氮杂胞苷对SLE患者外周血T淋巴细胞表达CD70的影响

目的探讨DNA甲基化抑制剂氮杂胞苷对正常人外周血T淋巴细胞表达共刺激分子CD70的影响,以及CD70分子在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的表达。方法分别用流式方法、RT-PCR方法、ELISA方法检测10例健康人外周血T细胞以及10例经氮杂胞苷处理过的健康人外周血T细胞以及20例SLE患者的CD70+CD4+T细胞阳性率、T细胞的CD70mRNA转录水平及血清中的CD70分子分泌水平。结果与健康人相比,活动期、非活动期SLE患者外周血T细胞CD70mRNA表达水平、CD70+CD4+T细胞的阳性率以及血清中CD70蛋白水平均显著升高(P0.05)。且经氮杂胞苷处理过的健康人外周血淋巴细胞CD4+CD70+T细胞阳性率、CD70mRNA转录水平、血清中CD70分子水平较健康人也明显增高(P0.01)。结论SLE患者外周血T淋巴细胞过度表达CD70分子,而且DNA甲基化可能是调控外周血T淋巴细胞的CD70表达的一种基因表达调控机制。     

荧光定量PCR技术验证KLRC1为人类染色体12p12.3-13.2上系统性红斑狼疮相关的候选基因

目的 探讨KLRC1基因是否系统性红斑狼疮(SLE)易感染色体区段12p12.3-13.2上的候选基因,为SLE的分子机制研究提供依据.方法 根据前期基因芯片研究结果,确认位于SLE染色体连锁位点上的基因KLRC1,利用TaqMan实时荧光定量PCR方法在SLE活动期及静止期患者外周血T、B淋巴细胞亚群检测其表达.结果 SLE外周血单核细胞和T淋巴细胞亚群中,KLRC1基因的△Ct值显著高于正常人(P＜0.01),在B淋巴细胞亚群中,KLRC1基因的△Ct无明显变化.在SLE患者外周血T、B淋巴细胞亚群中KLRC1基因的表达在活动期和静止期不存在显著性差异,SLEDAI积分与基因表达水平间无相关性.结论 KLRC1基因可能是12p12-13区段SLE致病的一个候选基因,但是与疾病的活动性无关.     

SLE外周血淋巴细胞亚群变化的临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群变化的临床意义。方法采用流式细胞术检测112例SLE患者(其中活动期60例,非活动期52例)以及150例健康体检者外周血T淋巴细胞亚群(CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+),B淋巴细胞(CD19+),NK细胞(CD3-CD16+CD56+)的表达水平。结果与正常对照组相比,活动期SLE患者CD4+T淋巴细胞、NK细胞百分比明显降低(P0.05);CD4+/CD8+比值明显较对照组低(P0.01)。活动组CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞百分比明显高于非活动组。结论 SLE外周血淋巴细胞亚群的变化与疾病的病程相关联。     

系统性红斑狼疮患者外周血T、B淋巴细胞亚群基因表达谱研究

目的:寻找与SLE有关的致病基因。方法:应用基因芯片技术,获得SLE患者外周血T、B淋巴细胞亚群的基因表达谱,在差异表达显著的基因中挑选4个位于SLE易感区段的基因,通过TaqMan实时PCR技术在55例SLE患者中验证基因的差异表达。结果:确定Bcl-2、KLRC1、EGR-1及IL-4R基因为SLE易感基因的候选基因;实时PCR结果表明,在SLE患者外周血T细胞亚群中,Bcl-2基因及IL-10基因ΔCt值显著低于健康人对照(P<0.01),EGR1基因和IL4R基因的ΔCt值显著高于健康人对照(P<0.01)。在SLE患者外周血B淋巴细胞亚群中,由于B细胞淋巴亚群所占淋巴细胞比率过低,基因检测数据不稳定,故未作统计学分析。结论:Bcl-2、KLRC1、EGR-1及IL-4R与SLE的发病存在密切关系。     

B7-CD28共刺激通路与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞（PBLC）CD28、B7-1（CD80）及B7-2（CD86）的表达及其意义，探讨SLE患者共刺激通路是否异常。方法采用流式细胞仪检测30例SLE患者外周血淋巴细胞的CD28、B7-4，及B7-2，并以15例正常人作为对照。结果SLE患者外周血淋巴细胞中B7-1的表达水平与正常对照组差异无显著性，而B7-2的表达水平明显低于正常对照组（P〈0.01）；SLE患者外周血淋巴细胞中CD28的表达水平明显低于正常对照组（P〈0.05）。结论SLE患者PBLC上的B7-2及CD28的表达降低，影响B7-CD28共刺激通路，可能与SLE的发病有关。     

B7/CD28在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞中的表达及意义

目的:探讨B7/CD28分子在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血淋巴细胞中的表达及意义.方法:采用流式细胞仪检测69例AS患者和50例健康对照者外周血淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达情况,检测CD28在CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞上的表达以及B7-1和B7-2在CD19 B细胞上的表达情况.用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平.结果:AS患者CD3 、CD3 CD4 、CD19 细胞较正常对照组增高(P＜0.05),CD3 CD8 T细胞较正常对照组降低(P＜0.05);AS患者CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞上的CD28、CD19 B细胞上B7-1和B7-2的表达较正常对照组增高(P＜0.05);AS患者血清中IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高(P＜0.01).结论:B7/CD28分子的异常表达可能与AS患者T淋巴细胞和抗原呈递细胞(APC)的功能变化有关.B7-1低水平与B7-2的高水平表达表明,AS患者T细胞的活化可能主要是通过CD28与B7-2的交联传递共刺激信号,介导以Th2型反应为主的免疫应答反应,产生大量的免疫球蛋白.     

CD8+调节性T细胞亚群在系统性红斑狼疮患者外周血中分布的初步研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD8 CD28-调节性T细胞和CD8 CD28 效应性T细胞的比例,以及CD8 CD28-/CD8 CD28 细胞间的比值及其临床意义。方法:对37例SLE患者及15例健康对照新鲜外周全血以双抗体标记流式细胞术测定CD8 CD28-、CD8 CD28 T细胞亚群比例,计算CD8 CD28-/CD8 CD28 细胞间比值,并分析以上数据与SLE活动度、SLE活动性评分(SLEDAI)、免疫球蛋白增高或补体下降或肾损害的关系,观察激素治疗对以上数据变化的影响。结果:(1)稳定期SLE患者外周血CD8 CD28-T细胞群比例较正常对照及活动性SLE显著升高,而高活动性SLE患者CD8 CD28 T细胞群比例显著降低,同时CD8 CD28-/CD8 CD28 细胞间比值显著升高;(2)SLEDAI与CD8 CD28 T细胞亚群比例存在负相关(P<0.05),与CD8 CD28-/CD8 CD28 细胞间比值存在正相关(P<0.05);(3)SLE患者中补体水平降低者较补体水平正常者、有肾损害者较未发生肾损害者CD8 CD28-/CD8 CD28 细胞间比值显著升高;(4)对10例活动性SLE患者进行追踪,经激素治疗达到稳定期后,其CD8 T细胞、CD8 CD28-T细胞比例及CD8 CD28 T细胞比例均显著增高。结论:SLE患者体内免疫系统紊乱可表现在CD8 T细胞亚群比例改变上,其中CD8 CD28 T细胞群比例以及CD8 CD28-/CD8 CD28 细胞间比值改变可能反映了细胞免疫功能的紊乱,而CD8 CD28-调节性T细胞比例增高与病情活动的控制有关;CD8 CD28-/CD8 CD28 比值与病情活动性和补体异常及肾损害相关,可以作为病情监测的指标。     

4-1BBL/4-1BB信号对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞活化的影响

目的:探讨4-1BBL/4-1BB信号对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞活化及共刺激分子表达的影响。方法:用CD3单抗刺激SLE患者外周血单个核细胞,并用抗4-1BBL单抗阻断4-1BBL/4-1BB共刺激信号,流式细胞术检测阻断前后T、B细胞上4-1BB、CD40L、4-1BBL、CD40以及CD69表达水平。结果:SLE患者T细胞上CD69表达明显高于正常对照组(P<0.01);SLE患者外周血T细胞上4-1BB、CD40L和B细胞上4-1BBL、CD40表达明显高于正常对照组(P<0.01),活化后T细胞上共刺激分子表达升高更加明显(P<0.01);抗4-1BBL单抗阻断后4-1BB、CD40L表达明显下降(P<0.01),B细胞上CD40表达下降,与SLE未活化组和活化组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SLE患者外周血T、B细胞活化水平升高,4-1BBL/4-1BB信号对其活化状态维持可以起重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4＋T淋巴细胞中miRNAs表达谱分析

目的 通过基因芯片技术筛选系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T淋巴细胞中miNRAs的表达情况,寻找SLE与健康者外周血CD4＋T淋巴细胞中差异表达的miNRAs,探讨CD4＋T淋巴细胞参与SLE的发病机制.方法 采集43例SLE患者作为实验组,23例健康者作为对照组,取受试者外周静脉血,用磁珠分选法分离外周血CD4＋T淋巴细胞,提取RNA进行芯片分析,筛选差异表达的miRNAs.其筛选结果通过荧光实时定量PCR在43例重度活动期SLE患者和23例健康者中进行验证.结果 与对照组相比,SLE患者外周血CD4＋T淋巴细胞中有13个miNRA表达差异具有统计学意义（P＜0.05）,其中上调基因8个,下调基因5个.进一步通过荧光实时定量PCR检测了miR-NAs的表达情况,最终确定miR 410与miR-181在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显下调,miR-31在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显上调.结论 CD4＋T淋巴细胞中的miRNA很可能参与了SLE患者的病情活动.     

红斑性狼疮患者体液免疫和细胞免疫变化规律的研究

对 30例红斑性狼疮患者 (SLE)的外周血进行了细胞免疫检测与体液免疫检测 ,与正常对照组相比 ,SLE患者SIL - 2R、TNF -α水平明显升高 (P <0 .0 1) ,T细胞亚群CD3 低、CD4高、CD8低 ,CD4/CD8比值下降 ,B淋巴细胞增加。结果显示SLE患者T淋巴细胞和B淋巴细胞调节和制约失调。     

系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞中TLR9的表达及其临床意义

目的:研究Toll样受体9(TLR9)在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血B淋巴细胞中的表达,分析TLR9与疾病活动和药物治疗的关系。方法:使用流式细胞仪检测63例确诊的SLE患者和25例健康人外周血CD19+B淋巴细胞上TLR9的表达情况,比较活动期治疗前后、非活动期和健康对照组B细胞上TLR9的表达差异。结果:活动期SLE患者治疗前外周血CD19+B细胞TLR9的表达率高于治疗后、非活动期SLE患者及正常对照组(P<0.01);活动期SLE患者经治疗B细胞TLR9表达率明显降低,但仍高于非活动期和正常对照组(P>0.05);SLE患者外周血B细胞TLR表达与系统性红斑狼疮疾病活动度评分(SLEDAI)正相关(P<0.05)。结论:TLR9在外周血B细胞可作为判断SLE患者疾病活动度和药物治疗效果的参考指标。     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞表型分析

目的 了解Ｔ淋巴细胞亚群、Ｂ细胞及自然杀伤细胞（ＮＫ细胞）在活动期ＳＬＥ患者中的改变,探讨这些免疫细胞在ＳＬＥ发病机理中的作用方法 采用微量微量全血标记免疫荧光染色和流式细胞仪,对３８例活动期ＳＬＥ患者及２０例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测。结果 ３８例活动期ＳＬＥ患者ＣＤ４＾＋细胞和ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值降低（Ｐ〈０．０１）,ＣＤ３＾＋细胞、ＣＤ４＾＋细胞与正常对照组比较无统计学差异（Ｐ     

系统性红斑狼疮患者Fas和CD40L表达的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者凋亡调节蛋白受体Fas及共刺激分子CD40L的表达情况及其相互之间的调节。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测SLE患者和正常人血清sFas和sCD40L的水平并分析两者之间的相关性;同时分离10例SLE患者和10例正常对照的外周血淋巴细胞：①将细胞培养48 h后,采用流式细胞仪检测T细胞亚群表面Fas及CD40L的表达情况;②在培养过程中分别加入抗FasL抗体阻断Fas信号及抗CD40L抗体阻断CD40L信号后,观察T细胞亚群表面CD40L及Fas的表达。结果①SLE患者血清sFas和sCD40L平均水平分别为4.18μg/L和5.87μg/L,显著高于正常对照组2.27μg/L和2.31μg/L,且SLE患者血清sFas活动期高于稳定期（P〈0.01或P〈0.05）;sFas、sCD40L水平与SLEDAI（疾病活动指数）之间存在一定的正相关性（r=0.688,r=0.253,P均〈0.05）,但sFas与sCD40L水平之间未显示明显相关（r=0.201,P〉0.05）。②经细胞培养后,SLE患者CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面Fas表达增加,与正常对照组比较,差异有显著性（P〈0.01或P〈0.05）;SLE患者CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面CD40L表达增加,与正常对照组比较,差异有显著性（P均〈0.05）。③SLE患者CD4（＋）及CD8（＋）T细胞上Fas与CD40L表达均呈正相关关系（r=0.311和r=0.517,P均〈0.05）。④加入抗FasL抗体阻断后,CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面CD40L表达下降,与阻断前比较,差异有显著性（P〈0.05）;加入抗CD40L抗体阻断后,CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面Fas表达与阻断前比较差异无显著性（P〉0.05）。结论SLE患者血清sFas和sCD40L水平升高且呈正相关关系;T细胞亚群表面Fas及CD40L高表达且呈正相关关系;T细胞上Fas的表达调控CD40L的表达。说明凋亡调节蛋白Fas及共刺激分子CD40L可能共同参与SLE的发病过程。     

CD40和CD40L在大鼠炎症性肠炎外周血和结肠组织单-核细胞中的表达

目的:研究CD40和CD40L在大鼠炎症性肠炎(IBD)外周血和结肠组织单-核细胞(MC)中的表达与免疫功能紊乱的关系。方法:利用流式细胞仪对20例炎症性肠炎大鼠和20例正常对照组外周血、结肠组织MC上CD3、CD4、CD8、CD19的表达进行检测;CD40L在CD4+T和CD8+T细胞上的表达及CD40在CD19+B细胞上的表达进行检测。结果:IBD大鼠外周血、结肠组织CD3+、CD3+CD4+、CD19+细胞较正常对照组显著增高,CD3+CD8+细胞较正常对照组显著降低;IBD大鼠外周血、结肠组织CD4+T细胞和CD8+T细胞上的CD40L、D19+B细胞上CD40的表达都较对照组显著增高,且结肠组织上的表达又比外周血高。结论:CD40-CD40L途径在IBD免疫功能紊乱中可能起了重要作用。     

Expression of Inducible Co-stimulator in Peripheral Blood T Lymphocytes in the Patients with Systemic Lupus Erythematosus

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a pro-totypic systemic autoi mmune disease[1], whichcharacterized by B cell hyperactivity in associationwith the generation of autoantibodies .In both hu-man SLEand the murine model of lupus nephritis ,it has been shown that activation of autoantibody-producing B cells is dependent on T cell helpthrough cytokines and costi mulatory molecules .Recent report demonstrated that the anergic stateof autoreactive B cells is reversed by T helper cellsand regul…     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶信号通路异常活化

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)信号通路活化情况及其临床意义.方法 检测28例SLE患者的T细胞PI3K通路活性.8例类风湿关节炎患者为对照,另以15名健康者为正常对照组.外周血T细胞分离采用RosettSep T细胞提取试剂盒提取,PI3K活性采用免疫沉淀和ELISA法,Akt及其磷酸化蛋白运用免疫印迹法,T细胞增殖采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性均显著高于正常对照组和类风湿关节炎组;SLE患者T细胞在体外培养24 h后PI3K和Akt活性与正常对照组差异无统计学意义,而正常对照组T细胞用SLE患者血清孵育24 h后PI3K和Akt活性显著增高;PI3K特异性抑制剂LY294002显著抑制SLE患者T细胞增殖(125±21 vs 197±26,P<0.05)及分泌白细胞介素(IL)-6和IL-10[分别为(425±69)ng/L vs(816±116)ng/L,P<0.05;(114±18)ng/L vs(207±31)ng/L,P<0.05].新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性与SLEDAI无相关关系.结论 SLE患者T细胞存在PDK信号通路异常活化,并与T细胞增殖和细胞因子分泌有关,SLE外周血中可能存在激活该通路的血清因子.     

免疫磁珠法检测系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群及其意义

目的探求系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞CD4、CD8亚群细胞数目的变化.方法采用免疫磁珠方法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离SLE患者外周血CD4、CD8 T淋巴细胞并计数.结果SLE患者CD4及CD4/CD8较正常对照明显减少(CD4,P=0.001;CD4/CD8,P=0.046),CD8细胞无明显差异.结论SLE患者T淋巴细胞CD4及CD8亚群及两者的平衡关系存在异常,其中以CD4 T细胞减少更加显著.     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴及单核细胞表面B7-H1表达研究

目的 探讨B7家族共刺激分子B7-H1在慢性乙型病毒性肝炎(乙肝)患者外周血淋巴细胞及单核细胞表面的表达情况.方法 利用荧光抗体标记结合多色流式技术,检测慢性乙肝患者外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞群体表面B7-H1分子的表达.结果 在慢性乙肝患者,T、B淋巴细胞表面B7-H1低表达,与健康对照无差异;单核细胞表面B7-H1的表达率为(19.17±11.64)%,显著高于健康对照的(7.30±5.49)%(P＜0.01),且B7-H1的表达与患者血浆ALT水平成正相关(r=0.423,P＜0.01).结论 慢性乙肝患者外周血T、B淋巴细胞表面B7-H1低表达,单核细胞B7-H1表达上调,且与ALT水平正相关,提示B7-H1可能与乙肝病毒感染慢性化相关.