小RNA干扰骨桥蛋白抑制人U251细胞的体外生长与侵袭

目的:研究慢病毒载体介导的骨桥蛋白(OPN) RNA干扰对人U251神经胶质瘤细胞体外生长和侵袭的影响,并探讨其对神经胶质瘤生长、侵袭的可能机制.方法:应用本实验室已构建并鉴定的OPN特异性短发卡RNA慢病毒表达载体(LV-OPN shRNA)感染U251神经胶质瘤细胞.RT-PCR检测干扰前、后U251细胞OPN mRNA的表达;免疫印迹法检测干扰前、后U251细胞OPN、MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力的变化;Transwell体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化;细胞划痕实验观察细胞迁移能力的变化.结果:与未感染组、空载体感染组相比,LV-OPN shRNA感染组OPN mRNA、OPN蛋白及MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达均明显下降;LV-OPN shRNA感染组细胞增殖、侵袭能力及迁移能力也明显下降.结论:慢病毒载体介导的骨桥蛋白RNA干扰在体外能抑制U251细胞OPN mRNA和蛋白表达, 进而抑制U251细胞在体外的生长及侵袭,因此可以推测OPN是促进胶质瘤增殖和侵袭的基因之一,为胶质瘤的治疗提供新的靶点.     

SRC-1基因在小鼠神经干细胞分化过程中的变化

目的观察类固醇受体辅助活化因子-1(SRC-1)基因在小鼠神经干细胞(NSCs)体外培养分化过程中表达的变化。方法用机械分离和酶消化法从1~3 d小鼠大脑皮质获取NSCs原代细胞,体外培养获神经球,传代并消化,经血清诱导神经球细胞分化。形态学、细胞免疫荧光实验观察神经球形态、Nestin表达鉴定NSCs;抗体分别标记神经元、星形胶质细胞,检测细胞分化d 3、9的细胞类型。RT-qPCR和免疫印迹法检测细胞分化d 0、3、9 SRC-1基因mRNA和蛋白的表达。结果新生小鼠大脑皮质获取的细胞,体外培养能扩增形成神经球,Nestin阳性表达。NSCs分化d 3主要为神经元,d 9主要为星形胶质细胞。与NSCs分化d 0相比,SRC-1表达在分化d 3明显升高,在分化d 9明显降低。 结论 成功分离并获取新生小鼠皮质NSCs。在NSCs分化中,SRC-1表达量有明显变化,分布依次为神经元>NSCs>星形胶质细胞。     

结肠癌及结肠腺瘤细胞核形态计量指标的逐步判别分析

目的 检测结肠上皮异型增生的形态计量指标，探讨其在诊断学中的应用。方法 应用图像分析技术对５３例例结肠癌、３０例结肠腺瘤及１０例正常肠粘膜进行细胞核８项参数的测定。结果 多数九在各组间差异具有显著性（Ｐ〈０．０１），其中核面积、核最大宽径、平均光密度是判别结肠癌变的最佳数，由此建立的判别函数回代符合率达８２．９５％。结论 应用图像分析技术对结肠癌前病变及癌病变进行形态计量分析，可作为鉴别诊断中的重     

骨骼肌RCA-凝集素受体细胞化学电镜技术

应用亲和组化技术研究肌病性骨骼肌纤维膜上凝集素受体分布,为探讨肌病的肌膜结构异常和发病机理提供了新手段,本文应用生物素化 RCA-Ⅰ凝集素为探针,在电镜下     

p16、p53和c-erbB-2蛋白在胃癌的表达及临床意义

目的　研究抑癌基因 p16、p5 3和癌基因 c- erb B- 2在胃癌和癌前病变中的表达及其与胃癌临床病理学特征的关系 ,进一步探讨胃癌发生发展的机制。　方法　运用免疫组织化学方法检测 p16、p5 3和 c- erb B- 2蛋白在胃癌和癌前病变中的表达。　结果　 p16蛋白在正常胃粘膜、肠上皮化生、异型增生和胃癌中表达呈下降趋势 ,异型增生和胃癌中 p16蛋白表达显著低于正常胃粘膜 (P<0 .0 5 ) ,p16蛋白表达降低与胃癌分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移均无明显相关性 ;p5 3蛋白在胃癌中表达显著高于异型增生 (P<0 .0 5 ) ,并且与胃癌分化程度和淋巴结转移关系密切 (P<0 .0 5 ) ;c- erb B- 2蛋白阳性表达与胃癌浸润深度以及淋巴结转移关系密切 (P<0 .0 5 )。　结论　p16、p5 3和 c- erb B- 2在胃癌的发生发展过程中起着协同促进的作用。检测 p5 3和 c- erb B- 2对判断胃癌的恶性程度和预后有重要意义     

还原型辅酶I四唑氮还原酶的染色方法

还原型辅酶 四唑氮还原酶 (NADH- TR)染色技术是区分 、 型肌纤维结构的重要方法 ,是神经肌病诊断的主要指标之一。该染色方法简便 ,但如果没有把握好一些细节问题 ,将影响染色效果。现将体会介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　肌病患者的肱二头肌或股四头肌活检组织 ,OCT包埋 ,经液氮预冷的异戊烷速冻 ,用 CM30 0 0型恒冷切片机 (德国莱卡公司 )在 - 2 2℃下切片 ,厚度为 4 μm,于- 2 0℃保存。1.2　孵育液的配制　 (1) 0 .2 mol/ L Tris- HCl缓冲液 (p H7.4± 0 .1) 10 ml;加氯化硝基四唑氮 (NBT) 10 m g,电炉加热并搅拌 ,加热…     

胃癌和胃癌前病变Cx43、PCNA的表达及意义

目的　通过观察间隙连接蛋白 Cx4 3和增殖细胞核抗原 (PCNA )在正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌中的表达和分布情况 ,探讨 Cx基因表达与胃癌发生的关系。　方法　运用 SP免疫组织化学方法检测 Cx4 3、PCNA在 70例原发性胃癌 ,6 2例中、重度不典型增生和 16例正常胃粘膜中表达规律。　结果　 Cx4 3在正常胃粘膜 ,中、重度不典型增生和胃癌中表达的阳性率分别为 10 0 % ,83.9%和 17.1% ,三者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。 Cx4 3表达与胃癌的分化程度相关 (P<0 .0 1)。胃癌前病变、胃癌组中的 PCNA较正常胃粘膜组增高 (P<0 .0 1)。 Cx4 3表达与 PCNA呈负相关 (P<0 .0 1)。　结论　 Cx4 3表达降低在胃癌发生发展中起重要作用 ,Cx4 3可做为胃癌早期诊断的指标     

肌球蛋白三磷酸腺苷酶的染色技术

肌球蛋白三磷酸腺苷酶(mlyosin ATPase)定位于骨骼肌，ATP酶染色是鉴别肌纤维类型及分布的最理想的应酶，对神经性肌萎缩和肌源性肌萎缩的诊断有重要的价值。目前要用钙激活法，该方法较为轻典，但其染色效果受多种因素影响；没有一定的经验，每次实验并不一定都能成功。笔者经过多年的实践与摸索，获得较为稳定且满意的结果，现介绍如下。