丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

3种胃癌细胞株中GSTP1基因表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的研究候选基因GSTP1在胃癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨胃癌细胞株GSTP1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性。方法采用RT-PCR和Western blot技术分别检测GSTP1在人胃癌细胞株MGC803、BGC823和SGC7901中的mRNA和蛋白表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)法检测启动子区域甲基化状态。分别用不同浓度的去甲基化药物5-氮杂胞苷处理GSTP1基因启动子区高甲基化状态细胞后,再检测GSTP1基因蛋白表达水平。结果人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中GSTP1 mRNA和蛋白呈阳性表达,MGC803中mRNA和蛋白呈阴性表达;BGC823和SGC7901细胞GSTP1基因启动子区域未发生甲基化,而MGC803细胞启动子区呈高甲基化状态;经5-氮杂胞苷药物干预后,MGC803细胞的GSTP1蛋白表达明显增强。结论胃癌MGC803细胞株中GSTP1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对BGC823胃癌细胞株RIZ1基因去甲基化转录调控作用

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdB)对人胃癌细胞系BGC823细胞株RIZ1基因的去甲基化转录调控作用及对细胞株生长增殖的影响,寻找胃癌治疗的新靶点.方法:使用3种不同浓度5-Aza-CdR干预胃癌BGc823细胞,甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCB)检测药物干预前后RIZ1基因的甲基化状态和RIZ1 mBNA的表达;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡的改变.结果:未经5-Aza-CAR处理的BGC823细胞中MZ1基因启动子区域cpG岛高甲基化,且RIZ1 mRNA不表达,经2,5,10 μmol/L 5-Aza-CdB处理48 h后,RIZ1基因启动子区域高甲基化得到逆转,细胞中均有RIZ1 mRNA表达,相对定量值分别为0.509,0.716,0.831;3种浓度5-Aza-CdR处理BGC823细胞后,与对照组比较,细胞增殖速度出现不同程度减慢(P<0.05),随着浓度的增加其抑制作用增强;并显著抑制BGC823细胞生长周期,与对照组相比,G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论:5-Aza-CdR能有效逆转胃癌BGC823细胞RIZ1基因的异常甲基化,从而激活因高甲基化导致RIZ1基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,抑制肿瘤细胞生长.     

TRAF1基因干扰质粒的构建及其对胃癌细胞生物学功能的影响

目的:构建T F1基因干扰重组质粒及建立T F1基因干扰瞬时转染胃癌细胞模型,然后通过干扰目标胃癌细胞中的T F1基因来检测T F1对胃癌细胞的生物学功能的影响。方法:首先通过real-time PCR和Western印迹验证T F1在胃癌细胞系BGC823,SGC7901,MGC803中的表达,筛选出T F1表达量最高的一株细胞作为干扰转染的目标细胞;设计及构建3个T F1的shRNA表达载体pLVX-shRNA-T F1-shRNA1~3,将其分别转染至目标胃癌细胞系中,应用real-time PCR和Western印迹筛选出干扰效率最强的shRNA,最后通过M及流式细胞术检测T F1对胃癌细胞凋亡能力的影响,通过Transwell小室迁移实验来检测对其迁移功能的影响。结果:与GES-1比较,T F1基因在BGC823,SGC7901,MGC803中的表达均有上调(P<0.05),其中以BGC823表达最高;3个T F1shRNA对T F1基因均有抑制作用,以pLVX-shRNA-T F1-shRNA2干扰效果最强;干扰胃癌细胞BGC823中的T F1可使细胞生长活力减弱,凋亡明显增加,但对其迁移功能无明显影响。结论:T F1基因在胃癌细胞系BGC823中上调最明显;pLVX-shRNA-T F1-shRNA2可成功干扰BGC823中T F1的表达;T F1可抑制BGC823细胞的凋亡。     

18β-甘草次酸对人胃癌细胞BGC823增殖的抑制

目的:观察18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,GA)对人胃癌细胞系BGC823细胞增殖的影响,并从细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p16,p21,p27)方面探讨GA可能的作用机制.方法:以不同浓度的GA处理胃癌BGC823细胞后,用MTT法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞周期,采用Western blot方法检测胃癌细胞p16,p21,p27蛋白水平变化.结果:GA能抑制BGC823细胞增殖,且呈浓度依赖性.胃癌细胞经GA处理后,细胞周期发生G0/G1期阻滞.另外发现,胃癌细胞p21,p27的蛋白水平上调,但p16的蛋白水平没有明显变化.结论:GA可抑制人胃癌细胞增殖,其机制与G0/G1期阻滞、p21,p27表达上调有关.     

白藜芦醇对胃腺癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇对胃癌细胞株增殖和凋亡的影响?方法:不同浓度白藜芦醇(0~150 μmol/L)作用人胃腺癌细胞株BGC823(低分化)和SGC7901(中分化),CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹检测凋亡相关蛋白survivin的表达?结果:白藜芦醇对胃癌细胞株增殖能力呈时间和浓度依赖性抑制,150 μmol/L白藜芦醇作用人胃癌细胞株BGC823和SGC7901 72 h后,早期和晚期凋亡细胞比率均明显增加,而survivin蛋白表达均明显下降(P < 0.05)?结论:白藜芦醇以浓度和时间依赖性模式抑制胃癌细胞的增殖能力和活性,诱导胃癌细胞株BGC823和SGC7901发生凋亡,其机制可能与下调survivin蛋白的表达有关?     

去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响

目的:探讨去甲基化药物5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza.CdR)对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xafl基因表达的影响.方法:用MTT法检测不同浓度5-Aza-CdR对细胞增殖活性的影响;PI染色和流式细胞仪检测不同浓度5-Aza-CdR处理72 h后细胞周期分布和细胞凋亡率;RT-PCR法检测用药前后xafl基因表达的变化.结果:用1×103,5×103.10×103nmol/L的5-Aza-CdR处理BGC823细胞6 d后,试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高(P<0.05),并呈剂量依赖关系;流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率明显增加:试验组凋亡率分别为(4.53±0.21)%,(8.11±1.01)%和(11.56±0.86)%,与对照组(0.51±0.01)%相比较差异显著(P<0.05).在5-Aza-CdR处理前,未检测到BGC823细胞株xafl基因mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,xafl mRNA重新表达.结论:5-Aza-CdR可抑制BGC823细胞增殖;促进细胞凋亡;使xafl基因甲基化状态得到逆转,而重新表达.     

DADS诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其与$mac和survivin表达的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导胃癌BGC823细胞凋亡及其机制。方法实验分DADS处理组和DADS未处理组．进行体外细胞培养,通过MTr法检测DADS对胃癌BGC823细胞生长的影响、通过流式细胞术检测细胞周期的分布、通过免疫组化检测smac和survivin蛋白的表达。结果MTT实验显示DADS作用于BGC823细胞后,细胞生长抑制率呈时间、浓度依赖性增高,流式细胞术显示DADS明显将细胞周期阻滞于G2/M期,且呈浓度、时间依赖性。免疫细胞化学显示处理组较未处理组snlae表达明显增加,而survivin蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论DADS可体外抑制人胃癌BGC823细胞增殖,使该细胞阻滞于G2／M期,其机制可能与上调smac及下调survivin的表达有关。     

mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达

目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势.方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积.结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCR mdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85.杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质.免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱.P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上.SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强.SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P＜0.05).SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P＜0.001).结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中.     

曲古抑菌素A诱导胃癌细胞细胞周期阻滞及其机制

目的研究去乙酰化酶抑制剂TSA对胃癌细胞SGC-7901细胞周期的作用及机制。方法利用细胞计数及流式细胞仪检测细胞生长及细胞周期；利用Western blot、基因芯片及实时定量PCR检测TSA对胃癌细胞周期相关基因的表达。结果TSA可诱导胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞。TSA可增加胃癌细胞SGC-7901之p53，p21，p27等基因的表达，降低CDK2，CCNDl等基因的表达。TSA可通过调控多个细胞周期相关基因的表达阻滞胃癌细胞细胞周期，从而抑制胃癌细胞的生长。结论TSA可通过调控多个细胞周期相关基因诱导胃癌细胞细胞周期阻滞，从而达到其抑制胃癌细胞生长的作用。     

胃癌细胞对三氧化二砷的敏感性与活性氧产生的关系

 目的探讨胃癌细胞对三氧化二砷（As2O3）的敏感性与细胞活性氧（ROS）产生的关系。方法应用MTT法检测As2O3对
胃癌MGC803、BGC823 和SGC7901 细胞的细胞毒作用;应用流式细胞仪检测未用药及As2O3作用后3 种细胞系的ROS 水平。
结果不同浓度的As2O3呈时间、浓度±赖性抑制胃癌MGC803、BGC823 和SGC7901细胞的增殖;72 h 抑制细胞增殖的IC50
分别为2.8、3.1 和10.2 μmol/L,胃癌MGC803 和BGC823细胞的IC50均显著低于SGC7901 细胞（ P 均< 0.01）。未用药MGC803、
BGC823 和SGC7901 细胞系ROS 峰值水平分别为20.3±2.0、64.2±3.3 和57.7±2.0;5 μmol/L As2O3 作用24 h后,MGC803 和
BGC823 细胞的ROS 峰值水平分别为100.8±3.8 和103.5±2.3,与用药前比较均显著升高（ P < 0.001,P < 0.01）,而相对不敏感的
SGC7901 细胞用药后ROS 峰值水平为56.5±2.4,未见升高（ P > 0.05）。结论胃癌细胞对As2O3的敏感性与As2O3作用后细胞
内ROS 水平的升高有关。     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

胃癌细胞系的细胞遗传学与分子细胞遗传学研究

对胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３、ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１进行体外传代２，收获分裂中期细胞、计算染色体众数，进行Ｇ显带核分析，并以１６号染色体着丝粒探针和３号染色体长臂涂染探针分别对ＢＧＣ－８２３和ＭＧＣ－８０３两个细胞系进行染荧光原位杂交。结果发现，在３个细胞系中存在大量的染色体数目与结构异常。其中１６号染色体和１染色体的增加涉及３号染色体的易位，以及多拷贝的５号染色体短臂等臂染色体的出现是这     

白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法 采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测，观察白藜芦醇(0．1、0．2、0．5 mmol／L)对脱落培养胃癌细胞BGC823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长，0．1mmol／L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团；流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0．5mmol／L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BGc823、sGc7901和HGc27细胞于G0／G1、S、G2／M期，并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡，其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19．3％，远高于其他两株胃癌细胞。结论自藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。     

他莫昔芬对人胃癌细胞增殖和丝氨酸蛋白酶抑制剂9表达的影响

目的：研究他莫昔芬（TAM）对胃癌细胞雌激素受体α、β（ERα和ERβ）的表达情况及对胃癌细胞增殖和丝氨酸蛋白酶抑制剂9（PI9）表达的影响。方法对前期筛选出的ERα表达阳性胃癌细胞株MNK45、SGC7901（PI9表达阳性）和ERβ表达阳性胃癌细胞株BGC823（PI9表达阴性）,采用免疫荧光化学法检测 TAM 对ERα和ERβ表达的影响,CCK8法检测 TAM 干预后胃癌细胞株的增殖情况,逆转录PCR观察TAM干预后PI9表达的变化。结果 ERα表达于MNK45和SGC7901细胞核上, ERβ表达于BGC823细胞核上,经TAM 干预后 ERα和 ERβ表达均无明显改变;TAM 在0．1～100．0μmol／L 时可明显抑制SGC7901、MNK45的细胞增殖,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．05）,对BGC823和MNK28的细胞增殖无明显剂量依赖关系;TAM干预后SGC7901的PI9 mRNA的相对灰度值为（0．402±0．020）,MNK45的PI9 mRNA的相对灰度值为（0．359±0．048）,较阴性对照组灰度值均明显降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 TAM 对ERα和PI9阳性表达细胞的增殖抑制作用强于PI9阴性表达细胞,并呈较好的剂量依赖性;TAM 对胃癌的生长抑制作用可能与改善PI9介导的免疫耐受有关。     

人胃癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901抗脱落凋亡的特性，为研究肿瘤细胞抗脱落凋亡的机制奠定基础。方法：应用软琼脂集落形成实验，DNA ladder检测，流式细胞术等技术观察胃癌细胞脱落培养后细胞生长状况的改变。结果：对照组细胞MDCK（狗的正常肾脏上皮细胞系）在软琼脂中不生长，没有形成细胞集落；悬浮培养15h后，可见有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现；流式细胞仪检测，悬浮培养24，48h可见有凋亡峰出现，而HGC27等4种胃癌细胞系在软琼脂中均形成大小不等的细胞集落，脱落培养15h后，没有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现，流式细胞仪检测，与贴壁培养的对照组相比细胞周期没有显性差异。也没有凋亡峰的出现。结论：MDCK细胞属于锚着依赖性细胞，可出现脱落凋亡，胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901属于抗脱落凋亡细胞。     

雌激素受体alpha和肿瘤转移相关因子1在胃癌细胞中的表达和共定位

目的：观察雌激素受体alpha（ERα）和肿瘤转移相关因子1（MTA1）在胃癌细胞中的表达和共定位,探讨胃癌的发病机制。方法：提取BGC823、SGC7901胃癌细胞蛋白,利用Western blotting 法检测内源性ERα和MTA1的表达,利用共聚焦激光扫描显微镜观察2种胃癌细胞中ERα和MTA1的定位情况。结果：Western blotting 法检测,BGC823、SGC7901胃癌细胞均表达ERα和MTA1;共聚焦激光扫描显微镜观察,ERα和MTA1能够共定位于BGC823和SGC7901细胞的细胞核中。结论：胃癌细胞中表达ERα,并且能够与MTA1共定位在细胞核中。     

凝溶胶蛋白对胃癌细胞凋亡及细胞中活性氧水平的影响研究

目的探讨凝溶胶蛋白（GSN）对胃癌细胞凋亡及细胞中活性氧（ROS）水平的影响。方法免疫印迹法（Western blot）检测胃癌细胞SGC7901、AGS、BGC823 及胃黏膜上皮细胞GES-1 中GSN的表达水平。细胞转染GSN siRNA（GSN siRNA 组）和siRNA 对照（siRNA control 组）,同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,培养48 h 后,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜法检测ROS水平,Western blot检测细胞中GSN、Notch1 胞内段受体（NICD1）、Notch2 胞内段受体（NICD2）、DNA 结合蛋白1（HES1）多克隆抗体及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）水平。结果GSN在 胃癌细胞SGC7901、AGS 及BGC823 中的表达水平高于胃黏膜上皮细胞GES-1（p <0.05）,且在AGS 细胞中的表达水平最高,后期选用胃癌细胞AGS 为研究对象。siRNA control 组细胞增殖、凋亡及细胞中ROS 水平、GSN、NICD1、NICD2、HES1 及Cleaved Caspase-3 水平与对照组相比均差异无统计学意义（p >0.05）。GSN siRNA 组细胞增殖能力及细胞中GSN、NICD1、NICD2 及HES1 水平低于对照组（p <0.05）,而细胞凋亡能力及细胞中ROS 水平、Cleaved Caspase-3 水平均高于对照组（p <0.05）。结论干扰GSN 表达后,胃癌细胞增殖能力减弱,凋亡增加,作用机制可能与细胞中ROS 水平及NOTCH信号通路有关。     

LncRNA-MEG3 对胃癌生物学特性 及铂类化疗敏感性的研究

目的 探讨LncRNA-MEG3 对胃癌增殖、凋亡及顺铂化疗敏感性的影响。方法 以人正 常胃黏膜上皮细胞GES1 作为对照细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌MKN28、 SGC7901、AGS 及BGC823 细胞中LncRNA-MEG3 的表达;将过表达MEG3 的质粒转染BGC823 细胞作为 pcDNA3.1-MEG3 组,转染空白质粒的阴性对照作为pcDNA3.1 组,同时设置Control 组;将BGC823 细胞 分为pcDNA3.1 组、pcDNA3.1-MEG3 组、顺铂组及pcDNA3.1-MEG3+ 顺铂组。qRT-PCR 检测转染48 h 后细胞中LncRNA-MEG3 的表达;pcDNA3.1-MEG3、顺铂单独或共同处理BGC823 细胞,细胞计数试剂 盒法及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率;Western blotting 检测STAT3、磷酸化的信号转导与转录因 子3（p-STAT3）、Cyclin D1 和Bcl-2 的表达。结果 胃癌细胞中LncRNA-MEG3 的表达均低于GES1 细胞 （P <0.05）;4 组LncRNA-MEG3 相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;pcDNA3.1-MEG3 组和顺 铂组Cyclin D1、Bcl-2 及p-STAT3 的蛋白表达低于pcDNA3.1 组（P <0.05）,细胞凋亡率高于pcDNA3.1 组 （P <0.05）。结论 胃癌细胞中LncRNA-MEG3 表达降低,过表达LncRNA-MEG3 可降低胃癌细胞活力并诱 导细胞凋亡,增加顺铂的化疗敏感性,其机制与下调STAT3 信号通路有关。