马凡综合征FBN1基因单倍型连锁分析

目的　建立一种微卫星多态性检测法对马凡综合征(MFS)家系成员进行原纤蛋白 - 1基因 (FBN1 )单倍型分离分析 ,探讨 FBN1微卫星检测对 MFS症状前诊断的应用价值。　方法　从 4个 MFS家系及 4 0名正常人外周血中提取基因组 DNA,应用 1 5号染色体 FBN1基因侧翼区的 4个微卫星 (m ts- 1～ 4 )为遗传标记 ,以荧光标记引物的聚合酶链反应 (PCR)扩增目的 DNA片段 ,PCR产物用毛细管电泳技术(Capillary Electrophoresis)分析并计算其碱基数 ,对这 4个MFS家系及 4 0名正常人进行单倍型分离分析 (Haplotype-Segregation Analysis)。　结果　毛细管电泳技术检测 FBN1微卫星方法简便稳定 ,重复性好。 4 0名正常人 80条染色体等位基因片段大小与国外报道有一定差异 ;4个 MFS家系致病基因分别与 m ts- 1～ 4的 8/ 7/ 3/ 1 5 ,7/ 6 / 3/ 1 4 ,7/ 7/ 3/ 1 0和 1 3/ 7/ 3/ 1 0单倍型连锁 ,单倍型分离分析结果与家系中患者的临床表型一致。　结论　 (1 )本研究建立的荧光 PCR-毛细管电泳 mts- 1～ 4检测技术灵敏度高 ,重复性好 ,较为简便、高效 ,是协助诊断 MFS的方法 ,便于临床实验室使用。(2 )对 4 0名正常人 80条染色体的检测显示 ,位于 FBN1基因内含子的 4个微卫星标记 m ts- 1～ 4的等位基因片段大小与国外报道有一定     

多种方法结合对一个肾单位肾痨患者家系的基因筛查验证

目的:探讨少年型肾单位肾痨1型(NPHP1)的临床特点基因诊断方法,采用多种方法对其家系进行筛查验证。方法:2018年7月我院基因诊断中心收入1例男性肾衰患儿(14岁),收集分析其临床资料,利用二代测序技术对其进行基因检测。确诊后扩增患儿及其父母弟弟的NPHP1基因内多个微卫星标记以及内参标记位点,同时采用琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳技术,对患儿弟弟进行筛查验证。结果:二代测序结果显示该患儿样本NPHP1基因整体纯合缺失,该变异为致病性变异,结合临床表现确诊为NPHP1。琼脂糖凝胶电泳结果显示该患儿NPHP1基因前后内参标记D2S1896,RanBP11/12阳性,微卫星标记del-2,del-5-(5)2,del-9,del-10,del-16均为阴性;该患儿父母和弟弟NPHP1基因内参和微卫星标记均为阳性。内参及微卫星序列的毛细管电泳结果显示该患儿弟弟NPHP1基因同时存在来自于父亲和母亲的序列片段,排除该致病基因的纯合或杂合缺失。结论:利用毛细管电泳技术检测NPHP1基因微卫星标记,判断该位点纯合或杂合性缺失,简单易行,可作为常规筛查手段辅助肾单位肾痨的诊断。     

毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变

目的：探讨利用毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变的临床应用价值。方法：采用毛细管电泳作SSCP分析，检测20例结肠癌肿瘤标本p53基因第7外显子PCR扩增产物，并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较，最后用DNA序列测定判断其准确性。结果：20例结肠癌标本中，毛细管电泳技术检测出5例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Ca8，Ca14)有突变，而凝胶电泳结合银染技术仅检出4例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Cal4)有突变，测序证实经毛细管电泳所检出的5例标本均存在点突变。结论：对于PCR产物的单链构象多态性分析，毛细管电泳技术是一种更加快速、简便、敏感的方法，可应用于临床筛查基因点突变。     

Alzheimer病与单胺氧化酶B基因的关联分析

目的：论证Alzheimer病(AD)与单胺氧化酶B基因（MAOB）的两个微卫星DNA标记（MAOBI2和MAOBTG）是否存在关联．方法：应用微卫星DNA多态性的方法，计算73例AD患者和81名正常对照者等位基因频率，并对AD与MAOBI2及MAOBTG的各等位基因进行关联分析．结果：得出了正常人和AD病人MAOBI2和MAOBTG的筹位基因频率．关联分析表明，AD与MAOBI2的等位基因176bp存在接近显著的正相关，相对危险率为4.21，x2=2.98，与MAOBTG的等位基因201bp和207bp分别存在接近显著的正相关和负相关，相对危险率分别为4．76和0．14，x2分别为3．73和3.30．结论：Alzheimer病与单胺氧化酶B基因的两个微卫星DNA标记（MAOBI2和MAOBTG）可能不存在显著性关联．     

DYS19,DYS391和DYS439基因座多态性研究

目的 :研究Y 染色体STR基因座在法医学实践中的应用价值 ,对 118名河南汉族男性无关个体的DYS19,DYS3 91,DYS43 9Y STR基因座多态性进行调查。方法 :应用荧光标记引物多重PCR技术和毛细管电泳技术。结果 :DYS19,DYS3 91,DYS43 9三个Y STR基因座分别检出 6,4,3个等位基因 ,三个基因座的基因多样性 (genediversity ,GD)分别为 0 72 17,0 475 4,0 5 780。 118名无关个体中发现 2 8种单倍型 ,其单倍型GD为 0 93 42。结论 :应用荧光标记Y STR复合扩增检验技术在实际检案中具有良好效果。     

一种从口腔拭子中提取DNA的简易方法

目的应用简便方法提取口腔拭子中DNA,并用特异引物扩增,评估该方法的应用价值。方法用1×PCR缓冲液、MgCl2及蛋白酶K混合裂解液在PCR仪上对口腔拭子进行消化,并以该产物为模板,应用角蛋白5基因1号外显子及1号染色体上2个微卫星标记特异性引物扩增,目的片段分别用于测序和毛细管电泳。结果通过上述方法可获得用于PCR反应及后续基因测序及微卫星标记毛细管电泳分型的足量DNA。结论利用PCR缓冲液、MgCl2及蛋白酶K混合裂解液从口腔拭子中提取DNA是一种简单、高效、快速、低成本的方法,更是一种无创的采样方法。     

毛细管电泳法检测肝细胞癌微卫星基因表型的影响因素

目的：分析影响肝细胞癌微卫星—自动毛细管电泳检测结果的技术因素。方法：应用MegaBACE500毛细管电泳测序仪对一组高度多态性微卫星PCR扩增产物进行电泳，应用Genetic Profiler软件进行基因表型分型，比较PCR扩增产物在不同处理条件下对基因分型的影响。结果：PCR反应体系残留混合物(dNTP、引物和盐离子的浓度等)对基因分型的结果有明显的影响，当PCR体系中益离子和DNA的浓度比＞10000：1时可使等位基因片段分析系统评分出现偏差而导致结论错误，基因组DNA—PCR样品浓度在50ng/μl时较为合适。结论：毛细管电泳测序体系中PCR反应体系残留混合物的浓度是影响基因分型结果的一个重要因素。     

标记PCR结合毛细管电泳检测Y染色体AZF微缺失

目的联合应用标记PCR与毛细管电泳技术,建立Y染色体AZF微缺失快速检测新方法。方法以标记5FAM或JOE荧光基团引物,经一管多重PCR,获得扩增产物,在ABI3100-AVANT毛细管电泳仪上检测并分析结果。以常规检测方法验证。结果检测134例生精障碍患者中发现AZFc微缺失6(6/134)例,AZFb c微缺失1(1/134)例。常规检测方法得到与之相符结果。结论建立了适合临床应用的快速检测Y染色体AZF微缺失的新方法。     

中国汉族人群DXS15位点多态性研究及其应用

目的　研究中国人群FⅧ基因旁微卫星序列DXS 15的多态性。方法　用聚合酶链反应 (PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法 ,检测 67名中国汉族人共 10 3条X染色体DXS 15位点的重复序列长度变化。结果　中国人群中该位点有 8种等位片段 ,多态信息量 ( polymorphisminformationcontent,PIC)为 0 .84 4。应用该位点多态性对一血友病甲家系进行连锁分析 ,一名可疑携带者被确认为正常人。结论　该位点为血友病甲的高多态遗传标记之一 ,对血友病甲的携带者诊断和产前诊断具有重要价值     

毛细管无胶筛分电泳在苯丙氨酸羟化酶基因短串联重复序列分析及苯丙酮尿症基因诊断中的应用

应用毛细管无胶筛分电泳技术苯丙氨酸羟化酶基因内含子３中四核苷酸理复序列的多态性。方法通过毛细管毛细管无胶筛分电泳分离分析特异ＰＣＲ产物。结论与聚丙烯酰胺变性凝胶电泳相比，毛细管电泳具有准确、快速，自动化和高分辨等优点。     

Survivin基因蛋白在子宫内膜腺癌组织的表达

目的　测定 Survivin在子宫内膜腺癌组织中的表达。　方法　采用 SP免疫组织化学方法 ,对 39例子宫内膜腺癌 ,10例子宫内膜增殖症和 10例增殖期子宫内膜进行 Survivin检测。　结果　 30例子宫内膜腺癌 Sur-vivin阳性 (76 .92 % ) ,子宫内膜增殖症和增生期宫内膜均阴性。　结论　 Survivin可作为子宫内膜腺癌诊断标志物     

宫颈癌P53基因第6,7外显子突变的检测

（１）目的 探讨人宫颈癌Ｐ５３基因突变与临床病理特征的关系。（２）方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性酶切片断长度多态性分析（ＲＦＬＰ）技术,检测３４例宫颈癌第６,７外显子的突变。（３）结果 检出突变６例,突变与临床分期,病理学分级有关,而与年龄、组织学类型无关。（４）结论 Ｐ５３基因突变是宫颈癌发生的原因之一。     

血清乙肝病毒X基因的检测方法及意义

目的 探讨血清乙肝病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因的检测方法及肝病患者Ｘ基因检测的意义。方法 通过ＰＣＲ扩增法探讨ＨＢＶ Ｘ基因的检测方法,对扩增产物的序列进行测序分析,并对３０例肝癌及３２例肝硬化患者血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ与Ｘ基因进行检测。结果经琼脂糖电泳与序列分析表明,扩增产物与Ｘ基因序列一致。血清学检测显示,２例肝癌与２例肝硬化患者血清中Ｘ基因检测阳性,但ＨＢｓＡｇ检测阴性。结论 应用ＰＣＲ法能在血清中扩增出完整Ｘ基因片段,为研究Ｘ基因的序列变化与肝癌发生的关系提供了一个有效途径。部分肝病患者血清ＨＢｓＡｇ阴性,但在血清中能检出Ｘ基因,提示肝组织中存在Ｘ基因整合。     

Amp-FLP连锁分析对DMD基因诊断的价值

①目的　探讨扩增片段长度多态性（Ａｍ ｐ－ＦＬＰ）连锁分析对杜氏进行性肌营养不良（ＤＭＤ）基因诊断中的价值。②方法　运用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,对１０ 个ＤＭＤ家系成员的抗肌营养不良蛋白基因内９个基因区进行了Ａｍ ｐ－ＦＬＰ连锁分析。③结果　１０ 个ＤＭＤ家系中的９ 个先证者,６ 例为外显子缺失,１ 例为内含子缺失,２ 例为非缺失型。④结论　Ａｍ ｐ－ＦＬＰ连锁分析是对ＤＭＤ进行基因诊断的实用方法。     

原发性肾病综合征肾血流动力学多普勒超声研究

目的：探讨原发性肾病综合征（PNS）患者肾血流动力学多普勒超声变化的特征及临床意义。方法：76例经临床、肾穿病理证实的PNS患者分成两组：甲组40例（未治疗者），乙组36例（经治疗症状改善但仍未完全缓解者）。另有40例健康人作为对照组。应用脉冲多普勒超声（PW）观察肾段动脉血流的收缩期最大流速（Vs）、舒张期末速度（Vd）、平均速度（Vm）、搏动指数（PI）、阻力指数（RI）。结果：甲、乙组与对照组间三项参数（Vs、PI、RI）差异有显著性，但甲、乙组间比较差异无显著性。结论：多普勒超声可评价PNS患者的肾血流动力学变化特征，为临床PNS诊断提供一种无创性辅助检测手段。     

多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的 研究外源性多巴胺对多巴胺能神经元的毒性作用,方法 采用体外培养的PC12细胞为模型,以终浓度0.45mmol/L的多巴胺对细胞进行诱导。结果 在透射电镜下可见培养的PC12细胞核染色质明显固缩、断裂,原位末端标记技术显示胞核内散在分布断裂DNA片段,流式细胞仪检测到DNA周期中G0-G1期前出现明显的亚二倍体峰,琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。结论 外源性DA可诱导PC12细胞凋亡。     

胰岛素受体底物-1基因多态性与多囊卵巢综合征

目的 通过检测多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）病人的胰岛素敏感等指标,观察是否存在胰岛素抵抗,对ＰＣＯＳ病人胰岛素受体底物－１（ＩＲＳ－１）基因多态性进行分析,探讨ＩＲＳ－１基因与ＰＣＯＳ的关系,判断其可否作为ＰＣＯＳ胰岛素抵抗的致病基因。方法采用ＰＣＲ技术检测正常人与ＰＣＯＳ病人ＩＲＳ－１的等位基因与基因频率,据不同的基因型（ＧＧ、ＧＡ或ＡＡ）将病人分为３组,比较各组的体重指数、腰臀围比例、黄体生成     

前列腺癌p53基因的点突变

目的 检测前列腺癌组织中Ｐ５３基因突变的发生率,探讨共与前列腺癌发生的。方法 多聚酶链反应－限制性片段长度多态性方法,检测前列腺癌组织中Ｐ５３基因第４号外显子７２位密码子的点突变。结果 前列腺癌ＤＮＡ样本中检出４号外显子Ｐ５３基因点突变４％,其中杂合性估变３６％,纯合性突变８％,对照组前列腺良笥增生未见Ｐ５３基因变化。结论 前列腺癌发生与５３基因突变有一定关系,应用Ｐ矣Ｂｓｔｕ１酶切多态性分析,对     

胃癌组织ras和P53基因突变的检测

（１）目的 研究胃癌组织中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变情况,（２）方法 采用ＰＣＲ ＲＦＬＰ技术,分析４１例胃癌标本中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（３）结果 本组４１例中,１２例（２９．３％）发生Ｐ５３基因突变,１６例（３９．１％）发生ｒａｓ基因突变,１全负时发生Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（４）结论 Ｐ５３和ｒａｓ基因突变与胃癌的发生密切相关,在胃癌的发生中可能起重要作用。     

c-myc反义核苷酸对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的作用

目的 研究c—myc反义核苷酸对体外培养的淋巴瘤细胞系CA46基因表达及诱导凋亡的作用。方法 c—myc反义核苷酸(ASPO)为人工合成的针对c—myc基因的一段外源性基因片段，以无义的寡核苷酸作为对照，导入CA46细胞后观察其基因表达及诱导凋亡的作用。流式细胞仪检测c—myc基因产物表达，荧光染色观察CA46细胞的凋亡形态，流式细胞仪定量检测凋亡百分率，TUNEL检测加用VP16后的CA46原位凋亡。结果 c—myc反义核苷酸(ASPO)作用CA46细胞后，RT—PCR示c—myc mRNA表达降低。荧光染色ASPO组细胞胞体缩小，胞膜完整，核质浓缩，出现黄绿色不规则或局部致密荧光，凋亡细胞约占23．3％，而SPO组及空白组未见明显凋亡细胞，细胞呈均匀绿色荧光。流式细胞仪检测仅用VP16 10mg／L 3d，ASPO作用2d后加VP16 10mg／L 1d及ASPO作用3d均出现凋亡峰，凋亡率分别为16％，72％及52％，而SPO组及空白但均未见凋亡峰。流式细胞仪检测CA46细胞c—myc蛋白为95．3％，经ASPO作用后降为23．7％，同时SPO组c—myc表达率为90．6％，TUNEL检测ASPO组凋亡细胞为25．5％，加用VP16后的CA46凋亡率为36．7％。结论 体外实验中CA46特异地被c—myc反义核酸抑制生长，细胞出现凋亡表现，c—myc mRNA癌基因表达降低。