损伤合并腹膜炎表现需行剖腹探查并相应处理。     

多药耐药基因转染的脐血细胞对白血病小鼠化疗的骨髓保护作用

目的探讨转染多药耐药(mdr1)基因的脐血单个核细胞(MNC)对急性髓系白血病小鼠的骨髓保护作用及疗效。方法通过逆转录病毒介导的方法将含有人全长cDNAmdr1基因导入脐血MNC,即逆转录病毒上清液与脐血MNC体外共培养;将接种人髓系白血病细胞系(HL60细胞)的SCID小鼠分成3组A组(观察组)经鼠尾静脉注射转染mdr1的脐血MNC2×106/只,共2次;B、C两对照组小鼠以同样剂量、方法分别注射未转染mdr1的脐血MNC和等容积的生理盐水。3组白血病SCID小鼠在每周递增高三尖杉酯碱剂量化疗下,通过检测小鼠外周血白细胞数、瘤细胞阳性率、组织病理和HL60细胞表面抗原(CD33)等观察转基因小鼠和对照小鼠对抗癌药物的耐受性及抗肿瘤疗效。同时分别采用PCR技术、免疫组化方法和柔红霉素排出试验检测mdr1基因在小鼠体内的表达和功能。结果①体外成功地将mdr1基因导入脐血MNC,转染率达30%左右;②用HL60细胞2×106接种于经亚致死量照射的SCID小鼠可成功制成白血病动物模型;③采用程序性移植转基因细胞方法成功建立了mdr1转基因脐血细胞移植小鼠模型,并可作为白血病临床前期体内评价mdr1基因保护骨髓作用;④转基因脐血细胞移植小鼠对高三尖杉酯碱耐受性高于正常剂量的5~6倍,外周血白细胞维持在3.0×109/L左右,外周血涂片瘤细胞降至5%以     

胆总管结扎胆汁淤积性肝硬化动物模型的建立与评价

目的探讨胆总管结扎手术致胆汁淤积性肝硬化小鼠模型的建立价值,并对模型进行评价。方法将84只balb/c小鼠随机分为实验组(采用胆总管结扎术)和对照组(采用假手术),术后观察小鼠一般情况和肝胆大体结构;采用全自动生化分析仪检测术后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d、28 d总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、谷氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST);采用H&E染色评估肝脏组织形态学变化;采用masson染色和免疫组织化学检测术后28 d小鼠肝脏组织切片,评估两组胶原纤维增生和a-SMA、CK-19蛋白表达情况。结果实验组与对照组小鼠相比,术后一般情况相对更差,胆汁淤积,胆囊、胆总管体积明显增大,各项血清生化指标明显增高(P<0.05);HE染色可见肝小叶结构改变,胆管增生;术后28 d实验组小鼠masson染色可见胶原纤维形成,免疫组织化学染色提示a-SMA、CK-19表达量显著增多(P<0.05)。结论经腹中线小切口行胆总管结扎手术可成功构建小鼠胆汁淤积性肝硬化模型。     

垂盆草苷对幼龄肝内胆汁淤积大鼠的作用机制

研究垂盆草苷(sarmentosin,SA)对幼龄肝内胆汁淤积大鼠的干预和调节作用。将48只SD幼龄大鼠随机分为正常组(Control)、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)组(Model)、熊去氧胆酸(UDCA)阳性对照组、垂盆草苷低、中、高剂量组,每组8只,除正常组外,各组大鼠连续1周分别灌胃给予相应药物,每日1次。在第5 d灌胃给予80 mg/kg ANIT造模。在造模后48 h测定大鼠的胆汁流量;测定大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)的含量;检测肝脏组织病理变化和组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量;测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达;Western blot法分析胆汁酸转运蛋白与合成蛋白。与正常组相比,模型组胆汁流量受到明显的抑制;大鼠肝组织出现明显的病理损伤;血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA水平显著升高;组织匀浆中MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px含量显著降低;炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的表达升高(P<0.05,P<0.01);FXR、SHP-1、SHP-2、MREP2、BSEP、NTCP蛋白表达下降,CYP7A1、CYP27A1蛋白表达升高。与模型组相比,垂盆草苷各剂量组大鼠的胆汁流量呈现不同程度的增加;大鼠肝脏组织的病理损伤有所改善;血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA水平降低;肝脏组织匀浆中MDA的含量降低,SOD、GSH-Px的含量升高(P<0.05,P<0.01);TNF-α、IFN-γ、IL-1β的表达降低(P<0.05,P<0.01);结果表明垂盆草苷对于胆汁淤积有一定的治疗效果,其中垂盆草苷高剂量的作用效果与UDCA组相当,同时垂盆草苷可上调FXR、SHP-1、SHP-2、MREP2、BSEP、NTCP蛋白表达,下调CYP7A1、CYP27A1蛋白表达,说明垂盆草苷通过调控相关蛋白发挥作用。垂盆草苷对ANIT所致的SD幼龄大鼠肝内胆汁淤积有明显的干预和调节作用。可能是通过参与胆汁酸的转运与合成发挥其治疗作用。     

幼儿心脏死亡肝脏捐献一例

在供肝日益紧张的情况下,儿童心脏死亡器官捐献(DCD)可以成为供肝来源之一,但关于儿童DCD肝移植的报道较少.2011年11月,我院成功完成1例幼儿心脏死亡肝脏捐献,现报告如下.     

肝母细胞瘤患儿及其母亲孕期特点回顾性分析

目的 探讨肝母细胞瘤发生的危险因素,包括婴儿出生以及孕产妇分娩相关的特征.方法 采用病例-对照研究设计,收集肝母细胞瘤患儿及其母亲的病历资料,用Logistic回归模型对婴儿特征指标、母亲怀孕与分娩有关指标进行多因素统计检验. 结果发生肝母细胞瘤风险中低出生体质量儿的比值比为26.0(95%可信区间为14.0～65.7).母亲≤20岁和≥30岁的比值比分别为1.5(95%可信区间为0.6～4.6)和2.6(95%可信区间为1.0～6.7).超重和肥胖母亲的比值比为3.2(95%可信区间为1.0～6.7).孕妇吸烟的比值比为2.9(95%可信区间为1.1～4.2),对>2岁及H{生体质量正常儿童影响较大. 结论肝母细胞瘤的发生与患儿出生体质量及孕妇超重、吸烟等因素有关,应重视围产期卫生保健.     

β-catenin过表达对骨肉瘤细胞TE85迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 探讨β-catenin对骨肉瘤细胞TTE85迁移、侵袭及凋亡的影响.方法 RT-PCR及Western blot检测β-catenin在不同骨肉瘤细胞中的表达情况,重组腺病毒Adβ-catenin感染TE85细胞,RT-PCR及荧光素酶报告基因检测感染Adβ-catenin后β-catenin mRNA的表达及活性,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力,DAPI染色和流式细胞技术检测细胞凋亡情况.结果 TE85细胞内源性β-catenin表达相对较低(P＜0.05),Adβ-catenin能显著增加TE85细胞外源性β-catenin基因表达及活性,β-catenin组细胞迁移能力明显减慢(P＜0.05),β-catenin组侵袭能力明显低于对照组(P＜0.05).结论 β-catenin能抑制肿瘤细胞TE85的迁移及侵袭能力,对凋亡无影响.     

结缔组织生长因子对胰腺癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和转移的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组化方法,分别检测胰腺癌细胞株PANC-1和50例胰腺癌组织中CTGF的表达.采用重组腺病毒介导的CTGF转染PANC-1细胞使CTGF高表达,以RNA干扰方法使CTGF表达缺失,分别通过四甲基偶氮唑蓝(MMT)法、划痕实验、体外侵袭实验观察PANC-1细胞增殖和转移能力的变化.结果 实时定量PCR和免疫组化检测均显示,CTGF在PANC-1细胞及胰腺癌组织中高表达.CTGF转染后,CTGF转染组PANC-1细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显增强,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为34个,比空载体对照组(11个)明显增多.干扰CTGF后,siCTGF转染组细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显降低,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为6个,比空载体对照组(15个)明显减少.结论 CTGF在胰腺癌中高表达,其表达的高低对胰腺癌细胞的增殖和转移有显著影响.     

肝母细胞瘤患儿及其母亲孕期特点回顾性分析

目的 探讨肝母细胞瘤发生的危险因素,包括婴儿出生以及孕产妇分娩相关的特征.方法 采用病例-对照研究设计,收集肝母细胞瘤患儿及其母亲的病历资料,用Logistic回归模型对婴儿特征指标、母亲怀孕与分娩有关指标进行多因素统计检验. 结果发生肝母细胞瘤风险中低出生体质量儿的比值比为26.0(95%可信区间为14.0～65.7).母亲≤20岁和≥30岁的比值比分别为1.5(95%可信区间为0.6～4.6)和2.6(95%可信区间为1.0～6.7).超重和肥胖母亲的比值比为3.2(95%可信区间为1.0～6.7).孕妇吸烟的比值比为2.9(95%可信区间为1.1～4.2),对>2岁及H{生体质量正常儿童影响较大. 结论肝母细胞瘤的发生与患儿出生体质量及孕妇超重、吸烟等因素有关,应重视围产期卫生保健.     

双表达骨形态发生蛋白9、7重组腺病毒载体的构建及其对间充质干细胞C3H10的成骨作用

目的 构建双表达骨形态发生蛋白(BMP)9、7腺病毒重组体并进行初步成骨鉴定.方法 自单一表达的BMP9或BMP7 AdEasy质粒上扩增BMP9和BMP7基因序列,先后定向亚克隆至同一穿梭质粒pASG2,获得双表达穿梭质pASG2-BMP9、7.酶切、PCR鉴定及测序正确后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组获得双表达BMP9、BMP7腺病毒质粒,转染至HEK293细胞中包装和扩增得到高滴度双表达BMP9、BMP7腺病毒,体外转染C3H10细胞,碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色检测其早晚期成骨作用.结果 成功构建双表达BMP9、BMP7的腺病毒,RT-PCR证实双表达腺病毒在C3H10细胞中表达,其转染的C3H10细胞早期碱性磷酸酶染色及晚期钙茜素红染色活性较单一表达的BMP7或BMP9腺病毒组增强.结论 成功构建双表达BMP9、BMP7的重组腺病毒载体,其重组体具有定向诱导C3H10细胞成骨分化的能力.