双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.     

hS100A6 inhibits proliferation, induces apoptosis and up-regulates Wnt/β-catenin activity in ovarian cancer cell lines HO8910 and HO8910 PM

目的 研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响.方法 通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响.结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P＜0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的 凋亡(P＜0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位.结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径.     

沉默环状RNA PIP5K1A通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来降低口腔鳞癌细胞生长与转移

目的 研究环状RNA PIP5K1A(circPIP5 K1 A)对口腔鳞癌(OsCC)细胞生长和转移的影响及可能的作用机制.方法 用RT-qPCR法检测OSCC组织和细胞中circPIP5K1A的表达情况.将si-circPIP5 K1A转入OSCC细胞后,CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞集落形成能力,An-nexin V-FITC/PI染色流式细胞术法检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移与侵袭,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达.Wnt/β-catenin信号通路激动剂LiCl处理已转染si-circPIP5 K1A的OSCC细胞后,分别检测细胞活力、集落形成能力、凋亡、迁移与侵袭.结果 circPIP5K1A在OSCC组织和细胞中上调表达(P＜0.05).沉默cir-cPIP5 K1A后,OSCC细胞的细胞活力、集落形成、迁移与侵袭的能力均降低(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05),Wnt1和β3-catenin蛋白表达降低(P＜0.05).LiCl能抑制沉默cir-cPIP5 K1A对OSCC细胞的生长与转移的抑制作用(P＜0.05).结论 沉默circPIP5 K1 A能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来发挥抑制OSCC细胞的生长与转移的作用.     

hS100A6抑制卵巢癌细胞HO8910和HO8910 PM增殖、促进凋亡并上调其Wnt/β-catenin活性

目的研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响。方法通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响。结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P<0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的凋亡(P<0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位。结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径。     

β-catenin降低外源性hS100A6对骨肉瘤细胞的抑制作用

目的 研究外源件hS100A6抑制骨肉增细胞作用与Wnt/β.catenin信号途径的关系.方法 用携带人β-catenin及其siRNA基因的重组腺病毒Adβ-catenin和AdSiβ-catenin分别上调和下调MG63和U2OS细胞中β-catenin水平,再用重组hS100A6处理这些细胞,然后通过MTT法检测细胞增殖能力的变化,Hochest染色法检测细胞凋亡的变化,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化.结果 ①外源性hS100A6抑制2株骨肉瘤细胞的增殖(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对这2株细胞的增殖抑制作用(P<0.05);②外源性hS100A6促进2株骨肉瘤细胞的凋亡(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别增强和减弱hS100A6对这2株细胞的促凋亡作用(P<0.05);③外源性hS100A6抑制骨肉瘤细胞株MG63的迁移(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对MG63的迁移抑制作用(P<0.05).结论 β-catenin负性调节hS100A6对骨肉瘤的抑制作用;hS100A6对骨肉瘤的抑制作用可能经由Wnt信号途径及其他信号途径共同调控.     

钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的上调作用

目的研究钙结合蛋白S100A2对Wnt／β-catenin信号途径活性的影响，并探讨其可能的机制。方法原核诱导表达GST-hSl00A2，经纯化后加入骨肉瘤细胞株MG63和人结肠癌细胞株HCT116的培养液中，Westernblot检测细胞中β-catenin含量的变化；荧光素酶活性分析法检测S100A2对HEK293细胞中β-catenin／TCF4活性的影响；以表达GSK-3β、DVL、Axin的相应质粒分别转染HEK293细胞，GST—Pulldown／Westernblot实验检测S100A2与这些蛋白质和β-catenin之间的相互作用。结果S100A2使MG63和HCT116细胞中β-catenin含量增加、β-catenin／TCF4活性增强；S100A2分别与β-eatenin和GSK-313之间存在相互作用，而与DVL和Axin之间则未发现相互作用。结论S100A2可以上调Wnt／β-catenin信号途径的活性，其机制可能涉及S100A2与β-catenin和GSK-3β之间的相互作用。     

人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制

【摘要】 目的 探讨人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制。 方法 将人肝癌细胞株HepG2细胞分为肝癌组（无干预的HepG2细胞）、miR-26a组（HepG2细胞转染miR-26aminmics）（模拟物）、miR-26a-NC组（HepG2细胞转染miR-26a-NC）（空转）,多种方法检测HepG2生物活性,免疫印迹和PCR分别检测β-catenin、Wnt3蛋白水平和mRNA表达。结果 miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,与miR-26a NC组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3蛋白水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3蛋白水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3mRNA水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3mRNA水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论miR-26a抑制HepG2细胞活性,促使其凋亡,其作用机制可能与抑制β-catenin、Wnt3表达相关。     

沉默β-catenin表达对胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响与作用机制研究

目的探讨β-链蛋白（β-catenin）表达下调对胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响,并分析其作用机制。方法将RNA干扰慢病毒（β-catenin-RNAi慢病毒）及空载体慢病毒（β-catenin-Neg）分别感染MGC-803细胞,分为实验组（MGC-803-RNAi细胞）、阴性对照组（MGC-803-Neg细胞）、空白对照组（未处理的MGC-803细胞）。Westernblot检测验证转染效率;双染流式细胞术检测细胞凋亡率,单染流失细胞术分析细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力;Westernblot检测细胞Bax、Bcl-2、cyclinD1及基质金属蛋白酶（MMP）-7蛋白表达水平。结果MGC-803-RNAi、MGC-803-Neg细胞中显示绿色荧光的细胞约占80%,MGC-803细胞不显示荧光;与MGC-803-Neg、MGC-803细胞相比,MGC-803-RNAi细胞β-catenin表达水平明显下调(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),出现G1/S期阻滞现象(P＜0.05),侵袭能力明显减弱(P＜0.05),Bcl-2、cyclinD1及MMP-7蛋白表达水平下调(均P＜0.05）,而Bax蛋白表达水平上调(P＜0.05)。结论沉默β-catenin表达可促进胃癌MGC-803细胞凋亡,阻滞其细胞周期进程,减弱其侵袭转移力,其作用机制可能与影响Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白表达有关。     

二十二碳六烯酸对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对人胆管癌QBC 939细胞增殖、凋亡和周期的影响,并初步探讨可能的分子机制.方法 采用MTT法检测DHA和花生四烯酸(AA)对QBC 939细胞增殖的影响;流式细胞术检测DHA对QBC 939细胞凋亡和周期的影响;免疫印迹法检测DHA作用于QBC 939细胞后β -catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白表达量的变化.结果 作用浓度为80和100μg/mL的DHA可显著降低QBC 939细胞存活率,且呈一定的剂量、时间效应(P＜0.05),AA无明显作用.经80μg/mL DHA作用24 h后,QBC 939细胞早期凋亡率明显增加(P＜0.05),G0/G1期细胞显著增多(P＜0.05),G2/M、S期细胞减少(分别P＜0.01及P＜0.05).β-catenin、c-myc、cyclin D1表达量均下调.结论 DHA可抑制人胆管癌QBC939细胞增殖,促进其凋亡,部分作用机制可能是下调Wnt/β -catenin信号传导通路中β-catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白的表达.     

P62 基因对恶性黑色素瘤细胞侵袭的 影响及机制研究

目的 探讨P62 基因在恶性黑色素瘤A375 细胞迁移、侵袭中的作用及其机制。方法 取对数生 长期的恶性黑色素瘤A375 细胞,采用干扰P62 基因表达的siRNA 及阴性对照siRNA 分别转染A375 细胞。 采用Transwell 法检测干扰组及对照组的细胞迁移、侵袭能力,Western blotting 检测干扰组及对照组Wnt/ β-catenin 信号通路的表达。结果 干扰组细胞Transwell 迁移、侵袭能力较对照组下降（P <0.05）;且干扰 组Wnt/β-catenin 及下游通路因子（P62、ZEB1、β-catenin、TCF4、c-Myc、c-Jun 及CCND1）均受抑 制（P <0.05）。结论 P62 可能通过调控Wnt/β-catenin 及下游通路促进黑色素瘤细胞的迁移、侵袭。     

S100A4基因在不同骨肉瘤细胞和组织中的表达

[目的]检测S100A4基因在人骨肉瘤细胞系MG-63、U-20S以及骨肉瘤组织中的表达情况并分析其临床意义.[方法]应用Real -time PCR方法检测S100A4基因在人骨肉瘤细胞MG -63及U- 20S中的表达,用免疫组织化学SP法检测骨肉瘤S100A4、CD44V6蛋白表达,并分析二者的关系.[结果]人骨...     

SYSMEX UF-100尿沉渣分析仪原理及维修

本文介绍了 SYSMEX UF-100全自动尿沉渣分析仪的检测原理、工作原理、仪器的常见故障检修,并提供了相应部分的流程图.     

EC9706、Eca109细胞系中S100A4及基质金属蛋白酶-2的表达

目的:检测食管鳞状细胞癌EC9706、Eca109细胞系中S100A4及基质金属蛋白酶-2(MMP-2,的表达.方法:采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测EC9706、Eca109中S100A4蛋白及MMP-2蛋白的表达,采用RT-PCR法检测EC9706和Eca109细胞中S100A4与MMP-2的mRNA表达.结果:EC9706、Eca109细胞系中均存在S100A4与MMP-2蛋白及mRNA的表达,S100A4蛋白及MMP-2蛋白的阳性表达主要定位于胞浆中,Eca109细胞系中偶见胞核着色.Eca109细胞系中S100A4与MMP-2蛋白和S100A4 mRNA的表达量高于EC9706(P<0.05).结论:在EC9706、Eca109细胞系中均有S100A4、MMP-2的表达,提示S100A4可能在食管鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用.     

S100A2蛋白在人食管鳞状细胞癌中的表达

目的研究人食管鳞状细胞癌中S100A2蛋白的表达及其意义。方法采用免疫组织化学(SP)方法检测60例食管鳞状细胞癌(ESCC)组织和60例手术切缘食管黏膜组织中S100A2蛋白的表达水平。结果S100A2蛋白在食管鳞状细胞癌中阳性表达率为80.3%(50/60),在手术切缘食管黏膜组织中阳性表达率为100%(60/60),两者之间差异有显著性(P<0.05);其中高、中、低分化癌三组间差异有显著性(P<0.05),并且高、中分化癌组S100A2蛋白表达阳性率显著高于低分化癌组(P<0.05),另淋巴结转移组S100A2蛋白表达阳性率与无淋巴结转移组之间差异有显著性(P<0.05)。S100A2蛋白表达与患者性别、年龄、临床分期、肿瘤部位、大小及浸润深度均无关。结论S100A2蛋白在食管鳞状细胞癌中阳性表达率下降,与食管癌的发生及分化程度有关。S100A2蛋白可作为判断食管癌生物学行为的重要参考指标。     

肾细胞癌组织中S100蛋白表达及与P53的关系

目的:探讨肾细胞癌组织中S100蛋白的表达情况、临床意义及与P53的关系。 方法:采用免疫组织化学染色法检测36例肾细胞癌及14例正常肾组织中S100A1蛋白、S100B蛋白和突变型P53的表达，观察并分析S100蛋白与肾细胞癌临床分期、病理类型、及与突变型P53表达的关系。 结果:肾细胞癌组织S100A1表达阳性率72.2%，高于正常肾组织的21.4%（P<0.01）。随肾癌分期和恶性程度的增加，S100A1的表达阳性率增加。肾细胞癌组织中突变型P53表达阳性率30.6%，正常肾组织中的阳性率则为0（P<0.05）;P53表达与肾癌分期和癌细胞恶性程度无关（P>0.05）。肾细胞癌组织S100B表达阳性率36.1%，正常肾组织表达阳性率为64.3%（P>0.05）。S100A1,S100B在肾癌中的表达与突变型P53无显著相关性（P>0.05）。 结论:S100A1蛋白在肾癌组织中表达增高，且随肾癌分期以及肾细胞癌恶性程度的增加，其表达阳性率均增加。S100A1蛋白可能成为判断肾细胞癌侵袭性和恶性程度一项新的、有意义的指标。     

人非小细胞肺癌组织中S100A4与E-cadherin的表达

目的:检测人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中S100A4和E-cadherin的表达.方法:应用免疫组织化学SP法检测86例NSCLC组织(TNM分期Ⅰ期24例,Ⅱ期48例,Ⅲ期14例;淋巴结转移阴性36例,阳性50例;分化程度低分化36例,中高分化50例)和20例正常肺组织中S100A4和E-cadherin蛋白的表达水平.结果:NSCLC组织中S100A4和E-cadherin的阳性表达率分别为55.8%和41.9%;正常肺组织中S100A4无表达,E-cadherin阳性表达率为95.0%;2者在正常肺组织与NSCLC组织中阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.05.NSCLC组织中S100A4的阳性表达与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移有关(P＜0.05或0.005,与分化程度无关(P＞0.05);E-cadherin阳性表达与年龄、TNM分期及肿瘤分化程度有关(P＜0.05或0.005),与肿瘤大小和淋巴结转移无关(P＞0.05). NSCLC组织中S100A4和E-cadherin的表达呈负相关(P＜0.05).结论:联合检测S100A4与E-cadherin对判断NSCLC的生物学行为有重要的临床意义.     

S100A4基因差异表达与肾癌细胞分化、转移关系的研究

目的 探讨S100A4基因mRNA表达与肾癌细胞分化、转移的关系。方法 提取31对肾癌及正常组织配对标本的总RNA，用RT—PCR方法测定S100A4基因的表达，并结合临床资料，对S100A4基因差异表达与肾癌病人临床表现的相关性进行研究分析。结果 29例标本肿瘤组织中S100A4基因mRNA表达明显高于癌旁正常肾组织；其中低分化肿瘤组病人的阳性表达率高于高分化组（7．94vs5．06，P〈0．001）；发生转移（包括淋巴结转移和远处转移）者高于无转移者（9．61vs5．53，P〈0．001）；低年龄组病人（≤50岁）阳性表达率与高年龄组（〉50岁）差异无显著性（6．31vs6．66，P〉0．05）；肾颗粒细胞癌组与透明细胞癌组差异无显著性（6．98vs6．02，P〉0．05）；肿瘤直径≤5cm组与〉5cm组差异无显著性（5．95vs6．93，P〉0．05）。结论 S100A4基因表达与肾细胞癌分化有关，癌组织S100A4mRNA测定有助于判定肿瘤的预后；S100A4基因差异表达与肾细胞癌转移明显相关，肾癌组织中S100A4基因mRNA可望作为肾细胞癌的病情发展及指导临床治疗的标记物之一。     

S100A4蛋白在口腔鳞状细胞癌的表达及其意义

目的:探讨S100A4蛋白在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的表达及其意义.方法:采用免疫组化SP法检测61例OSCC组织和20例正常口腔黏膜(NOM)组织中S100A4蛋白的表达情况,并分析S100A4蛋白的表达与OSCC临床病理特征之间的关系.结果:NOM组织中S100A4蛋白不表达,在OSCC组织中S100A4蛋白的表达率为24.6%,两者差异有统计学意义(P＜0.05).在OSCC中,S100A4蛋白的表达与组织学分级无关(P＞0.05),与淋巴结转移有一定关系(P＜0.01);结论:S100A4蛋白与OSCC的侵袭和转移有一定关系,是判断口腔鳞癌生物学行为、预测转移趋势的有价值指标之一.     

非小细胞肺癌中S100A2和p53蛋白的表达

目的 研究S100A2蛋白和p53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,阐明其与肺癌发展及转移的关系.方法 以15例正常肺组织为对照,采用免疫组织化学方法 (SP法)检测32例鳞癌、28例腺癌中S100A2、p53蛋白的表达水平.结果 S100A2蛋白在NSCLC中表达率为70.0%(42/60),在正常组织中表达率为20.0%(3/15).p53蛋白在NSCLC中表达率为63.3%(38/60),在正常组织中表达率为26.6%(4/15).肿瘤与正常组织表达差异有显著性(P＜0.01).S100A2蛋白在肺腺癌和肺鳞癌中的表达率分别为60.7%(17/28)和78.1%(25/32),差异无统计学意义.p53蛋白在鳞癌中表达率为78.1%(25/32),在腺癌中的表达率为46.4%(13/28),差异有统计学意义(P＜0.05).S100A2蛋白和p53蛋白在Ⅰ期患者中表达率分别为43.7%(7/16)和12.5%(2/16),Ⅱ、Ⅲ期患者中的表达率为79.5%(35/44)和81.8%(36/44),差异有统计学意义(P＜0.05).p53蛋白表达率低分化组为79.1%(19/24),中、高分化组为52.7%(19/36),差异有统计学意义(P＜0.05).有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的S100A2蛋白阳性表达率分别为82.75%(24/29)、5 8.06%(18/31),有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P＜0.01).有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的p53蛋白阳性表达率分别为82.76%(24/29)、45.16%(14/31),有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 S100A2蛋白和p53蛋白在有淋巴结转移、TMN分期高的肺癌组织中表达显著增加,p53蛋白在不同分化程度的NSCLC中表达有差异,分化程度低的肿瘤p53蛋白表达增高.提示S100A2和p53蛋白可作为判断肺癌生物学行为的重要参考指标.     

膀胱移行细胞癌中S100A4蛋白和钙粘蛋白-E表达及意义

目的通过检测S100A4蛋白和钙粘蛋白-E在膀胱移行细胞癌组织中的表达,探讨其在膀胱移行细胞癌发生、发展中所起的作用。方法采用免疫组织化学方法检测S100A4蛋白和钙粘蛋白-E在38例膀胱移行癌组织及其相应癌旁组织中的表达。结果 S100A4蛋白在膀胱移行细胞癌及癌旁膀胱组织中的阳性表达率分别为55.3%（21/38）、0.0%（0/38）。膀胱移行细胞癌组织中S100A4蛋白水平明显高于癌旁膀胱组织（P〈0.05）,在膀胱移行细胞癌组织中的表达与肿瘤病理分级（P〈0.05）、临床分期（P〈0.05）呈正相关,与有无淋巴结转移相关（P〈0.05）。E-cad蛋白在膀胱移行细胞癌组织中及癌旁组织中的阳性表达率分别为47.4%（18/38）、81.6%（31/38）,有显著性（P〈0.05）。膀胱移行细胞癌组织中E-cad蛋白阳性表达率与患者病理分级、临床分期及淋巴结转移有关（P〈0.05）。膀胱移行细胞癌组织中,S100A4蛋白与E-cad蛋白的表达呈负相关（P〈0.05）。结论 S100A4蛋白及E-cad蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达变化与肿瘤的发生、进展、预后密切相关,是判断其生物学行为、预测转移趋势极具价值的指标。