恒温核酸扩增方法的建立及其扩增产物的鉴定

目的建立一种快速、简便的恒温核酸扩增（ＮＡＳＢＡ）方法。方法用由ＡＭＶＲＴａｓｅ、ＲＮａｓｅＨ、Ｔ７ＲＮＡ聚合酶以及相应的缓冲成分组成的恒温扩增系统，对４例丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区ＲＮＡ序列进行扩增，并通过Ｎｏｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及限制性内切酶对扩增产物进行鉴定。结果经９０分钟或１８０分钟反应后均可扩增出预期大小的产物，放射自显影在预期位置出现阳性杂交信号。扩增产物经聚合酶链反应（ＰＣＲ）及内切酶ＳｍａⅠ消化后产生预期大小的１４４ｂｐ和３５９ｂｐ的片段，第１次ＰＣＲ产物经转录实验后与ＮＡＳＢＡ直接扩增的产物具有较好的同源性。结论ＮＡＳＢＡ法是一种快速简便的核酸扩增方法，此法扩增出的产物具有良好的特异性。     

逆转录双PCR法检测340例慢性肝病患者HCV感染及与HBV感染的关系

本文采用逆转录双PCR法对340不例同慢性肝病患者中的抗—HCV阳性血清进行HCV—RNA检测,66例抗HCV阳性血清检出55例HCV—RNA阳性,HCV—RNA阳性率为16.18％(55/340),在慢迁肝、慢活肝、肝硬化、慢重肝及肝细胞癌中HCV—RNA阳性率分别为10.98％(18/164)、20.59％(7/34)、36.67％(11/30),33.33％(1/3)及16.51％(18/109)。HCV感染在慢性肝病中主要是以与HBV合并感染形式存在,为10.88％(37/340),单一HCV感染仅为5.29％(18/340),结果提示HCV感染可加重慢性乙型肝炎的肝损害,促进病情向重症化发展,而其在肝细胞癌中的意义有待进一步研究。     

乙型肝炎血源疫苗的使用

血源性乙型肝炎疫苗已为人们所熟知,对预防乙型肝炎的感染起着决定性作用。预测将来世界上消灭乙型肝炎之唯一途径即依靠疫苗。血源性疫苗虽然来源较困难,但在近几年内国内最可实施的也就是这种疫苗。众多的流行病学调查结果表明,亚洲地区母婴传播率很高,日本早年有个估计,每年有15万婴儿,约有1万名婴儿要通过母婴传播变成携带者,如作全球性计算,每年出生的婴儿约有60万以上在1岁以内即变成携带者。这个数字是惊人的。但近几年来由于采取了乙肝疫苗及高效价免疫球蛋白(HBIG)的联合阻断,在日本1岁以内婴儿的乙肝感染率降至0.1%,有的地区为0.05%左右,显示了     

丙型肝炎病毒聚合酶链反应直接序列分析方法的建立及应用(英文)

目的探讨快速完成丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ（ＨＣＶｃＤＮＡ）序列分析的方法．方法将聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增与核酸序列分析技术相结合，以ＰＣＲ产物为测序模板，以ｒ３２ＰＡＴＰ标记ＰＣＲ扩增引物为测序引物，用ｔａｑＤＮＡ聚合酶直接测序．结果以琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳回收ＰＣＲ产物制备测序模板可获得最佳测序效果．在需要测定大量标本时，为进一步简化操作步骤，可降低套式ＰＣＲ中第一次扩增反应的ｄＮＴＰ与引物浓度，以第一次ＰＣＲ扩增产物为模板，也可得到较好的测序结果。ＰＥＧ沉淀回收法不能去除非特异性ＰＣＲ产物，对ＰＣＲ直接测序有一定影响．采用此方法首次在一株ＨＣＶＮＳ５ｂ区发现一个新的缺失突变．结论ＰＣＲ直接序列分析是一种简便，快速，经济有效的核酸序列分析方法，适用于丙型肝炎病毒基因组的分析研究．     

酒精性肝病与丙型肝炎病毒感染

酒精性肝病与丙型肝炎病毒感染魏来１陶其敏２ＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｈｅｐａｔｉｔｉｓＣ；ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ；ｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ，ａｌｃｏｈｏｌｉｃ；ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ａｌｃｏｈｏｌｉｃ；ｌｉｖｅｒｎｅｏｐｌａｓｍｓ主题词...     

丙型病毒性肝炎患者自然杀伤细胞活性研究

用乳酸脱氢酶(LDH)释放法对16例急性丙肝患者、24例慢性丙肝患者的自然杀伤细胞(NK)活性进行研究，21例健康献血员作为对照。结果发现，慢性丙肝患者NK细胞活性明显低于急性丙肝患者，统计学分析有明显差异(P<0．05)，与正常人相比NK活性也明显降低。并且，NK细胞活性在血清HCV RNA持续感染和间歇感染者也比HCV RNA转阴者有所降低。提示：NK细胞在丙肝发病及病程中可能发生一定变化，在慢性丙肝患者NK细胞活性降低，导致免疫监视功能下降．可能是HCV感染容易慢性化的一个因素。     

82例 HCV RNA 阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析

为了探讨广州地区ＨＣＶ感染的基因型，作者对广州地区不同人群中１０５例抗－ＨＣＶ阳性血清用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行了ＨＣＶＲＮＡ的检测，对其中８２例ＨＣＶＲＮＡ阳性患者血清做了ＰＣＲ产物的限制性内切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，结果显示：ＨＣＶⅡ型感染７８例（９２．１％），ＨＣＶⅢ型１例，ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染３例，４例ＨＣＶⅢ型感染均是肝病患者，初步表明广州地区ＨＣＶ感染大多数属Ⅱ型。     

~3H乙肝病毒DNA探针在分子杂交检测血清中乙肝病毒DNA的临床应用

自从1983年本所建立斑点分子杂交方法检测血清乙肝病毒DNA以来,(以下简称斑试)有数篇报导应用~(32)P乙肝病毒DNA探针进行临床检测。说明斑试敏感、特异,并证实了乙肝病毒DNA与HBeAg、Dane颗粒、DNAP之间有良好的相关性,一些资料表明将~(32)P乙肝病毒DNA探针应用SouthernBlot法检测肝组织内乙肝病毒DNA状态。~3H乙肝病毒DNA探针过去多用于肝组织内病毒的原位杂交。我们应用缺刻转移标记制     

腺病毒介导的白细胞介素-12表达对丙型肝炎病毒包膜2基因免疫的调节

目的 观察腺病毒介导表达白细胞介素-12(IL-12)对调节丙型肝炎病毒(HCV)包膜基因2(E2)诱导免疫应答的影响。方法 以NIH 3T3细胞表达HCVE2糖蛋白，纯化后用于酶免疫分析法检测抗E2抗体；以表达HCVE2糖蛋白的SP2／0细胞^3Cr释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答；以293细胞繁殖表达重组IL-12亚单位p35和p40的腺病毒ADIL12。6～8周龄BALB／C鼠右后肢股四头肌注射表达HCVE2的质粒，同时经腹腔注射ADIL12。分别于2、3、4周尾静脉采血检测抗E2抗体，4周处死动物分离脾细胞检测CTL应答。结果 表达HCVE2的基因免疫可有效诱导特异性抗E2体液免疫应答。腹腔注射后，外源性IL-12微量表达。微量表达的外源性白细胞介素-12不影响特异性抗E2体液免疫应答。同时，显著增强特异性CTL应答的作用。结论 腺病毒微量表达的IL12对HCV E2基因免疫诱导的特异性CTL应答具有调节作用。     

努力规范肝脏疾病的免疫学诊断

病毒性肝炎和非病毒性肝脏疾病诊断和监测是目前临床面临的重要问题 ,不断提高肝脏疾病免疫学诊断的质量 ,可为临床提供必要的诊断和监测指标 ,也有助于规范临床检测和诊疗工作。一、肝脏疾病免疫学诊断的规范化发展沿革2 0世纪 80年代中期以来 ,酶免疫诊断 (ＥＩＡ)试剂的诞生和质量的不断完善 ,提高了乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)抗原抗体检测和献血员筛查的水平。 80年代末报告的丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)克隆技术 ,则促进了各种重组ＨＣＶ抗原的表达和抗 ＨＣＶ诊断试剂的发展。“七五”期间 ,我国将甲、乙型肝炎系列诊断试剂及国家参考品列为国…