5-氟脲嘧啶联合尼美舒利对人食管癌EC109细胞VEGF表达的研究

目的:通过观察5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、尼美舒利(Nimesuhde,NIM)单独或联合作用对人食管癌EC109细胞血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,初步探讨5-FU、NIM抑制食管癌血管生成的机制.方法:培养食管癌EC109细胞,不同浓度5-FU、NIM单独或联合作用24 h后.MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测VEGF mRNA表达情况;Western blot法检测VEGF蛋白表达.结果:NIM与5-Fu联合作用于食管癌EC109细胞株时,其抑制率与凋亡率较两者单独作用时高,且VEGF mRNA及蛋白的表达水平低于两者单独作用时的表达水平.结论:NIM联合:5-FU能有效抑制食管癌EC109细胞增殖,其中抑制VEGF表达可能为其机制之一.     

MKK6过表达调控SIRT1影响食管癌细胞肿瘤行为学的体外研究

目的 向食管癌Eca109细胞中转染pcDNA3.1（+）/myc-His A-丝裂原活化蛋白激酶6（MKK6）重组过表达载体,观察过表达MKK6影响沉默信息转录调控因子（SIRT1）表达后肿瘤细胞增殖、凋亡以及侵袭力发生的变化,探讨p38-MAPK-SIRT1调节轴的存在性及其对Eca109细胞各项肿瘤行为学造成的影响。 方法 根据GenBank中MKK6基因的mRNA序列设计引物,构建MKK6过表达载体;将Eca109细胞分空载体转染组、MKK6过表达载体转染组、MKK6-SIRT1 ShRNA共转染组和MKK6-RES（白藜芦醇）组,相应处理后,采用Western blot测定各组Eca109细胞的SIRT1及MKK6表达水平,MTT法检测各组Eca109细胞的增殖活力,Transwell法观察各组Eca109细胞的侵袭力,流式细胞术检测各组Eca109细胞的凋亡情况。 结果 测序结果表明成功构建MKK6过表达载体;转染MKK6过表达载体可降低Eca109细胞的内源性SIRT1表达,减弱Eca109细胞的增殖活力,促其凋亡,同时可使Eca109细胞的侵袭力增强,以上各项改变均与SIRT1的表达水平有关。 结论 Eca109细胞内可能存在p38-MAPK-SIRT1调节轴,MKK6及其下游因子对SIRT1可能具有反馈调节作用,可引起Eca109细胞各项肿瘤行为学的变化。     

高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌VEGF的影响及氟伐他汀的干预作用

目的:观察氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响?方法:体外培养HPMCs,同步化48 h后,分组如下:正常对照组?HGPDS组?HGPDS+Flu组?单纯Flu组?倒置显微镜观察各组细胞形态,RT-PCR法检测各组VEGF的mRNA表达,Western blot检测各组VEGF蛋白的表达?结果:与正常对照组相比,在HGPDS作用下,48 h后细胞由铺路石样转变为长梭形,1 × 10-6 mol/L Flu可部分逆转HPMCs的形态改变?与正常对照组相比,在HGPDS作用下,人腹膜间皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达明显增多(P < 0.05),并呈时间依赖性,VEGF mRNA和蛋白分别在HGPDS干预后12 h和48 h达高峰(P < 0.05)?Flu可明显抑制HGPDS诱导的VEGF的表达(P < 0.05),并呈浓度依赖性?结论:适当浓度的Flu可以抑制HGPDS刺激体外培养人腹膜间皮细胞VEGF表达增加?     

沙利度胺促进肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

目的探讨沙利度胺单药及联合应用5-氟尿嘧啶(5-FU)+奥沙利铂对肝癌细胞株SMMC7721生长的影响。方法采用MTT法检测确定各个单药的IC50,并以药物的IC50作为后续实验的给药浓度。实验分为空白对照组、沙利度胺组、5-FU+奥沙利铂组及沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂组。MTT法检测各组药物作用24 h及48 h后对肝癌细胞的抑制率。各组药物作用48 h后,采用流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法测定SMMC7721细胞的Bcl-2、Bax mRNA的表达,Western blot法分析Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 MTT结果显示,药物作用24、48 h后,沙利度胺能够明显抑制肝癌细胞SMMC7721的增殖,促进其凋亡(抑制率分别为14.86%和24.24%),而沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂的抑制作用更加显著(抑制率分别为29.80%和40.53%),呈现时间依赖性。药物作用48h后,三个用药组的肝癌细胞均被阻滞于G0/GI期,且沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂组的阻滞作用更为明显(P0.05)。沙利度胺下调Bcl-2基因表达而上调Bax基因表达,且沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂对Bcl-2、Bax基因的调控作用更为显著,差异均有统计学意义(P0.01)。结论沙利度胺能够明显抑制SMMC7721细胞的增殖,且与5-FU及奥沙利铂具有协同作用,其机制可能与影响Bcl-2及Bax的表达有关。     

黄芪微乳载入修饰后胶原对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究黄芪微乳载入修饰后胶原对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,进一步探讨黄芪微乳对HUVEC增生的作用及其机制?方法:体外培养HUVEC细胞,用含1%FCS的RPMI-1640培养液同步24 h后,分为2组进行观察:空白微乳胶原组和黄芪微乳胶原组,并设定空白微乳和黄芪微乳的浓度分别为16.90?8.50?4.20?2.10?1.05 μg/ml等5个浓度,每组每个浓度设3个复孔?干预48 h后,采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞的增殖情况;实时荧光定量RT-PCR检测细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达?结果:干预48 h后,在浓度分别为16.9?8.5?4.2 μg/ml的黄芪微乳胶原组HUVEC的吸光度值?细胞分裂增殖指数和VEGF mRNA表达均明显高于相应浓度的空白微乳胶原组(P < 0.05,P < 0.01)?结论:黄芪微乳能促进HUVEC的增殖,并上调HUVEC的VEGF mRNA表达,推测黄芪微乳可能具有促进血管生成的作用?     

小白菊内酯对EC9706细胞增殖及VEGF、NF-κB P65蛋白表达的影响

目的:探讨小白菊内酯(PTL)对食管癌EC9706细胞的增殖、血管内皮生长因子(VEGF)及核转录因子-κB P65(NF-κB P65)蛋白表达的影响.方法:倒置显微镜下观察不同浓度(20、40和80 μmol/L)的PTL作用48 h后EC9706细胞的形态学变化;MTT法检测20、40和80 μmol/L PTL及20 μmol/L PTL与25 mg/L 5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对EC9706细胞增殖的影响;免疫细胞化学法检测20和40 μmol/L的PTL作用72 h后EC9706细胞VEGF和NF-κB P65蛋白表达的改变.结果:①PTL作用EC9706细胞48 h后,细胞数量减少,细胞固缩变圆,核浓缩、核质分布不清,细胞溶解碎裂.②PTL及联合组作用于EC9706细胞24、48和72 h后,相同时间段各组细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(χ224 h=31.420,P<0.001;χ248 h=34.590,P<0.001;χ272 h=38.190,P<0.001).PTL对EC9706细胞的增殖有抑制作用;细胞培养72 h后PTL与5-FU联合组对EC9706细胞的抑制作用与50 mg/L 5-FU组相当.③PTL作用EC9706细胞后,与对照组比较VEGF和NF-κB P65蛋白表达均降低(χ2NF-κB P65=25.120,P<0.001;χ2VEGF=22.190,P<0.001).结论:PTL能抑制EC9706细胞的增殖,增加EC9706对5-Fu的敏感性;PTL的抗肿瘤机制可能与抑制NF-κB传导通路有关.     

多种病理因素对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响及VEGF的干预作用

目的 研究缺氧、H2O2、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对血管内皮细胞(VEC)增殖、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及血管内皮生长因子(VEGF)的干预作用,探讨VEGF预防经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄和支架内血栓形成的机制.方法 将VEC分成对照组、缺氧处理组、缺氧+VEGF处理组、H2O2处理组、H2O2+VEGF处理组、OX-LDL处理组、OX-LDL+VEGF处理组、TNF-α处理组和TNF-α+VEGF处理组.利用四氮唑盐比色法检测各组细胞吸光度值,观察VEC增殖情况,采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,通过RT-PCR法了解各组细胞凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/Fas mRNA表达情况.结果 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α处理组凋亡细胞和Apo-1/Fas mRNA表达明显多于对照组和相应VEGF处理组,而细胞增殖和Bcl-2 mRNA表达则明显低于对照组和相应VEGF处理组(均P<0.01).结论 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α能抑制VEC增殖,诱导VEC凋亡,而VEGF能部分拮抗上述作用,其抗凋亡作用可能与Bcl-2 mRNA表达上调和Apo-1/Fas mRNA表达下调有关,为VEGF用于预防PCI后再狭窄和支架内血栓形成进一步提供了理论依据.     

茵陈色原酮对结肠癌细胞增殖迁移的作用及其机制研究

目的:探讨茵陈色原酮(capillarisin,Cap)对结肠癌细胞增殖及迁移能力的影响及其机制?方法:采用不同浓度的Cap体外干预结肠癌细胞SW620及正常结肠细胞FHC,CCK-8比色法检测细胞增殖活性,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,实时定量PCR(qPCR)法检测癌基因(K-ras?c-Src?c-Myc)的mRNA表达,Western blot检测细胞上皮-间质转化(EMT)标志蛋白(E-cadherin?Vimentin)表达?结果:与DMSO对照组相比,各组Cap可显著抑制结肠癌细胞SW620增殖活性及迁移细胞数(P < 0.05),但对正常结肠细胞FHC增殖及迁移作用无显著差异(P > 0.05);与5-FU组相比,各组Cap对于正常结肠细胞FHC的增殖及迁移活性抑制作用显著减小(P < 0.05)?与DMSO对照组相比,各组Cap可显著降低结肠癌细胞K-ras?c-Src?c-Myc的mRNA水平?与DMSO对照组相比,Cap高剂量组可提高结肠癌细胞上皮标志物E-cadherin蛋白表达,降低间质标志物Vimentin蛋白表达?结论:Cap可能通过抑制癌基因(K-ras?c-Src?c-Myc)mRNA表达抑制结肠癌细胞增殖,通过逆转EMT过程抑制结肠癌细胞转移?与5-FU相比,Cap可能具有更好的应用安全性,具有开发为新一代天然抗肿瘤单体药物的前景?     

LINC02695表达在糖尿病视网膜病变新生血管中的初步研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC02695在高糖(HG)环境下人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)中的表达及其对HRMECs的增殖、迁移及新生血管形成的影响。方法 HRMECs分为4组,分别为正常糖(NG)组(5.5 mmol/L)、HG组(30.0 mmol/L)、HG+LINC02695沉默(HG+si-LINC02695)组、HG+沉默对照(HG+si-NC)组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组HRMECs中LINC02695及VEGF mRNA的表达情况,CCK-8法测定各组细胞的增殖情况,Transwell实验检测各组细胞的迁移能力,管形成实验检测各组细胞的成管能力。结果 qPCR结果显示：与NG组比较,HG组细胞LINC02695、VEGF mRNA呈高表达(P<0.05);与HG组比较,HG+si-LINC02695组细胞VEGF mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。CCK-8实验结果显示：与NG组比较,HG组细胞增殖能力明显增强(P<0.05);与HG组比较,HG+si-LINC02695组细胞增殖能力明显下降(P<...     

转录因子Ets差异基因5在血管平滑肌细胞表型转化中的作用

目的 探讨转录因子Ets差异基因5(ETV5)在血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法 分别采用ETV5过表达腺病毒载体(Ad-ETV5组)和绿色荧光蛋白(GFP)过表达腺病毒载体(Ad-GFP组)转染VSMC.人ETV5特异性小干扰RNA[血小板源性生长因子(PDGF)-BB+ siRNAETV5组]及其随机阴性序列(PDGF-BB+siRNAdacfsdmbk组)分别转染VSMC后采用PDGF-BB诱导VSMC表型转化.分别采用实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法检测各组细胞中VSMC表型标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和肌球蛋白重链11 (MYH11) mRNA和蛋白的表达水平.分别采用平板划痕实验和CCK-8试剂盒检测各组VSMC的迁移和增殖活性.结果 与Ad-GFP组相比,Ad-ETV5组VSMC中α-SM和MYH11 mRNA和蛋白的表达均降低(P＜0.05),迁移和增殖活性均升高(P＜0.05).与PDGF-BB+ siRNAdscvmble组相比,PDGF-BB+ siRNAETv5组VSMC中α-SMA和MYH11 mRNA和蛋白的表达均升高(P＜0.05),而迁移和增殖活性降低(P＜0.05).结论 ETV5参与了VSMC的表型转化.     

胰十二指肠切除术后住院时间影响因素分析-回顾性研究

Background. Postoperative hospital stay after pancreaticoduodenectomy (PD) was relatively longer than other gastrointestinal operations, The aim of current study was to investigate the risk factors of postoperative hospital stay after PD. Methods. Patients who were performed PD in Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (CHCAMS) between December 2008 and November 2012 were selected for the retrospective study. The clinical and pathological data was collected and analyzed. The primary outcome was postoperative hospital stay. Normal discharge or recovery was defined as postoperative hospital stay no more than 10 days, otherwise it was defined as delayed discharge or recovery (including hospital death). Results. Finally, 152 patients were enrolled in present study. Postoperative hospital stay was 19.7±7.7 (7-57 d). 67 of 152 patients were normal discharge, and 85 of 152 patients were delayed discharge. The overall morbidity of complications was 62.5% (95/152), and the mortality rate was 3.29% (5/152). Multiple factors analysis showed that complication morbidity (adjusted OR=10.40, 95%CI=3.58-30.22), age (adjusted OR=4.09, 95%CI=1.16-14.39), BMI (body mass index) (adjusted OR=4.40, 95%CI=1.19-16.23), surgical procedure (adjusted OR=26.14, 95%CI=4.94-153.19), blood transfusion (adjusted OR=7.68, 95%CI=2.09-28.27) and fluid input (adjusted OR=3.47, 95%CI=1.24-11.57) were significantly associated with delayed discharge. Conclusions. Postoperative complications affects the postoperative hospital discharge. Furthermore, age, BMI, transfused red blood, surgical procedure and input might prolong LOS (length of hospital stay). Studies with more patients were needed in future.     

矮身材儿童血铅镉锌钙铁铜镁水平分析

目的探讨血铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平对儿童生长发育的影响。方法通过采用钨舟原子吸收光谱仪测定我院儿保门诊53例矮身材儿童（矮身材组）及53例正常儿童（对照组）末梢静脉血中铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平,并对其与儿童生长发育关系进行分析。结果矮身材儿童血铅明显高于正常对照组,锌、钙、铁明显低于正常对照组（P〈0．05）。而血镉、铜、镁与对照组则无明显差异。矮身材组血铅男童明显高于女童（P〈0．05）。结论矮身材儿童的生长发育迟缓可能与高血铅,低血锌、钙、铁密切相关。儿童铅中毒防治和合理的膳食结构是降低儿童矮身材发生率的重要措施。     

原子吸收火焰法测定合力康粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量

目的：采用原子吸收火焰法测定合力康粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量。方法：用盐酸-硝酸-水(9：1．5：25)混酸湿法水浴加热消化处理样品，硝酸锶作镁离子释放剂，乙炔-空气火焰原子吸收法。结果：钾、钠、钙镁、锌、铁加样回收率与RSD(n=5)分剐为98．3％、0．8％；100．8％、3．2％；101．8％、1．3％；102．5％、2．1％；101．2％、2．8％；97．4％、2．4％。特征浓度分别为(产生0．0044吸收所需要的浓度，μg/m1)0．02、0．01、0．07、0．003、0．0l、0．06。结论：该方法简便、快速、结果准确，适用于合力康粉剂粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量测定。     

检测阴性设计：基本原理、方法、衍生设计、优劣势及应用

检测阴性设计是一种简便、快速且有效的研究方法,被广泛应用于疫苗上市后效果评价,有助于国内外基层医疗卫生机构及其他卫生机构评估疫苗上市后效果及其他干预措施效果,其应用前景广阔。随着实时检测阴性设计、整群随机检测阴性设计等新型衍生设计类型的出现,该研究设计被逐步应用于疾病危险因素探索、干预措施效果评估等。然而目前国内相关研究报道较为缺乏。本研究介绍了检测阴性设计的定义、基本原理、方法、设计实施要点,以及实时检测阴性设计、整群随机检测阴性设计等最新衍生设计类型、优势、局限性,在疫苗上市后效果评价以及其他干预措施效果评估等方面的应用,为国内学者开展相关研究提供理论与实践依据。     

蝌蚪中铜、锌、镁、铁、钙含量测定

目的 :探讨蝌蚪的化学成分。方法 :用火焰原子吸收分光光度法测定蝌蚪中无机元素的含量。结果 :蝌蚪中的无机元素铜、锌、镁、铁、钙的质量分数分别为 :0 .0 72mg·g-1、0 .12 4mg·g-1、3.316mg·g-1、5 .776mg·g-1和31.5 1mg·g-1。结论 :蝌蚪中无机元素钙的含量很高