应用酶联免疫吸附试验检测血清桥粒芯蛋白抗体水平监测寻常型天疱疮患者病情变化

目的:研究较大样本寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris,PV)患者,血清抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)1和抗Dsg3特异性抗体酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)指数长期的变化情况,观察其与病情变化的相关性,探讨其用于病情监测、预测疾病复发和指导治疗的可行性。方法:对20例确诊PV的患者进行长期随访,收集患者在各随访时间点的血清,记录每次随访时的病情并进行评分(autoimmune bullous skin disorderintensity score,ABSIS);检测患者血清的间接免疫荧光(indirect immunofluorescence,IIF)滴度、Dsg3 ELISA指数和Dsg1 ELISA指数;利用统计学方法和做图方法分析病情评分与Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度之间的关系。结果:PV患者皮肤和口腔的病情评分,分别与Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度均具有显著性关联(P<0.01),患者疾病活动期和临床缓解期两组间Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度差异均有统计学意义(P<0.01)。各组患者相关性分析发现,Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度几乎均与病情平行波动变化,ELISA指数优于IIF的平行性,并且ELISA指数可以预测病情是否会反复,从而指导治疗。结论:PV患者血清抗Dsg3抗体ELISA指数与病情变化平行波动,可以反映疾病的活动程度,可用于病情监测,并可为临床上预测疾病复发,指导临床调整治疗提供有利的实验室证据。     

人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4片段的克隆和在寻常型天疱疮中免疫识别的初步研究

目的 扩增人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4(desmoglein 4,Dsg4)胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列,为寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris, PV)发病机制的研究提供依据.方法 根据GenBank中的Dsg4序列(登录号为AY177664)分析,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人正常皮肤组织中抽提RNA,逆转录合成cDNA,聚合酶链反应(PCR)扩增皮肤组织桥粒芯糖蛋白4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4目的基因;应用基因重组技术将目的基因分别与质粒pET32a在T4 DNA连接酶作用下相连接,转化E.coli DH5α感受态细菌,用含氨苄青霉素的LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子DNA序列测定鉴定;重组融合蛋白经ELISA法与PV患者、正常对照组血清进行反应.结果 RT-PCR扩增产物经凝胶电泳得到均约为350 bp的4条条带;质粒载体pET32a连接的目的基因经序列测定后与在GenBank登录的Dsg4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4核酸序列完全一致,4个Dsg4胞外区域cDNA读码框架正确;Dsg4 EC1、EC2、EC3和EC4与患者血清反应,而不与正常对照组血清反应.结论 Dsg4胞外区域多肽片断在PV发病中可能有作用.     

天疱疮患者血清抗桥粒芯糖蛋白抗体与疾病临床特征的相关性研究

目的：探讨天疱疮患者血清抗桥粒芯糖蛋白（Dsg）抗体与疾病临床特征的相关性。方法：选择49例天疱疮患者,比较其抗Dsg类别、亚型、滴度与疾病特征的相关性。结果：寻常型天疱疮（PV）患者活动期抗Dsgl、Dsg3抗体阳性率明显高于稳定期（P〈0．05）,落叶型天疱疮（PF）患者活动期抗Dsgl抗体阳性率高于抗Dsg3抗体（P〈0．05）;活动期患者两种抗体滴度随病情加重而明显升高（P〈0．05）;活动期患者血清两种抗体IgG4亚型滴度明显高于IgG1,稳定期患者两种抗体IgG4亚型滴度明显下降且远低于IgG1（P〈0．05）。结论：天疱疮患者血清抗Dsg抗体与疾病表型、病情、活动性存在明显相关性,测定其存在和滴度对临床诊断与治疗有重要指导意义。     

白细胞介素2-重组毒素对活化T淋巴细胞的靶向杀伤效应

利用ＰＣＲ－Ｃｌｏｎｉｎｇ技术和ＤＮＡ重组技术,构建了两类ＩＬ－２－ＰＥ４０＇嵌合基因的表达载体,分别由ＩＰＴＧ和温度（４２℃）诱导表达。在对表达产物进行了酶切位点和片段大小、电泳迁移率、分子量的初步鉴定后,又对融合蛋白的白细胞介素２（ＩＬ－２）和ＰＥ４０＇组分的抗原性进行了ＥＬＩＳＡ鉴定。从菌体蛋白中初步分离纯化了重组毒素,并测定其对细胞表面表达ＩＬ－２受体的活化Ｔ淋巴细胞的靶向杀伤效应及对混合淋巴细胞反应的抑制作用。结果表明,ＩＬ－２－ＰＥ４０＇融合蛋白确实对ＩＬ－２Ｒ＋细胞具有明显的靶向杀伤效应并呈剂量依赖关系,与对照组相比,随着保温时间的延长（６、２４、４８ｈ）,杀伤效应趋于增强（Ｐ＜０．０５）。混合淋巴细胞培养结果显示,该融合蛋白对单相和双相反应均有不同程度的免疫抑制作用（Ｐ＜０．０１）。     

部分特发性1型糖尿病存在谷氨酸脱羧酶65反应性T细胞

目的探讨特发性1型糖尿病（1B型糖尿病）患者是否存在胰岛自身抗原反应性T细胞。方法选择经典1型糖尿病（1A型糖尿病）患者23例,1B型糖尿病29例,健康对照16例;放射配体法检测胰岛自身抗体;连续密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞;酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测谷氨酸脱羧酶（GAD65）反应性、分泌γ干扰素（IFN-γ）的T细胞（IFN-γ-T细胞）。结果（1）IFN-γ-T细胞数（中位数及95％CI表示）1A型糖尿病为：12．0个（10．3～20．9个）,1B型糖尿病：3．5个（3．0～5．7个）,对照：1．0个（0．3～1．8个）。1A型糖尿病的IFN-γ-T细胞数明显高于1B型糖尿病及对照（均P〈0．01）。1B型糖尿病较对照具有更高频率的IFN-γ-T细胞（P〈0．05）。（2）以〉95％CI（对照组）判为IFN-γ-T阳性,1A型糖尿病、1B型糖尿病及对照的阳性率分别为：78．3％（18／23）、48．3％（14／29）及0。（3）3组对植物血凝素非特异性刺激的IFN-γ-T细胞数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论部分1B型糖尿病患者存在GAD65反应性IFN-γ-T细胞,即存在T细胞免疫异常,具有与1A型糖尿病相似的病因及发病机制;诊断1B型糖尿病前应排除IFN-γ-T阳性患者,GAD65 IFN-γ-T检测有望成为糖尿病分型诊断的新指标。     

人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。     

VTRNA2-1在系统性红斑狼疮患者B 细胞中的高表达及其意义

目的： 检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中T和B淋巴细胞中穹窿核糖核酸 2-1(vault ribonucleic acid 2-1,VTRNA2-1)基因的表达水平,初步探索SLE的发病机制。方法： 收集25 例健康对照者 和32 例SLE患者的外周血CD4+ T淋巴细胞,另外再收集62 例SLE患者(其中活动性SLE患者47 例,非活动性患者15 例)和29 例健康对照者的外周血CD19+ B淋巴细胞,采用real-time PCR检测VTRNA2-1 基因的表达水平。采用免疫共 沉淀实验寻找VTRNA2-1 的直接作用蛋白。结果： 通过对SLE 患者和健康对照者外周血T 细胞和B 细胞中的 VTRNA2-1 基因进行检测,发现SLE患者T细胞中的VTRNA2-1 基因表达水平与健康对照者相比较,差异无统计学 意义(P>0.05)。活动性和非活动性的SLE患者外周血B细胞中的VTRNA2-1 基因表达水平与健康对照者相比均显著增 高,差异均有统计学意义(分别P<0.01 和P<0.05)。免疫共沉淀实验证实VTRNA2-1 通过与蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)特异性结合而发挥生物学功能。结论： VTRNA2-1 基因在SLE患者的B细胞中呈高表达,其机制可能是通 过调控PKR而发挥生物学功能。     

登革病毒HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导免疫反应的研究

目的：探讨登革病毒（DENV）HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导DENV血清型间交叉反应性T细胞的效应。方法：基于已鉴定DENV-1中HLA-A*0201限制性CD8+ T细胞表位（NS4b40-48TLYAVATTI）序列,合成在其他血清型中相似的候选表位,采用MHC-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A*0201结合力。采用酶联免疫斑点（ELISPOT）实验研究已鉴定表位及候选表位免疫HLA-A*0201转基因小鼠产生的CD8+ T细胞识别相同及相似表位能力;采用ELISPOT实验研究不同DENV血清型感染HLA-A*0201转基因小鼠是否产生能识别已鉴定表位及候选表位的T细胞反应。结果：DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV与HLA-A*0201具高结合力,但DENV-2中NS4b39-47TLYAVATTF与HLA-A*0201结合力弱。DENV-1-NS4b40-48和DENV-3-NS4b39-47免疫的转基因小鼠脾、淋巴结和外周血中存在可识别DENV-1-NS4b40-48、DENV-2-NS4b39-47和DENV-3-NS4b39-47的交叉反应性CD8+ T细胞。在DENV-1,-2,-3感染的转基因小鼠体内也存在类似的T细胞反应。结论：DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV为新的CD8+ T细胞表位,该表位及已报道表位NS4b40-48TLYAVATTI均可诱导DENV血清型间交叉反应性CD8+ T细胞反应,二者有助于我们研究DENV血清型间交叉反应性CD8+ T细胞的功能以及用于评估DENV候选疫苗的T细胞免疫效应。     

T细胞介导的细胞免疫在寻常型天疱疮中的作用

寻常型天疱疮(PV)是一类危及生命的自身免疫性大疱性皮肤黏膜病,以往认为PV的发生与体液免疫有关,目前认为,除了B细胞的功能异常产生致病性抗体外,T细胞所介导的细胞免疫异常介导了PV患者出现病理性免疫应答。文章介绍了与PV发病相关的HLA-II类抗原,Dsg3特异性的自身反应性T细胞,以及调节性T细胞的最近研究发现。     

CLONING AND EXPRESSION OF THE GENE CODING FOR IL－2（60）－PE40，A MOLECULAR TARGETED PROTEIN

ＣＬＯＮＩＮＧＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＨＥＧＥＮＥＣＯＤＩＮＧＦＯＲＩＬ－２（６０）－ＰＥ４０，ＡＭＯＬＥＣＵＬＡＲＴＡＲＧＥＴＥＤＰＲＯＴＥＩＮＺｈａｎｇＭｅｎｇ（张萌）ＺｈａｏＸｕｅ（赵雪）ＬｉＨｕａｎｌｏｕ（李焕娄）ａｎｄＬｕＳｈｅｎｇ...     

Ag43／FGFR-1嵌合蛋白疫苗抗小鼠纤维肉瘤血管生成的实验研究

目的：利用Antigen43（Ag43）／成纤维细胞生长因子I型受体（FGFR一1）重组嵌合蛋白作为疫苗,了解其是否具有抑制小鼠肿瘤生长的作用,并初步探讨其作用机理。方法：40只BALB／c雌性小鼠接种MethA细胞后第7天,随机分为Ag43／FGFR．1蛋白免疫组（AF组）、A酗3蛋白免疫组（Ag43组）、FGFR—1蛋白免疫组（FGFR一1组）和生理盐水对照组（NS组）4组,每组10只,观察免疫治疗后的荷瘤小鼠肿瘤体积和生存曲线,分别用免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管密度（MVD）,免疫印迹（Western blot）方法检测抗自身FGFR—1的抗体,酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞的数量。结果：Ag43／FGFR-1组与FGFR-1蛋白、A甜3蛋白、生理盐水对照组肿瘤组织MVD计数分别为11．9±2．3、59．6±3．8、60．6±1．2和61．9±3．4（P〈0．01）;与对照组相比,Ag43／FGFR-1组肿瘤体积明显变小（P〈0．01）,存活时间明显延长（P〈0．01）,血清中发现含有抗自身FGFR-1的抗体且发现小鼠脾脏中分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞数目明显增多（P〈0．01）。结论：Ag43／FGFR-1蛋白质疫苗能够诱导荷瘤鼠产生特异性免疫反应,从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤的生长。     

IL-2和IL-7对优化检测1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶65 特异性T细胞反应的比较

目的：探讨何种细胞因子(IL-2或IL-7)及其最佳浓度能够最有效地改善酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot，ELISPOT)检测1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65，GAD65)特异性T细胞反 应的效率。方法：选取20例1型糖尿病患者(A组)及年龄和性别均匹配的16例正常对照者(B组)；Ficoll法分离外周血 单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，以人GAD65、内对照、巴斯德五合一疫苗为抗原，加入不 同浓度的IL-2[0 U/mL(1组)、0.5 U/mL(2组)、2.5 U/mL(3组)和12.5 U/mL(4组)]，ELISPOT检测上述各浓度组分泌干 扰素- γ (interferon-gamma，IFN-γ)的CD4+T细胞，比较各浓度组的GAD65孔(信号)、内对照孔(背景)的斑点数、斑点 净值以及刺激指数(即信噪比，stimulating index，SI)；另选取21例1型糖尿病患者(C组)及12例正常对照者(D组)，检 测针对GAD65抗原的特异性T细胞反应，比较联合IL-2(2.5 U/mL，上述实验已证明其为最优浓度，5组)与联合IL-7 (0.5 ng/mL，6组)所产的斑点数和SI。结果：1)A组在加入IL-2刺激后，各浓度组中GAD65反应性T细胞数均较A1组增 高，而各浓度下的内对照孔的斑点数亦呈比例升高。各浓度组斑点净值比较显示：A4组与A3组差异无统计学意义 (P>0.05)，而SI的比较则提示A3组最高；且仅A3组的SI(2.8)高于B3组(1.5)，差异有统计学意义(P<0.05)。2)C6组及D6 组的GAD65孔斑点数均分别略高于C5组及D5组，且C6组及D6组的斑点数增幅也分别高于C5组及D5组，但差异均无 统计学意义(P>0.05)。C5组的斑点净值(5.5)和SI(2.8)均显著高于C6组的斑点净值(4.3)和SI(1.8)，差异均有统计学意义 (均P<0.05)。结论：2.5 U/mL为ELISPOT检测1型糖尿病患者GAD65特异性T细胞反应的IL-2最佳浓度；IL-2较IL-7更有 利于改善ELISPOT检测的SI。     

新型重组免疫抑制蛋白B7-2-L-PE40KDEL的分子构建与生物活性及结构特性

目的：构建重组B7－2－L－PE40KDEL融合蛋白,特异性杀伤CD28高表达的T细胞,选择性阻断T淋巴细胞活化过程中的B7：CD28／CTLA－4共刺激信号系统,由此诱导免疫耐受,特异性防治移植物抗宿主疾病（GVHD）和宿主抗移植物疾病（HCGD）。方法：采用基因融合序列重叠延伸（SOE）策略,构建新型重组pRSETA-B7-2-L-PE40KDEL外毒素融合蛋白的原核表达载体,实现融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,利用亲和层析等方法进行蛋白质纯化。对该融合蛋白的结构特征诸如等电点、柔性等进行模拟分析。采用MTT法对其特异性杀伤高表达CD28受体的T细胞的活性进行测定。结果：构建并高效表达了B7－2－L－PE40KDEL融合蛋白,所获融合蛋白的纯度大于95％。该融合蛋白的结构特征模拟分析的结果显示,其柔性及抗原性、亲水性表位均未显著改变。活性测定显示,该重组融合蛋白能有效特异性地杀伤高表达CD28的人T淋巴瘤细胞系,而对未来表达CD28的人白血病细胞系则无任何杀伤。结论：具有靶向性免疫抑制活性的新型重组B7－2－L-PE40KDEL毒素融合蛋白的构建、表达对特异性防治GVHD和HVGD可能产生积极的影响。     

干扰素治疗慢性乙型肝炎患者B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系

目的初步探讨聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞和mDCs上共刺激分子B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系。方法纵向观察接受聚乙二醇干扰素α-2a治疗的28例CHB患者其mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达变化,分析B7-H1/PD-1表达与聚乙二醇干扰素α-2a治疗效果之间的关系。结果聚乙二醇干扰素α-2a治疗12周时,早期病毒学应答组患者B7-H1在CD3＋T细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、mDC上表达及PD-1在CD3＋T细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞上表达水平均明显低于非早期病毒学应答组患者,两组差异显著,P值分别为0.009,0.009,0.009,0.042,0.004,0.017,0.004。结论聚乙二醇干扰素α-2a抗病毒疗效可能与CHB患者mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达相关。     

4-1BBL/4-1BB信号对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞活化的影响

目的:探讨4-1BBL/4-1BB信号对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞活化及共刺激分子表达的影响。方法:用CD3单抗刺激SLE患者外周血单个核细胞,并用抗4-1BBL单抗阻断4-1BBL/4-1BB共刺激信号,流式细胞术检测阻断前后T、B细胞上4-1BB、CD40L、4-1BBL、CD40以及CD69表达水平。结果:SLE患者T细胞上CD69表达明显高于正常对照组(P<0.01);SLE患者外周血T细胞上4-1BB、CD40L和B细胞上4-1BBL、CD40表达明显高于正常对照组(P<0.01),活化后T细胞上共刺激分子表达升高更加明显(P<0.01);抗4-1BBL单抗阻断后4-1BB、CD40L表达明显下降(P<0.01),B细胞上CD40表达下降,与SLE未活化组和活化组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SLE患者外周血T、B细胞活化水平升高,4-1BBL/4-1BB信号对其活化状态维持可以起重要作用。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对食管癌EC9706细胞杀伤作用的实验研究

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对食管癌EC9706细胞的杀伤作用.方法:流式细胞仪检测EC9706细胞NKG2D配体的表达,乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,裸鼠体内实验验证CIK细胞对肿瘤的影响.结果:EC9706细胞表达MICA和ULBP2,不表达MICB,ULBP1和ULBP...     

重组Ag43-CD154嵌合蛋白诱导抗肝纤维化免疫反应

目的:了解基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43重组嵌合蛋白是否能够诱导产生抗自身抗CD154抗体的免疫反应。方法:将CD154-Ag43重组蛋白作为模式疫苗免疫刀豆素蛋白诱导肝纤维化模型小鼠,用免疫印迹和酶联免疫斑点试验了解是否能够诱导产生抗CD154抗体,用HE染色观察肝脏纤维化状态,用Masson trichrome和硝酸银染色观察肝脏组织胶原蛋白和网状纤维。结果:免疫印迹发现CD154-Ag43免疫的小鼠可以有效产生抗自身CD154抗体,酶联免疫斑点试验发现脾脏中有特异分泌抗CD154抗体的B淋巴细胞。肝脏组织HE染色发现CD154-Ag43免疫的肝纤维化模型小鼠肝脏纤维化明显轻于对照组,并且肝脏胶原蛋白和网状纤维也明显少于对照组。结论:基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43嵌合蛋白有可能是一种防治肝纤维化的有效模式疫苗。     

嵌合锚定T细胞致癌胚抗原阳性胃癌细胞的凋亡效应

目的探讨CEA靶向性嵌合锚定T细胞的制备方法,并检测其活化功能及诱导CEA阳性胃癌细胞的杀伤活性。方法分离外周血单个核细胞（PBMC）,然后用免疫磁珠分离得到CD8^＋T细胞。将重组真核表达载体抗-CEA-scFv-CD3 zeta-pcDNA3．0采用脂质体转染上述T细胞以制备CEA靶向性的嵌合锚定T细胞;用流式细胞仪检测其CD69的表达,以检测嵌合锚定T细胞活化功能;将嵌合锚定T细胞与胃癌细胞HGC-27、SGC-7901共培养,检测后者膜联蛋白V的表达,分析嵌合锚定T细胞致胃癌细胞的凋亡效应。结果将已制备的CEA靶向性嵌合锚定T细胞培养12h、24h后,检测T细胞的活化信号CD69表达率分别为40．5％±3．4％、48．3％±2．8％,证明嵌合锚定T细胞具备活化功能。检测与嵌合锚定T细胞共培养的胃癌细胞HGC-27、SGC-7901,凋亡率分别为47．8％±4．2％、18．7％±2．8％,两者之间有统计学意义（P〈0．05）。结论CEA靶向性嵌合锚定T细胞可特异性识别CEA阳性胃癌细胞并促使后者凋亡,这种治疗策略将为胃癌的临床诊治提供一种有希单的涂释。     

Anti-tumor angiogenesis with a recombinant ag43/FGFR1 chimeric protein as a model antigen

In order to investigate the anti-tumor angiogenesis activity with a recombinant Ag43/FGFR1 chimeric protein(AF)vaccine in a mouse H22 hepatoma model,tumor volume and survival rate of the mice were studied at a 3-day interval.Microvessel density(MVD)was detected by immunohistochemistry.The endothelial deposition of autoantibodies within tumor tissues was examined by immunofluorescent staining,and anti-FGFR1 antibody-producing B cells(APBCs)were tested by enzyme-linked immunospot(ELISPOT)assay.Compared with t...     

诊断结核感染的新方法——酶联免疫斑点法技术

酶联免疫斑点法(ELISPOT)技术作为一种新的免疫学检测方法用于结核感染的诊断,其主要原理是应用结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6与CFP-10刺激患者外周血T淋巴细胞使T细胞活化释放干扰素γ,根据活化T细胞数来判定是否存在结核感染,此技术因不受机体免疫力及卡介苗接种的影响,而较皮肤结核菌素试验具有更高的特异性及敏感性,现就ELISPOT的技术原理、发展简史、操作步骤及应用进行综述。