人参皂苷Rh2抑制肝癌HepG2细胞迁移的实验研究

目的:研究人参皂苷Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移的影响及其机制。方法:取对数生长期Hep G2细胞,Rh2(10~160μmol/L)诱导,同时设空白对照组,用CCK-8检测Rh2对细胞增殖影响;Transwell检测Rh2对细胞的迁移的影响;荧光素报告基因筛选可能的信号通路;Western blot检测Hep G2细胞中P-ERK、ERK、P-P38、P-38、P-JUK、JUK、MMP3等蛋白的表达;定量PCR方法检测AP1、MMP3基因的表达;荧光显微镜分别观察AP1、MMP3蛋白在细胞内的表达及分布。结果:CCK-8检测结果显示Rh2对肝癌Hep G2细胞生长抑制呈剂量和时间依赖性;Transwell检测显示Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移有明显的抑制作用;荧光素报告基因筛选出AP1转录因子;Western blot检测结果显示P-ERK、MMP3蛋白表达水平呈下降趋势,PJUK、P-P38蛋白表达水平明显升高,ERK、JUK、P38蛋白则无明显变化;定量PCR方法结果显示:AP1、MMP3的基因表达下降。荧光结果显示:AP1、MMP3均分布在胞质内,随药物浓度的增加其荧光表达量减弱。结论:人参皂苷Rh2可通过激活MAPK通路来抑制肝癌Hep G2细胞的迁移。     

人骨形态发生蛋白3抑制骨肉瘤细胞系MG63和U20S的体外生长

目的 研究人骨形态发生蛋白3（hBMP3）对骨肉瘤细胞系MG63和U2OS的生物学作用。方法 hBMP3的重组腺病毒和表达hBMP3的条件培养液（rhBMP3-CM）干预MG63和U2OS,台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化;空白组不做任何处理,实验对照组用AdGFP组和rGFP-CM处理。 结果 实验对照组和空白组间差别无显著性。与各自的对照组相比,在观察时间内,两种处理均致实验组细胞：（1）存活率降低;（2）凋亡率增加;（3）穿膜细胞数减少;（4）碱性磷酸酶活性增加。 结论 hBMP3对骨肉瘤细胞系具有抑制作用,并促其向成骨方向分化。     

人参皂苷Re对K562细胞向红系分化的作用

背景:既往研究表明,人参皂苷既能促进正常血细胞生成,又能抑制白血病细胞的增殖,人参皂苷Re是人参皂苷的一类主要有效成分,有多种活性,但是对白血病细胞的作用及机制尚不清楚.目的:观察人参皂苷Re对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)分化的影响.方法:取对数生长期的K562细胞,调整细胞浓度为7×108 L-1.空白对照组予以RPMI1640培养基常规培养;人参皂苷Re组予以含人参皂苷Re的RPMI1640培养基培养,终浓度分别为30,60,90,120,150 μmol/L.Wright's染色、联苯胺染色、血红蛋白测定检测K562细胞向红系细胞分化的特征,流式细胞术测定细胞表面标志物表达.结果与结论:人参皂苷Re 90 μmol/L可以诱导K562细胞向早期红系细胞分化,表现为:①K562细胞形态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,胞浆丰富,核浆比例降低.②人参皂苷Re在体外对K562细胞有诱导血红蛋白生成的作用.③细胞膜表面CD13阳性率增加.     

比较两种方法对牛鲍氏计数板中细胞计数结果的影响

目的 比较牛鲍氏计数板的传统计数方法和新计数方法对细胞计数结果的影响.方法 用传统计数方法和新计数方法计数118份抗凝血标本中的红细胞,然后将结果与标准值对照.结果 在109份有效样本中,有57份(52.29％)用新方法计数结果更准确,40份(36.70％)用传统方法计数结果更准确,12份(11.01％)用两种方法计数引出的误差相同.新方法计数误差的平均值为(0.071±0.005)×1012/L,明显低于传统方法计数误差的平均值(0.079±0.006)×1012/L,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 采用新方法在减小牛鲍氏计数板对细胞计数的误差方面可能有一定的作用.     

人S100A2-GST融合蛋白原核表达和纯化

目的：制备人S100A2-GST融合蛋白（HumanS100A2-GST fusion protein,hSIOOA2-GST）,为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基咄。方法：从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原恢≠若盘载体pGST-molue,构建pGST-molue-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量。结果：XhoI和EcoRI双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300bp和5kh,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36kD的蛋白,产率达5mg／L菌液;Glutathion～Sepharose4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92％;WesternBlot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白。结论：成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose4B球珠可获得纯度达92％的该蛋白。为后续有关hS100A2的研究打下了基础。     

人参皂苷Rh_2通过激活GSK-3β降解β-catenin发挥抗肝癌作用研究

目的探讨人参皂苷Rh2抗肝癌作用机制。方法 HE染色观察HepG2和HepG2-β-catenin荷瘤裸鼠肿瘤组织的细胞形态;免疫组化检测GSK-3β、β-catenin和MMP-3表达;ELISA法检测肿瘤细胞GSK-3β活性;PCR检测GSK-3β、β-catenin、Bcl-2、Cyclin D1、Bax和MMP-3基因的表达;Western blotting蛋白印迹法检测GSK-3β和β-catenin的表达。结果 HepG2组和HepG2-β-catenin组荷瘤裸鼠肿瘤细胞核成异型性,占整个细胞比例大,但HepG2-β-catenin组更明显。HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组和HepG2+人参皂苷Rh2组肿瘤细胞胞核固缩,出现大量破碎细胞,而HepG2+人参皂苷Rh2组肿瘤细胞核固缩及破碎细胞更明显。免疫组化结果显示人参皂苷Rh2诱导HepG2及HepG2-β-catenin荷瘤裸鼠后,GSK-3β表达增强,β-catenin、MMP-3表达降低;HepG2+人参皂苷Rh2组中β-catenin、MMP-3表达弱于HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组,而GSK-3β表达则无明显差异。ELISA结果显示,人参皂苷Rh2诱导HepG2及HepG2-β-catenin荷瘤裸鼠后,GSK-3β的活性均升高。PCR结果显示,HepG2+人参皂苷Rh2组中β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2基因表达弱于HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组,Bax基因表达增强更明显,而GSK-3β基因表达无明显差异。Western blotting结果显示,HepG2+人参皂苷Rh2组中β-catenin蛋白表达弱于HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组,而GSK-3β蛋白表达无明显差异。结论人参皂苷Rh2对肝癌的抑制作用是通过激活GSK-3β降解β-catenin而实现的,且能抑制肿瘤的转移。     

人参皂苷单体Rb1及Rg1对白血病细胞K562增殖的影响

背景：国内外研究发现人参皂苷及其单体在抑制白血病细胞增殖、增加化疗药物的敏感性和逆转耐药等方面均有疗效，目前主要集中于对实体瘤和急性白血病的研究，涉及慢性白血病的报道非常少。 目的：探讨人参皂苷单体Rb1，Rg1对人慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2008-03/2009-03在重庆医科大学干细胞与组织工程研究室和眼科实验室完成。 材料：K562细胞由重庆医科大学临床检验系提供。纯度为98.6%的人参皂苷单体Rb1，Rg1由南京艾斯替么中药研究所提供。 方法：取对数生长期的K562细胞，调整密度为7×108 L-1，空白对照组予以常规培养；人参皂苷单体Rb1组分别加入20，40，80，160 μmol/L的Rb1；人参皂苷单体Rg1组分别加入5，10，20，40，80 μmol/L的Rg1。 主要观察指标：MTT比色法、锥虫蓝拒染法检测K562细胞增殖情况，流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。 结果：人参皂苷单体Rb1，Rg1在体外对K562细胞增殖均有明显的抑制作用，在20~160 μmol/L Rb1和5~20 μmol/L Rg1浓度范围内，其抑制作用呈浓度依赖性，且均在作用48 h时抑制率达高峰。与空白对照组比较，体外培养48 h后160 μmol/L Rb1组细胞周期分布无变化；20 μmol/L Rg1组S期细胞比例明显增加(P < 0.05)，G1期细胞比例明显下降(P < 0.05)，且160 μmol/L Rb1组、20 μmol/L Rg1组均未出现“亚二倍体”峰。 结论：人参皂苷单体Rb1，Rg1均可抑制K562细胞增殖，Rg1增殖抑制作用可能是通过将K562细胞阻滞于S期而实现的，而Rb1的增殖抑制作用与细胞周期的关系有待进一步分析。     

人参总皂苷对放射所致骨髓造血细胞衰老的保护作用

目的探讨人参总皂苷(total saponins of panax ginseng,TSPG)抗放射(6.5 Gy)所致骨髓造血细胞损伤衰老的作用。方法 40只雄性C57BL/6小鼠分为4组(每组10只):对照组、放射(irradiation,IR)组、IR+T50(TSPG 50 mg/kg)组、IR+T200(TSPG 200 mg/kg)组。先给药3 d,然后照射,照射后继续给药7 d,检测外周血的变化情况,计数各组骨髓单个核细胞数、骨髓造血细胞集落生成单位(CFU)的数量,观察形态变化;流式细胞术检测周期变化;回收CFU细胞进行β-半乳糖苷酶衰老(SA-β-gal)染色和细胞免疫荧光分析p16Ink4a蛋白的表达水平。结果与IR组比较,给药处理后,IR+T200组的白细胞数增加至(2.19±0.87)(P<0.05),但各组之间红细胞与血小板均无明显变化(P>0.05);IR+T200组的单个核细胞数及集落个数均明显增加(P<0.05);骨髓造血细胞周期G1期细胞比例随药物浓度增加有减少的趋势;SA-β-gal染色和p16Ink4a细胞免疫荧光染色均显示,IR+T200组的CFU中细胞阳性率明显降低(P<0.05)。结论合适剂量的TSPG(200 mg/kg)对放射引起的造血细胞损伤衰老有保护作用。     

《临床检验基础》多维教学模式的构建

建构主义理论的核心是“以学生为中心,强调学生对知识的主动探索、主动发现和对所学知识意义的主动建构”。以此理论为指导,在《临床检验基础》课程中构建基于课堂教学、网络平台和创新实验的三维立体教学模式,使学生在教学活动中不再是被动接受者,而是积极主动的参与者。实践表明,这种模式培养了学生的学习兴趣,同时也提高了学生的自主学习和创新能力以及综合素质。