葡萄糖神经酰胺合成酶基因在人胃癌细胞SGC-7901及SGC-7901/VCR的表达和意义

目的:研究葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosyl- ceramide synthase,GCS)基因在人胃癌细胞SGC-7901和SGC-7901/VCR的表达并探讨其对人胃癌发生、发展的意义.方法:体外培养人亲本敏感胃癌细胞SGC-7901和人耐长春新碱胃癌细胞SGC-7901/VCR.采用MTT法检测半数细胞抑制浓度(IC_(50))和SGC-7901/VCR耐药倍数;RT- PCR法检测SGC-7901和SGC-7901/VCR两种细胞GCS mRNA的表达,免疫组化法测定GCS蛋白表达水平.结果:SGC-7901和SGC-7901/VCR的IC_(50)分别为1.40±0.06和86.20±0.50 mg/L.SGC-7091/ VCR细胞耐药指数是亲本细胞SGC-7901的61倍,SGC-7901和SGC-7901/VCR两种细胞均有GCS mRNA表达,且SGC-7901/VCR细胞GCS mRNA表达水平(GCS指数为3.9)较SGC-7901细胞(GCS指数为0.5)有显著升高(P<0.05),耐药细胞GCS蛋白表达阳性率(65%)显著高于亲本细胞(18%)(P<0.05).结论:GCS基因在人胃癌耐药细胞和亲本敏感细胞均有表达,耐药细胞GCS mRNA及蛋白均高表达.GCS可能参与了胃癌的发生过程,且与肿瘤多药耐药有密切关系.     

胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应

目的 探讨胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ(Reg Ⅰ)基因转录因子的效应.方法 应用巢式PCR技术从胃癌细胞SGC7901基因组DNA扩增Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段,将该片段插入pMD19-T载体,序列分析鉴定.应用随机引物法以地高辛分别标记1414bp及其HindⅢ酶切800bp和614bp片段,经灵敏度检测后,作为探针.应用Genomatix MatInspector在线分析软件分析Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段的转录因子结合位点.分别以10-7 mol/L和10-8mol/L胃泌素G-17处理胃癌细胞SGC7901 48h,提取核蛋白.应用DNA-蛋白质印迹法(Southern blotting),分别以地高辛标记的1414bp、800bp和614bp片段为探针检测胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应.结果 1414bp探针可检测到20条蛋白主带.胃泌素孵育后,带型没有变化,但是一些条带的灰度值改变,带9、12、13、14、15和16的灰度值明显降低(P＜0.05);不同浓度胃泌素处理组之间上述6个条带的灰度值差异不明显(P＞0.05).614bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和13,胃泌素处理后,此3条主带的灰度值明显降低(P＜0.05).800bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和14,胃泌素处理后,仅带14的灰度值明显降低(P＜0.05).614bp和800bp探针均未检出带15和带16.结论 胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达由多个转录因子协同调控.降低几个转录因子的结合活性可能是胃泌素上调胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达的途径之一.     

胃癌组织中核基质蛋白的变化

目的：研究胃癌组织核基质蛋白的改变。方法：应用SDS－PAGE技术及Geneools定量分析软件，对22例胃癌组织及正常组织的核心基质蛋白进行了研究，结果：胃癌组织与正常组织比较，Mr为30000，28000的核基质蛋白表达量明显减少（P＜0．05），不同分化类型及不同临床分期胃癌组织间比较，此种核基质蛋白表达量差异无统计学意义（P＞0．05），结论：胃癌组织中核基质蛋白的改变可能在肿瘤的早期已经发生，是胃癌发生的早期分子事件。     

成人和3种成体哺乳动物血管组织动力学研究

目的:观察正常成人、犬、大鼠和家兔大中血管壁组织结构及其演化关系,探讨血管的组织动力学过程.方法:5例成人尸检大动脉和中动脉标本、5只家犬主动脉和股动脉标本、12只大鼠大动脉至髂动脉标本、3只家兔大动脉标本,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成人与成体犬、大鼠、家兔大中血管壁一般包括内膜、中膜、外膜和鞘膜4层.血管内膜内皮表面可见成血-血管干细胞归巢和内化与血液沉积物及其表面内皮化;内膜与中膜之间可见内膜细胞与膜平滑肌细胞演化序列;中膜与外膜之间可见平滑肌退变序列;外膜外有神经源的鞘膜.植物神经末端可演化形成滋养血管.结论:正常成人、犬、大鼠和家兔大中血管壁主要由归巢和沉积方式来源于成血-血管干细胞形成的内膜细胞演化而成,内膜细胞演化形成中膜平滑肌,平滑肌退化而成外膜.     

SV40T抗原真核表达载体的构建及表达

目的:构建SV40T抗原的特异性真核表达载体,并导入胃癌细胞株SGC7901进行表达鉴定.方法:扩增小鼠H /K ATPase β亚基启动子,与pMT18-T载体相连,并将其亚克隆至真核表达载体 pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK; 从含有SV40T基因的pLITAg质粒酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,同时构建非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV,进行酶切及测序鉴定.用脂质体转染的方法将构建的载体导入胃癌细胞株SGC7901,PCR扩增基因组DNA,RT-PCR检测SV40T mRNA的表达.结果:限制性内切酶分析与测序结果显示,真核表达载体pcDNA3.1/HKSK构建成功;转染该载体的SGC7901细胞可检测到SV40T基因DNA的存在,且有SV40T mRNA的表达.结论:特异性表达SV40T基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV构建成功.     

癌组织中p16基因甲基化分析

目的探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系.方法对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶(HpaII)和甲基非敏感酶(MspI)酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5'-CCGG-3'位点甲基化进行检测.结果20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例(25%)和9例(45%),正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例;有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌(Ⅲa、Ⅳ期各1例)中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者(P<0.05).结论p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件.     

胃癌组织中ZAC与生长抑素表达的相关性

目的 研究胃癌组织中ZAC和生长抑素表达的相关性,探讨胃癌组织中ZAC与生长抑素的表达与胃癌临床病理学特性的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测30例胃癌患者手术切除标本及其相应癌旁组织和正常胃黏膜组织中ZAC和生长抑素的表达.结果 胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中ZAC的阳性表达率分别为33.3%(10/30)、73.3%(22/30)和66.7%(20/30);生长抑素的阳性表达率分别为36.7%(11/30)、53.3%(16/30)和73.3%(22/30).胃癌组织中ZAC和生长抑素的表达阳性率均明显低于正常胃黏膜组织(均P<0.05).胃癌组织中ZAC与生长抑素的表达呈明显正相关(r=0.636,P<0.05).ZAC与生长抑素的共表达与胃癌的分化程度及浸润深度有明显关系(P<0.05),而与淋巴结转移无明显关系(P>0.05).结论 胃癌组织中ZAC与生长抑素的表达具有明显相关性,生长抑素可能与ZAC协同参与胃癌的发生和发展.     

急性淋巴细胞白血病患者微卫星DNA杂合性缺失检测

目的：探讨微卫星DNA杂合性缺失与急性淋细胞白血病（ALL）的相关性。方法：ALL患者72例，其中T－ALL9例，B－ALL55例，慢性粒细胞性白血病（慢粒）急淋为8例，应用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术，检测ATM基因D11S2179位点、BRCA2基因D13S269点位点和D13S25在B－ALL、T－ALL和慢粒急淋变患者的微卫星杂合性缺失（LOH）。结果：72例ALL患者中，3位点总LOH频率为26．4％。D11S2179、D13S260和D13S53位点LOH的发生频率分别为15．3％、12．5％和5．5％。B－ALL患者3个位点平均LOH发生率为12．7％。在D11S2179和D11S2602位点同时发生LOH频率为9．1％。9例T－ALL患者未发现LOH。8例慢性急淋变患者只在D11S2179位点检测到3例（37．1％），其他2位点未异常。结论：ATM基因、BRCA2基因帮D13S25位点微卫星的LOH与B－ALL的发病存在相关性；而ATM基因遗传不稳定性可能参与慢粒急淋变过程。     

地高辛标记反义RNA探针对大鼠不同组织生长抑素mRNA原位杂交的实验研究

应用地高辛（ＤＩＧ）标记的生长抑素（ＳＯＭ）反义ＲＮＡ探针，与Ｗｉｓｔａｒ大鼠胃、十二指肠和甲状腺组织进行原位分子杂交，以显示不同组织中ＳＯＭｍＲＮＡ对ＳＯＭ细胞进行分子水平的细胞定位和形态学观察。结果显示：杂交阳性信号呈蓝色位于胞质内，背景清晰，细胞轮廓清楚，主要分布于胃粘膜底部，十二指肠阳性细胞较少，在甲状腺滤泡旁和滤泡上皮细胞之间均可见到形态不一的杂交阳性细胞。用ＲＮａｓｅＡ预处理标本和免去探针均无杂交信号出现。表明ＤＩＧ标记的反义ＲＮＡ探针具有高度的敏感性和特异性。     

ras 和 erbB-2 癌基因在胃癌、癌旁和正常组织的表达

应用ｒａｓ癌基因产物Ｐ２１蛋白一段氨基酸序列的合成肽的单克隆抗体ＥＢ２４１１和ｅｒｂＢ２癌基因产物Ｐ１８５抗体，对人胃癌、癌旁和正常组织中ｒａｓ和ｅｒｂＢ２的表达进行免疫组化研究，结果：Ｐ２１在正常、癌旁和癌组织的阳性率分别为１３３％、７９３％和６８９％；阳性细胞数分别为（４０±１５），（２１９±１０４）和（１４７２±４００）ｍｍ－２，三者之间呈显著性差异（Ｐ＜００１）。Ｐ２１的表达与肿瘤的分化类型无显著性差异。早期胃癌（病变局限于粘膜层和粘膜下层）Ｐ２１表达高于进展期胃癌。高分化腺癌中Ｐ１８５ＩＲ阳性细胞数明显多于中、低分化癌。Ⅰ、Ⅱ期胃癌Ｐ１８５阳性细胞数较少，而Ⅲ、Ⅳ期显著增多。提示：Ｐ２１参与胃癌的早期发生，而Ｐ１８５与胃癌的晚期发展有关，并参与胃癌细胞的分化调节。