活血化瘀法运用于心血管疾病之现状

就活血化瘀法作用、在心血管疾病中的应用及注意事项做一简单综述.证明活血化瘀法在治疗心血管疾病方面有显著的疗效.     

IL-2和IL-7对优化检测1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶65 特异性T细胞反应的比较

目的：探讨何种细胞因子(IL-2或IL-7)及其最佳浓度能够最有效地改善酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot，ELISPOT)检测1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65，GAD65)特异性T细胞反 应的效率。方法：选取20例1型糖尿病患者(A组)及年龄和性别均匹配的16例正常对照者(B组)；Ficoll法分离外周血 单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，以人GAD65、内对照、巴斯德五合一疫苗为抗原，加入不 同浓度的IL-2[0 U/mL(1组)、0.5 U/mL(2组)、2.5 U/mL(3组)和12.5 U/mL(4组)]，ELISPOT检测上述各浓度组分泌干 扰素- γ (interferon-gamma，IFN-γ)的CD4+T细胞，比较各浓度组的GAD65孔(信号)、内对照孔(背景)的斑点数、斑点 净值以及刺激指数(即信噪比，stimulating index，SI)；另选取21例1型糖尿病患者(C组)及12例正常对照者(D组)，检 测针对GAD65抗原的特异性T细胞反应，比较联合IL-2(2.5 U/mL，上述实验已证明其为最优浓度，5组)与联合IL-7 (0.5 ng/mL，6组)所产的斑点数和SI。结果：1)A组在加入IL-2刺激后，各浓度组中GAD65反应性T细胞数均较A1组增 高，而各浓度下的内对照孔的斑点数亦呈比例升高。各浓度组斑点净值比较显示：A4组与A3组差异无统计学意义 (P>0.05)，而SI的比较则提示A3组最高；且仅A3组的SI(2.8)高于B3组(1.5)，差异有统计学意义(P<0.05)。2)C6组及D6 组的GAD65孔斑点数均分别略高于C5组及D5组，且C6组及D6组的斑点数增幅也分别高于C5组及D5组，但差异均无 统计学意义(P>0.05)。C5组的斑点净值(5.5)和SI(2.8)均显著高于C6组的斑点净值(4.3)和SI(1.8)，差异均有统计学意义 (均P<0.05)。结论：2.5 U/mL为ELISPOT检测1型糖尿病患者GAD65特异性T细胞反应的IL-2最佳浓度；IL-2较IL-7更有 利于改善ELISPOT检测的SI。     

不同的冻存方法对1型糖尿病患者胰岛抗原特异性T细胞反应的影响

目的:明确何种冻存方案更利于保持1型糖尿病患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcells,PBMCs)对胰岛抗原特异性的T细胞反应,更接近于新鲜细胞的状态。方法:本研究系国际免疫学协会-T细胞工作组(IDS-TCW)牵头的国际标准化研究Freezing Study I。中南大学糖尿病中心选取5例新发的T1D患者和年龄、性别相匹配的5例正常对照。所有对象新鲜分离的PBMCs分为3份,一份进行亚型细胞的流式细胞分析和酶联免疫斑点实验(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT),另两等份分别采用低温和室温冻存方案冻存;1个月后分别按低温和室温方案复苏,以台盼蓝染色判定细胞活力;并行流式细胞分析术和ELISPOT 检测。ELISPOT中4种抗原[包括人GAD65、内对照、Pediacel(巴斯德五合一疫苗)和PMA]均由IDS-TCW中心化实验室盲法标记,盲法测定。以新鲜PBMCs为参照,比较两种冻存方案下PBMCs的复苏率和活力、各亚型细胞比例和ELISPOT检测结果。结果:1) 室温冻存下的PBMCs复苏率和细胞活力均略高于低温冻存方案,但二者差异无统计学意义(分别为61.2% vs 60.1%,77.5%vs 74.9%;P>0.05);2) 相比新鲜细胞,两种冻存方案均会造成一定程度的单核细胞的损失[(3.2±1.1)% (低温)和(3.0±0.9)%(室温) vs (7.0±1.1)% (新鲜);P<0.05];而CD4⁺T,CD8⁺T,B细胞,NK细胞和NKT细胞比例均无明显变化(P>0.05);3)ELISPOT检测结果显示:对多克隆刺激物PMA诱发的T细胞分泌IFN-γ的反应,在新鲜和冻存复苏细胞间无明显差异;记忆性抗原Pediacel和胰岛抗原GAD65刺激下的特异性T细胞反应在冻存复苏细胞均明显差于新鲜细胞,T1D患者新鲜细胞的GAD特异性T细胞反应的SI为5.1,均高于低温(1.3)和室温(1.4)冻存复苏的刺激指数(SI)(均P<0.05);而且仅新鲜细胞的GAD-反应性T细胞的SI和斑点数均明显高于正常对照(5.1 vs 0.9和8.1 vs 0.1,P<0.05),而两种方案下的冻存细胞的SI在患者和对照未发现差异。结论:需要开展更多的研究,在T1D患者中鉴定出一种更接近于新鲜PBMCs反应的冻存方案和T细胞测定方法。