曲古霉素A对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的作用及机制

目的探讨曲古霉素A（TSA）对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及机制。方法用AnnexinV-FITC和PI进行双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TSA对食管癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果 1.0μmol/L的TSA诱导EC9706细胞凋亡率增加（P〈0.05）,且呈浓度依赖性;0.5μmol/L的TSA作用48 h后细胞凋亡率增加（P〈0.05）,呈时间依赖性。TSA处理的EC9706细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;TSA诱导EC9706细胞caspase-8及caspase-9裂解活化,且随作用时间延长逐步升高。结论一定量的TSA可以诱导EC9706细胞凋亡,凋亡原因与Bax表达增强、Bcl-2减少以及凋亡细胞中caspase-8及caspase-9介导的caspase-3活化有关。     

TSA对食管癌细胞系EC9706细胞周期作用及分子机制的探讨

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞 EC9706细胞周期的作用及机制.方法 将浓度为0.5、1.0、1.5 μmol/L TSA作用EC9706细胞24 h,用MTT观察不同浓度 TSA 对 EC9706细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Western Blot检测TSA对食管癌细胞周期相关基因的表达.结果 1.0 μmol/L 浓度的TSA 对EC9706 细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μmol/L浓度之上可明显诱导食管癌细胞EC9706细胞周期阻滞,明显增强p21、p27基因的表达,明显降低 CCND1、CDK4D基因的表达.结论 一定剂量的TSA可抑制食管癌EC9706细胞的生长,通过调控多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关.     

曲古菌素A对食管癌细胞系EC1细胞凋亡的影响

目的:探讨曲古菌素A(TSA)对食管癌EC1细胞凋亡的影响.方法:用DMSO(对照组)和0.3、0.5及1.0μmol/L的TSA处理EC1细胞24h,用Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,West-ern Blot检测4组细胞中Bax及Bcl-2表达的变化.结果:对照组、0.3、0.5及1.0 μmol/L TSA组作用24 h后,EC1细胞凋亡率分别为(2.18±0.37)%、(2.96±0.34)%、(7.41±1.01)%和(14.03±1.23)%,Bax蛋白表达水平分别为(0.42±0.23)、(0.45±0.11)、(1.16±0.28)和(1.89±0.30),Bcl-2蛋白表达水平分别为(1.15 ±0.14)、(1.11±0.15)、(0.59±0.06)和(0.40±0.07),4组间3指标差异均有统计学意义(F=211.96,25.12和33.68,P均<0.001),随TSA作用浓度的增加,EC1细胞凋亡率、Bax蛋白表达均增加,Bcl-2表达减少.结论:一定剂量的TSA可以诱导EC1细胞凋亡,凋亡的发生町能与Bax表达增加和Bcl-2表达减少有关.     

牛膝多糖与锌对小鼠树突状细胞增殖分化和抗原提呈能力的影响

目的 研究牛膝多糖与锌单用及合用在异源性抗原负载的条件下对小鼠树突状细胞 (DC) 增殖分化和抗原提呈能力的影响,并通过体内实验证实其对荷瘤小鼠的免疫效应,探讨其发生机制。方法 无菌处死正常小鼠获取其骨髓细胞,粒细胞-巨噬细胞刺激因子 (GM-CSF) 和白细胞介素-4 (IL-4) 体外诱导骨髓细胞生成 DC,同时培养液中加入不同质量浓度的牛膝多糖 (200、300、400 μg/mL)、锌 (0.02 μg/mL)。通过显微镜、流式细胞检测技术观察牛膝多糖、锌单用与合用在异源性抗原负载的条件下对 DC 的影响,并通过体内实验观察对 H22荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数及肿瘤质量的影响。结果 牛膝多糖和锌单用在异源性抗原负载的情况下能够促进小鼠骨髓源性 DC 的分化、成熟及表面标记 CD86、CD11a 的表达,增强 DC 诱导的细胞毒性T淋巴细胞反应,能够使荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺的质量增加,明显抑制肿瘤的生长,并存在明显量效关系;中剂量为正性效应,高剂量为负性效应;但牛膝多糖和锌合用并不协同增强效应。结论 牛膝多糖和锌在异源性抗原负载的条件下能够通过刺激 DC 的分化成熟,提高其抗原提呈能力,进而起到提高机体细胞免疫的作用。     

转染pcDNA3-hCEA的人树突状细胞抑制MGC803裸鼠移植瘤的生长

目的:探讨转染癌胚抗原基因pcDNA3-hCEA的人树突状细胞(DC)对胃癌细胞MGC803裸鼠移植瘤生长的影响. 方法:采用细胞因子rhIL-4和rhGM-CSF诱导培养法制备人外周血DC,并用Lipofectine向人DC转染pcDNA3-hCEA. RT-PCR检测转染人CEA真核表达质粒的表达. 使用DC(pcDNA3-hCEA)疫苗体外诱导人T淋巴细胞靶向性杀伤反应,并在体内实验中观察DC(pcDNA3-hCEA)对MGC803在裸鼠上致瘤性的影响. 结果:针对特定引物DC(pcDNA3-hCEA)在588 bp处有CEA片段的表达;DC(pcDNA3-hCEA)能够诱导的人T淋巴细胞靶向性杀伤活性(%),在效靶比分别为10∶ 1,20∶ 1,40∶ 1时的结果为19.4±3.8, 24.7±3.7, 38.1±5.4;DC(pcDNA3-hCEA)能显著抑制MGC803的生长,其肿瘤生成日期较对照组延长(中位数10 d vs 6 d, n=5),瘤体生长速度较对照组缓慢,d 23瘤体体积明显小于对照组[(0.24±0.10) cm3 vs (0.65±0.17) cm3, (1.36±0.42) cm3, n=5, P<0.05]. 结论:转染pcDNA3-hCEA的人DC能有效抑制MGC803在裸鼠体内的生长.     

二甲亚砜对人食管癌Eca109细胞细胞周期及DNA聚合酶β表达的影响

目的研究二甲亚砜(DMSO)对人Eca109细胞细胞周期及DNA聚合酶β(polβ)表达的影响。方法用1．5％DMSO处理Eca109细胞，流式细胞仪分析细胞周期的改变，RT—PCR法检测polβ表达水平的变化。结果DMSO处理后的Ecal09细胞，polβmRNA表达明显下调，且细胞周期明显改变，G1／G0期细胞增多，S期细胞减少。结论DMSO可抑制Eca109细胞polβ的表达，使Eca109细胞生长停滞于G1／G0期。     

PBL教学模式在病理生理实验教学中的应用

目的:探讨在病理生理学实验教学中开展以问题为基础的学习教学方法(Problem-Based Learn-ing,PBL)的必要性。方法:以08级临床医学系七年制大三医学生作为研究对象,分为实验组和对照组,实验组实施PBL教学,对照组实施传统教学。实验课结束之后,学生独立书写实验报告,由教师进行评分,对比两者期末考试成绩,并对学生进行问卷调查。结果:PBL组实验报告成绩和期末考试成绩均高于传统教学组。调查结果实验班认可率高于对照班,P<0.05。结论:病理生理学实验中开展PBL教学,对提高学生学习兴趣,培养问题意识、提高分析问题、解决问题的能力,发挥其主观能动性,培养其临床思维具有重要的意义,是培养高素质优秀医学人才的重要途径之一。     

PTEN基因表达对EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响

目的:观察PTEN基因表达水平的变化对食管癌EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响。方法:构建2个靶向PTEN的siRNA载体及1个PTEN表达载体,分别转染EC9706细胞。实验分沉默1组、沉默2组、siRNA载体对照组、PTEN表达组、表达载体对照组和未转染组。RT-PCR、Westernblot法检测转染后各组细胞PTEN基因mRNA和蛋白表达水平。采用CCK-8试验、软琼脂克隆形成实验、流式细胞术和Transwell试验分别检测各组细胞增殖、克隆形成能力、细胞凋亡率及侵袭能力。结果:与未转染组比较,沉默1组、沉默2组PTENmRNA和蛋白表达量均降低,PTEN表达组PTENmRNA相对表达量升高(F=25.762,P<0.001);与未转染组比较,PTEN表达组细胞软琼脂克隆形成数和穿透细胞数均降低,细胞凋亡率增加(F=50.752、29.981、32.193,P均<0.001)。结论:上调PTEN的表达水平可以有效抑制EC9706细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移能力,同时促进细胞凋亡。     

人野生型DNA聚合酶β在NIH3T3细胞中的定位

目的：研究人野生型DNA聚合酶β(wtDNA polβ)在NIH3T3细胞内的定位。方法：将携带人wtDNA polβ的真核绿色荧光表达载体pEGFP—C3—polβ，用脂质体介导的方法转染NIH3T3细胞株，用荧光倒置显微镜观察转染细胞，观察wtpEGFP—C3—polβ融合基因表达。以转染空质粒pEGFP—C3的NIH3T3细胞为对照。结果：转染细胞均有GFP表达，说明转染成功，转染pEGFP—C3—polβ的细胞胞核荧光强度较胞浆强，而空质粒转染细胞胞浆胞核荧光强度无差别。结论：wtDNA polβ在NIH3T3细胞中定位于胞核内。