冠心病患者血清同型半胱氨酸水平与冠脉病变程度的相关性

目的:探讨冠心病患者血清同型半胱氨酸水平与冠脉病变程度的相关性。方法:选择冠心病患者71例为研究对象,其中急性冠脉综合征47例,稳定型心绞痛24例。分析冠心病患者血清同型半胱氨酸水平与冠脉病变程度的相关性。结果:轻度狭窄血清同型半胱氨酸水平为(15.2±3.1)μmol/L,中度狭窄为(18.9±5.3)μmol/L,重度狭窄患为(21.7±5.1)μmol/L,不同狭窄程度患者血清同型半胱氨酸水平存在显著差异(P<0.01)。狭窄程度与血清同型半胱氨酸水平呈显著正相关的关系(r=0.596,P<0.01)。1支病变患者血清同型半胱氨酸水平为(16.0±3.8)μmol/L,2支病变患者为(19.4±4.5)μmol/L,3支病变患者为(21.1±4.7)μmol/L,不同冠脉病变支数患者血清同型半胱氨酸水平存在显著差异(P<0.05);冠脉病变支数与血清同型半胱氨酸水平呈显著正相关(r=0.582,P<0.01)。结论:血清中同型半胱氨酸水平与冠脉病变的程度具有显著正相关的关系。     

湖南中部地区高血压人群CYP2D6和β1肾上腺素能受体基因多态性调查

【目的】探讨湖南中部娄底和湘潭地区高血压人群CYP2D6和β1肾上腺素能受体（β1-AR）基因多态性分布。【方法】湖南中部地区高血压患者403名,采用聚合酶链反应（PCR）和聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法（PCR-RFLP）进行CYP2D6和β1-AR基因分型。【结果】403例高血压患者中CYP2D6检测出CYP2D6的＊1、＊2、＊5、＊10四种等位基因,频率由高到低依次为＊10（67.5%）、＊1（17.5%）、＊2（9.2%）、＊5（5.8%）,突变基因型频率最高为CYP2D6＊10＊10（47.4%）。β1-AR 49位Ser和Gly等位基因频率分别为83.9%和16.1%;Ser/Ser、Ser/Gly和Gly/Gly基因型分布频率分别为68.7%、30.3%和1.0%。β1-AR 389位Arg和Gly等位基因频率分别为76.1%和23.9%,Arg/Arg、Gly/Arg和Gly/Gly基因型分布频率为55.3%、41.4%和3.2%。各基因型及等位基因频率在不同性别中分布无差异（均P〉0.05）。【结论】湖南中部地区高血压人群CYP2D6和β1-AR基因多态性分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡,其中CYP2D6＊10和β1-AR 389位基因突变率最高,可能成为影响β受体阻滞剂降压疗效的显著因素之一。     

不同营养状态下柯萨奇病毒B3感染HeLa细胞后对mTOR及p70S6K mRNA的影响

目的 探讨不同营养状况下柯萨奇病毒B3(CVB3)感染HeLa细胞对mTOR信号通路的影响.方法 采用非饥饿法和饥饿法2种方法培养HeLa细胞.(1)非饥饿法:HeLa细胞融合成40％ ～ 50％的单层细胞时,用含10 g/L胎牛血清的细胞培养液换液培养24 h后,病毒组用100倍半数感染量(100 TCID50)的病毒干预,而对照组用病毒维持液(含胎牛血清2 g/L细胞培养液)培养;(2)“饥饿法”:待HeLa细胞融合成40％ ～ 50％的单层细胞时,用不含胎牛血清的培养基换液培养24 h后,病毒组用100 TCID50的病毒干预,而对照组用病毒维持液(含胎牛血清2 g/L的细胞培养液)培养.采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,用实时荧光定量PCR检测3、6、9、12、24 h不同时间点饥饿法及非饥饿法不同营养状态下HeLa细胞mTOR、p70S6KmRNA表达.结果 非饥饿法:病毒组仅在12 h及24 h mTOR、p70S6K mRNA表达显著低于对照组(P均＜0.05);饥饿法:病毒组各时间点均显著低于对照组(P均＜0.05);饥饿法病毒组和对照组Hela细胞mTOR、p70S6K mRNA表达均高于非饥饿法,mTOR mRNA差异均有统计学意义(P均＜0.05),而p70S6K mRNA差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 CVB3使HeLa细胞mTOR-P70S6K信号通路表达下调.     

CVB3对不同营养状态的HeLa细胞mTOR信号通路调控的影响

目的:探讨不同营养状况对柯萨奇病毒B3 (CVB3) 感染HeLa 细胞后mTOR 信号通路调控的影响。方法:HeLa 细胞的培养方法:非饥饿法用常规含10% 胎牛血清细胞培养液换液培养24 h 后次日再用CVB3 干预; 饥饿法用不含胎牛血清的培养基换液培养24 h 后次日再干预。将HeLa 细胞分为非饥饿法病毒组与对照组、饥饿法病毒组与对照组4 组, 采用RT-PCR 检测不同时间点HeLa 细胞CVB3 外壳蛋白、mTOR 和p70S6K mRNA 表达。结果:非饥饿法:病毒组mTOR, p70S6K mRNA 表达与对照组比较仅在12, 24 h, 差异有统计学意义(P<0.05), 而饥饿法病毒组各时间点均低于对照组( 均P<0.05);饥饿法病毒组和对照组HeLa 细胞mTOR 表达均高于非饥饿法( 均P<0.05), 而p70S6K mRNA 差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:CVB3 使HeLa 细胞mTOR-p70S6K 信号通路表达下调, 饥饿法mTOR 表达高于非饥饿法。     

使用多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统检测肺癌的临床意义

目的 研究多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统用于肺癌的临床诊断价值。方法 用多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统测定分析131例肺癌患者，20例肺良性疾病患者和177例正常对照人群血清的12种常见的肿瘤标志物：CA19-9、NSE、CEA、CA242、Fe、Beta-HCG、AFP、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153。结果 131例肺癌患者有93例血清肿瘤标志物为阳性，阳性率为71．0％；20例肺良性疾病患者有2例血清肿瘤标志物阳性，阳性率为10．0％；177例正常对照血清中没发现阳性。结论 多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统的应用对肺癌诊断有较高的临床参考价值。     

四种微量全血DNA提取方法的比较

目的比较加热去蛋白法、碘化钠法、TT溶血法、氯化胺法四种方法提取人微量全血基因组DNA的纯度及总量的差异.方法收集静脉全血0.5ml,共356人份,分别采用上述四种方法提取基因组DNA,用紫外分光光度仪及琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和总量,计算采用x±s,结果经统计学t检验处理.结果四种方法提取的基因组DNA纯度用OD260/OD280表示分别为:加热法1.569±0.158;碘化钠法1.517±0.093;TT溶血法1.789±0.161:氯化胺法1.815±0.051.四种方法提取的基因组DNA总量分别为:加热法(9.34±3.59)μg;碘化钠法(7.82±4.23)μg;TT溶血法(20.98±3.56)μg;氯化胺法(22.07±4.53)μg;加热法与碘化钠法比较,TT溶血法与氯化胺法比较,P＞0.05,无显著性差异;TT溶血法、氯化胺法分别与加热法、碘化钠法比较,P＜0.05,有显著性差异.结论从提取的基因组DNA纯度和总量来比较,氯化胺法与TT溶血法是四种提取人微量全血基因组DNA方法中较好的两种.     

高血压大鼠重塑血管差异表达基因的克隆及表达

为从基因水平研究高血压病大鼠血管重塑机制，采用抑制消减杂交性筛选两肾一夹肾血管性高血压大鼠重塑大血管（胸主动脉）差异表达基因。经过两轮消减杂交和巢式聚合酶链反应扩增，获得了富集的差异表达cDNA片段，经Genbank等数据库进行同源比较，获得10余个差异表达的表达序列标签；采用Western blot方法对其中2个已知基因编码蛋白细胞色素C和Bcl-2的表达进行检测。结果发现细胞色素C在高血压大鼠重塑大血管组织中表达增高，而Bcl-2在高血压大鼠重塑大血管组织中表达减少。研究结果提示氧化应激导致细胞凋亡机制尤其是Bcl-2／细胞色素C－半胱天冬酶途径在大血管重塑过程中具有重要作用。     

中国人群MEF2A基因与冠状动脉疾病的易感性

目的：探讨中国人群MEF2A基因与CAD的易感性关系。方法：对175例冠状动脉疾病（CAD）患者和228例正常对照的血标本进行PCR扩增MEF2A基因的11个外显子，然后采用SSCP方法检测外显子的突变并对扩增产物进行纯化和测序分析。结果：MEF2A基因的第11外显子存在三核苷酸（CAG）重复多态性，CAD患者和正常对照之间无统计学差异（P〉0．05）；另发现4例CAD患者在第11外显子存在1个CCG的缺失突变，突变率约为2．3％，而正常对照未见此突变；CAD患者和正常对照组MEF2A基因的其它外显子未发现突变。结论：中国人群MEF2A基因第11外显子存在1个CCG的缺失突变可能与冠状动脉疾病惠者易感性有关。     

高敏C反应蛋白和脂蛋白(a)联合检测在冠心病诊断中的应用

目的 探讨高敏C反应蛋白（hs-CRP）和脂蛋白（a）联合检测对冠心病的诊断价值。方法 对166例疑诊冠心病的患者进行冠状动脉造影检查，根据造影结果分为冠心病组（CHD组）和非冠心病组（非CHD组），并分别进行hs-CRP和Lp（a）的测定、分析。结果 CHD组患者血浆hs-CRP和Lp（a）浓度均高于非CHD组（P〈0．01）。两项指标联合检测对CHD患者诊断的特异度（89．2％）高于分别应用hs-CRP（86．5％）或Lp（a）（70.3％）单一指标。结论 hs-CRP和Lp（a）两项指标联合检测更有助于冠心病的预测和论断．     

cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端延伸快速分离全长cDNA序列

建立一种cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端快速扩增分离人类新基因全长cDNA序列的新技术。以文库载体序列与待扩增目的基因片段为模板各设计引物进行热启动聚合酶链反应扩增，从人胎肝cDNA文库中获得氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化过程中差异表达序列标签片段（FRG4）的全长cDNA序列，聚合酶链反应产物克隆到pGEM-T载体中，并测序鉴定，从而成功获得FRG4的全长cDNA序列，该技术是一种快速有效的分离人类新基因全长cDNA序列的方法。