单克隆抗体CD133在内皮祖细胞表达的实验研究

目的 研究CD133在内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）表面表达，为内皮祖细胞的鉴定提供依据。方法 取兔髂骨骨髓，经密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞（mensenchymal stem cell，MSC），在血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子等诱导条件下定向向内皮祖细胞分化，流式细胞仪检测不同时间内皮祖细胞CD133表达。结果 定向诱导分化细胞形态学呈现“鹅卵石”样或“铺路石”样外观，流式细胞仪检测发现细胞表达CD133，并随时间推移表达逐渐下降。结论 内皮祖细胞高表达CD133与培养时间密切相关。     

大鼠骨髓内皮祖细胞的分离、培养和鉴定

目的研究大鼠骨髓内皮祖细胞（EPC）分离、培养并向内皮细胞方向诱导分化的方法和条件。方法从大鼠骨髓中分离单个核细胞．经差速贴壁后取二次贴壁细胞选择性诱导培养2W。以Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色法以及vWF、Flk-1免疫荧光染色法鉴定EPC；流式细胞术（FACS）检测EPC纯度；细胞培养液一氧化氮（NO）含量测定分析EPC功能。结果二次贴壁细胞经诱导培养后3d开始伸展，5d形成集落，7～10d增殖加速并出现条索状结构，2W大部分细胞呈多角形。Dil—ac—LDL、FITC-UEA-1双染．vWF及Flk-1免疫荧光染色阳性率均〉70％。FACS检测其中vWF阳性细胞占77．93％．Flk-1阳性细胞占81．50％。二次贴壁并经诱导培养的细胞培养液中NO含量明显高于普通培养的细胞．但低于成熟内皮细胞（P〈0．05）。结论大鼠骨髓富含EPC，体外诱导培养后可以表现出内皮细胞的部分特征。     

大鼠骨髓源内皮祖细胞分离和培养

目的:研究大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)分离、培养以及诱导向内皮细胞分化的方法。方法:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离单个核细胞,经贴壁后定向诱导培养2周。以CD34、CD133、VEGFR-2、vWF免疫细胞化学、荧光染色法以及Dil-acLDL结合FITC-UEA-1双荧光染色法鉴定EPCs。结果:贴壁细胞经培养诱导后3d开始伸展,4~7 d形成细胞集落,10~21 d增殖加速呈典型的"鹅卵石"样外观,并出现条索状结构且呈"微血管样"排列生长。细胞免疫荧光染色鉴定CD34、CD133、VEGFR-2、vWF阳性,Dil-acLDL联合FITC-UEA-1双染阳性。结论:从大鼠骨髓中分离单个核细胞,体外诱导培养后可以表现出部分内皮细胞的特征。     

肺动脉高压大鼠骨髓内皮祖细胞功能的研究

目的检测实验性肺动脉高压大鼠骨髓内皮祖细胞（EPC）的功能,探讨肺动脉高压发病机制。方法利用野百合碱诱导大鼠发生肺动脉高压,分离骨髓单个核细胞进行体外诱导培养以获得EPC集落,并对其骨髓内皮祖细胞的集落形成能力、增殖、黏附、迁移能力进行检测。结果骨髓单个核细胞在体外培养下能够获得EPC集落,与对照组比较,肺动脉高压实验组诱导生成的EPC数量少（P〈0.05）,CD34和FLK-1阴性比例下降（分别为19.33%±3.27%vs 31.17%±4.40%和33.67%±3.50%vs 44.50%±3.78%,P均〈0.01）,细胞增殖能力下降（0.43±0.08 vs 0.64±0.07,P〈0.01）,贴壁细胞减少（6.835个±1.605个vs 10.175个±1.945个,P〈0.01）,细胞迁移能力下降（7.83个±1.94个vs 11.83个±2.48个,P〈0.05）。结论肺动脉高压的发生与骨髓内皮祖细胞功能的异常存在明显的相关性。     

小鼠骨髓源性内皮祖细胞的培养和表面标志物鉴定

目的 建立一种从小鼠骨髓中分离、培养内皮祖细胞(EPC)的方法,并对EPC多种表面标志物进行鉴定.方法 密度梯度离心法获取小鼠骨髓源性单个核细胞,应用专门培养基EGM-2培养.观察不同时期细胞增殖情况;在培养7d后行DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定及流式细胞检测;应用RT-PCR分析0,4,7d时CD31、CD34、CD45、CD117、CD133、FLK-1、VE-Cad等表面标志物的表达情况.结果 诱导培养的骨髓单个核细胞72 h后基本完成贴壁,8～9 d时贴壁70％～80％可进行传代,2～3周后呈典型的鹅卵石样外观.细胞培养7d后DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞比例为(90.16±6.77)％,流式细胞检测PE-Flk-1、APC-CD133、FITC-CD34均阳性概率为(1.73±0.27)％.RT-PCR结果显示随时间推移CD34、CD117、CD133的表达量逐渐下降,而CD31、FLK-1、VE-Cad等内皮系标志物的表达逐渐增加.结论 密度梯度离心法结合定向诱导培养可获得较多数量的EPC,以流式细胞检测技术为主,结合细胞形态学和功能学对EPC进行鉴定是一种较为理想的方法.     

糖尿病大鼠骨髓内皮祖细胞的培养与鉴定

目的 探讨糖尿病大鼠骨髓来源的内皮祖细胞体外诱导、培养和扩增的方法. 方法 用密度梯度离心法采集糖尿病大鼠骨髓单个核细胞,在含有血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的M199培养基中进行体外培养.应用免疫组织化学和免疫荧光法鉴定内皮祖细胞的CD34和CD133,并通过检测其对FITC标记的UEA-1的吸附和Dil-acLDL的吞噬来进行细胞功能的鉴定. 结果 在培养2天后部分细胞开始贴壁、变大,并逐渐伸展呈梭形.第7天时贴壁细胞增生明显,"集落"样生长.培养第7天细胞CD34和CD133均呈阳性,激光共聚焦显微镜观察显示EPC可以同时吞噬ac-LDL并结合UEA-1. 结论 糖尿病大鼠骨髓可以分离培养出内皮祖细胞,并能体外扩增,为糖尿病内皮祖细胞的移植研究奠定了基础.     

骨髓间充质干细胞在骨髓移植中的应用

间充质干细胞（Mesenehymal Stem Cells，MSC）是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞，是成体干细胞的一种，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富。由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓间充质干细胞（bone marrow meschymal stem cell，BM—MSC）。也因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆，又可称为贴壁细胞或者成纤维细胞集落形成单位（CFU—F）、骨髓基质细胞（MSC）或间充质干细胞或间充质祖细胞（MPC）。许多研究发现，BM—MSC在骨髓移植中有着极其重要的应用价值，一方面在骨髓微环境中支持造血；另一方面，对移植免疫有一定的影响，能够在某些方面减轻移植物抗宿主效应。     

人脐血内皮祖细胞体外诱导分化的研究

目的研究从人脐血中诱导分化出内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）,并对此类细胞进行鉴定。方法术中取健康产妇的新鲜脐静脉血,采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离出单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）,应用添加诱导因子的培养基于体外诱导分化,观察细胞生长状态。培养7d后将贴壁细胞与含Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1的培养基进行孵育并于荧光显微镜下观察,流式细胞仪检测培养细胞表面分子CD34及CD133的阳性率,RT-PCR检测培养细胞表达VEGFR-2mRNA。结果体外诱导7d后90%以上贴壁细胞摄取Dil-ac-LDL呈红色荧光和FITC-UEA-1呈绿色荧光双阳性。流式细胞仪检测CD34及CD133阳性细胞分别为（50.48±5.17）%和（19.12±4.37）%。RT-PCR检验培养细胞VEGFR-2mRNA呈阳性。结论采用密度梯度离心法从人脐血中提取MNCs在体外经诱导分化可以形成EPCs。     

内皮祖细胞灌注供心延长心脏移植物存活时间的实验研究

 目的 研究供体内皮祖细胞（endotherial progenitor cell， EPC）灌注供心对同种异体心脏移植物生存时间的影响。方法 获取Sprague Dawley （SD）大鼠的骨髓细胞，通过密度梯度离心法分离培养单个核细胞，取贴壁细胞选择性诱导培养2周以上，获取内皮祖细胞（EPC）。以Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色法鉴定EPC。20只体重200～250g的雄性SD大鼠为供体，20只体重200～250g的雌性Wistar大鼠为受体，分为4组，每组5对。组I：术后不使用环胞霉素；组II：术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg；组III：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞1×106个，术后不使用环胞霉素；组IV：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞，术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg。观察各组供心存活时间。结果 贴壁细胞经诱导培养后3d开始伸展，5d形成集落，7~10d增殖加速并出现条索状结构，2周大部分细胞呈多角形。Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双染，免疫荧光染色阳性率大于70％。组I、II、III、IV各组供心平均存活时间分别为6.2±0.8、11.6±1.1、9.4±1.1和18.8±1.6d。组II、III、IV移植物的平均存活时间较组I显著延长（P<0.05）。结论 内皮祖细胞灌注合并环胞霉素运用可以延长大鼠心脏移植物的存活时间。     

大鼠骨髓EPC的体外培养和生物学特性鉴定

目的 体外培养、诱导大鼠骨髓内皮祖细胞(EPC),观察EPC的生长特性,并进行鉴定.方法 冲洗大鼠长骨骨髓,用密度梯度离心法收集单个核细胞层,观察细胞在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导体系下生长情况并与未诱导组比较,对培养细胞进行免疫细胞化学检测.于培养3、7、14天采用流式细胞仪检测CD133 /Flk-1 双标记阳性细胞百分率.结果 贴壁细胞呈现团簇样生长、线样排列特殊形态.免疫细胞化学检测贴壁细胞CD133、CD34、Flk-1、Ⅷ因子(vWF)呈阳性表达.流式细胞检测结果显示,各个时间点诱导组CD133 /Flk-1 双标记阳性细胞百分率明显高于未诱导组(P＜0.01).结论 用密度梯度离心法在bFGF培养体系下可以获得较高纯度的EPC,该细胞具有内皮细胞的特性,经过体外诱导可以分化为内皮细胞.     

兔全骨髓培养诱导分化获取内皮祖细胞

目的探讨采用将兔全骨髓直接体外培养诱导分化的方法获取内皮祖细胞(EPCs),同时观察EPCs的扩增能力。方法新西兰兔10只,对每只兔穿刺并抽取骨髓3 ml,用EGM-2培养基对全骨髓进行培养,观察细胞生长及形态变化,绘制细胞生长曲线并评估其扩增能力。对培养12 d后的贴壁细胞行CD133、CD34、VEGFR-2三抗原免疫组化鉴定及吞噬乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)和结合荆豆凝集素(UEA-1 lectin)的内皮细胞功能鉴定;同时对其行CD133免疫磁珠分选及流式细胞术检测,比较分选前后的CD34+/VEGFR-2+和CD133+/CD34+/VEGFR-2+细胞比例的差异。结果全骨髓直接培养48 h后可见细胞呈丛状或集落样生长,细胞呈梭形、三角形、多边形,细胞生长曲线呈"S"型。经过12 d的培养,每3 ml骨髓可以获得(1.51±0.29)×106个贴壁生长的EPCs,细胞呈铺路石样外观;检测发现CD133、CD34、VEGFR-2三抗原阳性表达,并具有吞噬ac-LDL和结合荆豆凝集素(UEA-1 lectin)的内皮细胞功能。经CD133免疫磁珠分选后CD34+/VEGFR-2+和CD133+/CD34+/VEGFR-2+的细胞比例数分别为分选前的3.38倍和6.14倍。结论通过全骨髓直接培养诱导分化获取兔EPCs的方法简单、可行。     

A novel and feasible way to cultivate and purify endothelial progenitor cells from bone marrow of children with congenital heart diseases

Background  Endothelial progenitor cells (EPCs) are used in vascular tissue engineering and clinic therapy. Some investigators get EPCs from the peripheral blood for clinic treatment, but the number of EPCs is seldom enough. We have developed the cultivation and purification of EPCs from the bone marrow of children with congenital heart disease, to provide enough seed cells for a small calibre vascular tissue engineering study.

Methods  The 0.5-ml of bone marrow was separated from the sternum bone, and 5-ml of peripheral blood was collected from children with congenital heart diseases who had undergone open thoracic surgery. CD34+ and CD34+/VEGFR+ cells in the bone marrow and peripheral blood were quantified by flow cytometry. CD34+/VEGFR+ cells were defined as EPCs. Mononuclear cells in the bone marrow were isolated by Ficoll^® density gradient centrifugation and cultured by the EndoCult Liquid Medium Kit™. Colony forming endothelial cells was detected. Immunohistochemistry staining for Dil-ac-LDL and FITC-UEA-1 confirmed the endothelial lineage of these cells.

Results  CD34+ and CD34+/VEGFR+ cells in peripheral blood were (0.07±0.05)% and (0.05±0.02)%, respectively. The number of CD34+ and CD34+/VEGFR+ cells in bone marrow were significantly higher than in blood, (4.41±1.47)% and (0.98±0.65)%, respectively (P <0.0001). Many colony forming units formed in the culture. These cells also expressed high levels of Dil-ac-LDL and FITC-UEA-1.

Conclusion  This is a novel and feasible approach that can cultivate and purify EPCs from the bone marrow of children with congenital heart disease, and provide seed cells for small calibre vascular tissue engineering.

     

大鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离培养及鉴定

目的: 探讨内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分离培养鉴定方法及其生物学特性。方法： 采用梯密度离心法结合差速贴壁法分离获取大鼠骨髓单核细胞,培养于EGM 2 MV SingleQuots内皮细胞培养液中,分别取48 h内贴壁细胞(早期EPCs)和48 h后贴壁细胞(晚期EPCs),在倒置显微镜下观察细胞形态,应用流式细胞术鉴定EPCs表面抗原标志CD34,CD133和血管内皮生长因子受体 2（VEGFR 2）,激光共聚焦检测EPCs吞噬功能,透射电镜观察EPCs内部超微结构。结果： 单核细胞接种后呈小圆形,早期EPCs呈长梭形,晚期以纺锤形为主,培养7 d后有明显干细胞集落;增殖至第6代以后,形态开始逐渐接近于内皮细胞,并出现管腔样结构。内皮祖细胞表面标志CD34,CD133和VEGFR 2均呈阳性表达,能吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白并结合FITC标记的凝集素 1。透射电镜可观察到内皮细胞特征性细胞器Weible Palade小体。结论： 梯密度离心法结合差速贴壁法能够成功地从骨髓中分离、纯化、培养出内皮祖细胞,其增殖能力强,数量充足,生物学特性稳定。     

冻存骨髓来源单个核细胞分化成内皮祖细胞的功能特性

目的:对新鲜和超低温保存的骨髓来源单个核细胞(MNC)体外扩增的内皮祖细胞(EPC)进行功能比较。方法:从猪髂骨抽取骨髓,对分离后的MNC进行培养或-80℃冻存3个月后再培养;冻存后培养的P1代细胞利用免疫组化及流式细胞技术进行EPC表面标志抗原鉴定。同时分别对新鲜和冻存培养的EPC获得率、细胞迁徙、黏附和增殖功能进行比较。结果:冻存组细胞免疫组化鉴定:CD133(+)、CD34(+)、CD31()、KDR(),流式细胞技术鉴定:CD133的阳性率(17.24±3.12)%,CD34的阳性率(37.21±10.85)%,CD31的阳性率(72.07±13.34)%,KDR的阳性率(89.09±16.40)%。新鲜和冻存的MNC经诱导培养后EPC获得率分别为(1.1±0.078)%、(1.03±0.061)%,P=0.054;细胞迁徙率分别为(15±0.71)%、(14.2±0.63)%,P=0.17;贴壁率分别为(42.7±2.1)%、(39.5±1.7)%,P=0.11;增殖功能分别为(25.06±2.82)×104、(21.64±2.34)×104,P=0.089。结论:超低温保存骨髓来源的MNC经诱导培...     

小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化血管内皮细胞的实验研究

目的探讨体外小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)的分离培养对其定向诱导分化为血管内皮细胞(VECs)的可行性。方法采用全骨髓贴壁法,分离骨髓间充质干细胞(MSCs)体外纯化培养并传代,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,采用生长曲线法及3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法观察传代细胞生长特性。采用第3代mBMMSCs在内皮细胞生长培养基(EBM-2)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)进行定向诱导,观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析比较第3代mBMMSCs及诱导后细胞DNA周期、细胞免疫表型的变化;免疫细胞荧光技术分别检测CD31、vWF和CD34表达及摄取Di-lac-LDL结合FITC-UEA-1的功能特点;体外血管形成实验检测血管内皮细胞的功能。结果 mBMMSCs原代培养呈长梭形、漩涡状排列生长,P1、P2、P3细胞生长曲线及MTT法显示呈潜伏期、对数生长期及平台期生长。诱导后的部分细胞形态可见类似血管内皮样改变,呈多角形、短梭形、铺路石样排列生长;细胞周期分析显示,第3代mBMMSCs G0/G1期为86%,诱导分化后的细胞G0/G1期为92%,细胞DNA周期无明显差异;第3代mBMMSCs免疫表型结果显示为CD105、CD90、CD73、CD44阳性表达,而CD34、CD45、VEGF(CD309)、CD14阴性表达;诱导分化后的细胞VEGF(CD309)、CD34弱阳性表达,而CD105、CD90、CD73、CD44、CD45、CD14阴性表达;细胞免疫荧光技术检测第3代mBMMSCs表面CD31、vWF和CD34阴性表达,不具有摄取Dil-ac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及形成血管管腔样结构;诱导后的细胞表达VECs特异性表面标志CD31、vWF和CD34,具有摄取Di-lac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及体外可形成血管管腔样结构。结论采用全骨髓贴壁法培养的mBMMSCs在体外具有定向诱导分化为VECs的潜能,成为血管组织工程理想的细胞来源。     

小鼠骨髓来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

目的：探讨自小鼠骨髓分离培养内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPC）的方法及其鉴定和生物学特性。方法：密度梯度离心法分离获取小鼠骨髓单核细胞,培养于EGM-2 SingleQuots培养液中,每天于倒置显微镜下观察EPC的形态。应用细胞免疫荧光法、流式细胞技术鉴定EPC表面抗原标志CD34、血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）,荧光显微镜检测EPC吞噬DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI-AC-LDL）及结合FITC标记的荆豆凝集素（nTC-UEA-lectin）功能。结果：早期EPC呈长梭形,细胞群落可呈现线状、管状、网状生长状态,培养7d后出现干细胞集落,并逐渐增多;培养3周后,细胞集落逐渐消失,细胞呈现铺路石样生长状态。培养获得的EPC绝大部分可同时表达细胞表面标记物CD34及VEGFR2,并具有吞噬DiI-AC-LDL及结合FITC-UEA-lectin功能。结论：自小鼠骨髓中分离、培养、纯化EPC是一种方便、经济、高效的培养方法。通过该方法培养获得的EPC增殖能力强,数量充足,生物学特性稳定。该方法对今后利用EPC进行细胞移植治疗的相关实验有着重要意义。     

猪骨髓来源内皮祖细胞体外培养条件的优化

目的 优化选择猪骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cell, EPC)体外培养条件,为后续研究奠定基础。方法 从猪髂骨抽取骨髓,利用密度梯度离心法分离得到单个核细胞(MNC),体外培养分化为EPC。在其他培养条件相同的前提下,分别比较不同的细胞接种密度(2×103/cm2、5×103/cm2、1×104/cm2、2×104/cm2),不同基础培养液(EGM、M199、DMEM),不同FBS浓度(5%、10%、20%、30%),以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)与不同细胞因子\[碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质细胞衍生因子（SDF）、胰岛素样生长因子（IGF）和表皮生长因子（EGF）\]组合(VEGF+bFGF、VEGF+SDF、VEGF+bFGF+SDF、VEGF+bFGF+IGF+EGF、VEGF+bFGF+SDF+IGF)对EPC细胞增殖及迁徙功能的影响;采用细胞形态观察、双荧光染色法及免疫细胞化学染色方法对培养的EPC进行鉴定。结果 猪骨髓EPC以1×104/cm2密度接种在盛有M199,并添加10% FBS和VEGF+bFGF+SDF+IGF细胞因子的培养液时,细胞的增殖能力和迁徙率最高。每组细胞经结合Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)和FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)双色荧光染色鉴定双阳性率>76%,免疫细胞化学检测CD133、CD34、KDR均为阳性。结论 通过优化猪骨髓来源EPC的体外培养条件,可使细胞数量增多及功能增强,为后续研究奠定了基础。     

人外周血来源的血管内皮祖细胞体外诱导分化

目的研究外周血来源内皮祖细胞的分离、培养、分化及鉴定方法。方法采集正常人外周血单个核细胞进行体外培养，通过免疫组化、免疫荧光和流式细胞术测定分化细胞表面特异性抗原的表达及其变化。结果培养7d后多数细胞贴壁生长，逐渐显示内皮细胞的形态特点，传代培养4周后呈典型铺路石样，并可继续稳定传代扩增；免疫组化和免疫荧光染色CD31、CD34、血管内皮细胞生长因子受体．2和vWF均呈阳性；流式细胞显示，经体外诱导培养后CD34^＋／AC133^＋细胞数明显增多。结论外周血来源的单个核细胞中含有能分化成血管内皮细胞的内皮祖细胞，其在一定条件下可稳定分化、扩增。     

大鼠内皮祖细胞的分离培养与鉴定

目的 研究大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的分离培养和鉴定方法.方法 纤维连接蛋白提前包被培养瓶和培养板中的盖玻片.密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,EGM-2完全培养基,贴壁法,37℃, 5%CO2,饱和湿度的恒温培养箱中原代培养.部分培养瓶细胞消化后计数.其余培养瓶和培养板中盖玻片细胞继续培养,细胞近融合时传代,分别在第6、9、12和24天进行细胞鉴定.内皮祖细胞鉴定:免疫细胞化学的vWF和VEGFR-2染色;内吞DiI标记的乙酰低密度脂蛋白(DiI-AcLDL)和结合FITC标记的荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)的激光共聚焦显微镜观察.结果 培养细胞的形态学改变:骨髓单个核细胞种植24h后部分细胞开始贴壁、变大,倒置显微镜下贴壁细胞透亮度增强,并逐渐伸出伪足样突起,呈小杆状或梭形.培养第3天贴壁细胞开始增殖,呈"集落"样生长,外周梭形细胞较多.第6天梭形细胞显著增多,培养至第12天左右,梭形细胞首尾相连,呈"毛细血管"样排列.培养第6天的细胞数量级为106～107/瓶.内皮祖细胞的鉴定:激光共聚焦显微镜观察显示细胞DiI-acLDL和FITC-UEA呈红绿免疫双荧光阳性.培养第6天细胞VEGFR-2和vWF免疫细胞化学染色呈阳性.结论 大鼠的骨髓单个核细胞可以培养为内皮祖细胞,且数量级达到106～107,可以满足动物实验研究的需要.