诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的 明确大鼠骨髓间充质干细胞(bone mensenchymal stem cells,BMSCs)在体外全骨髓培养条件下的生物学特性及其向成骨细胞分化的能力,探索更为简便有效的BMSCs体外培养方法.方法 提取大鼠原代BMSCs,用酠EM完全培养基和成骨诱导条件培养基体外培养,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态;台盼蓝活细胞计数绘制细胞生长曲线;ALP检测试剂盒检测ALP含量变化和von Kossa染色检测细胞矿化结节,以判断细胞是否向成骨细胞分化.结果 全骨髓培养法在体外培养的大鼠原代BMSCs贴壁生长,呈梭形或多角形;使用Dex-SaMEM向成骨诱导后的BMSCs具有与成骨细胞在体外培养时相似的特征,倍增时间延长;合成ALP能力显著增强(P<0.05),von Kossa染色出现阳性的棕褐色或棕黑色团块的钙化结节.结论 全骨髓培养法取材方便,经成骨诱导培养的BMSCs表现出成骨细胞的形态特征和生物学特性,该方法可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法.     

光化学作用对肿瘤细胞胞吞大分子的释放

目的观察不同光敏剂在肿瘤细胞内的分布,以及光化学作用对肿瘤细胞胞吞大分子的释放作用.方法使用激光共聚焦显微镜观察ALA、ALA-HE、HMME、TPPSa2在肿瘤细胞SW480、K562的胞内分布,使用FITC-右旋糖酐观察肿瘤细胞对荧光标记大分子的胞吞作用,通过光照激发光敏化细胞,动态观察光化学作用前后胞吞大分子FITC-右旋糖酐的胞内分布变化.结果ALA、ALA-HE、HMME、TPPSa24种光敏剂均表现为胞质分布,核内分布少.ALA、ALA-HE的胞内分布主要表现为胞质内的弥散性荧光.HMME则表现为胞质内颗粒状荧光与弥散荧光同时存在.TPPSa2为典型的胞质内颗粒状荧光分布.光敏剂在SW480、K562两种肿瘤细胞的胞内分布没有明显差异.光照激发不同光敏剂对肿瘤细胞胞吞FITC-左旋糖酐的胞内分布影响不同.由TPPSa2及HMME活化而产生的光化学作用表现出明显的荧光颗粒重分布,ALA、ALA-HE则对胞吞荧光无明显重分布作用.结论不同光敏剂因其不同的理化性质而表现为不同的胞内分布.光化学作用可对肿瘤细胞胞吞大分子产生胞吞释放作用,其作用机制可能与光化学作用对胞吞泡的破坏有关.     

海藻酸钠凝胶对骨髓间充质干细胞生物学效应的初步研究

目的：初步探讨海藻酸钠凝胶对骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, bMSCs）的生物学效应。方法：将在海藻酸钠凝胶上培养的细胞设为实验组，在塑料培养板上的细胞设为对照组。以MTT法检测细胞在两种材料上的增殖；采用甲苯胺蓝染色观察细胞在凝胶上的生长形态；RT-PCR检测bMSCs生长6天后的成骨相关基因。结果：两组的bMSCs均能迅速贴附、铺展进入增殖期；在实验组，细胞成集落样生长较明显，且形态发生改变，伸出较多的伪足，细胞间接触更为紧密；培养至第6天，进行成骨相关基因检测，发现对照组和实验组均有Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶表达，但它们在实验组的表达量高于对照组；同时，实验组骨连接蛋白为阳性表达，而对照组为阴性。结论：bMSCs可能具有自发向成骨细胞分化的趋势；海藻酸钠凝胶具有促进干细胞向成骨细胞分化的生物学活性。提示海藻酸钠凝胶可能是比较适合的骨组织工程支架材料。     

一种用于HIFU聚焦性能评价的仿组织透明体模

目的建立一种用于高强度聚焦超声(HIFU)聚焦性能评价的仿组织透明体模。方法仿组织透明体模主要由聚丙烯酰胺和作为温度敏感指示剂的蛋清混合而成。在B超的监控下使用声功率160W的HIFU在不同的辐照时间下定点辐照体模和新鲜离体牛肝脏,肉眼观察HIFU在体模和新鲜离体牛肝脏中形成的生物学焦域(BFR)形态并测量BFR的长短轴。结果可用肉眼观察HIFU在仿组织透明体模中产生的BFR,其形态呈椭球体,实时超声监控为强回声,BFR的长、短轴随辐照时间的增加而增大。但在相同的辐照参数下,HIFU在仿组织透明体模中产生的BFR的长、短轴小于HIFU在新鲜离体牛肝脏中形成的BFR的长、短轴。结论该仿组织透明体模在用于HIFU聚焦性能的评价方面展示出良好的前景。     

藻酸钙影响骨髓间充质干细胞增殖活性的实验研究

目的研究藻酸钙凝胶对骨髓间充质干细胞（bone mensenchymal stem cells,BMSCs）增殖活性的影响,为藻酸盐作为BMSCs在骨组织工程中的载体提供实验依据。方法将BMSCs种植在藻酸钙凝胶上,通过倒置相差显微镜和甲苯胺蓝染色观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞在藻酸盐凝胶上的增殖活性。结果MTT检测发现在培养板上和在藻酸盐凝胶上用SαMEM培养的两组BMSCs之间细胞的增殖活性差异无统计学意义（P〉0.05）;与之相似,在培养板上和在凝胶上用Dex-SαMEM诱导培养的两组BMSCs之间的增殖活性也无显著差异。结论BMSCs在藻酸钙凝胶中的增殖活性不受影响,是良好的骨组织工程支架材料。     

钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的上调作用

目的研究钙结合蛋白S100A2对Wnt／β-catenin信号途径活性的影响，并探讨其可能的机制。方法原核诱导表达GST-hSl00A2，经纯化后加入骨肉瘤细胞株MG63和人结肠癌细胞株HCT116的培养液中，Westernblot检测细胞中β-catenin含量的变化；荧光素酶活性分析法检测S100A2对HEK293细胞中β-catenin／TCF4活性的影响；以表达GSK-3β、DVL、Axin的相应质粒分别转染HEK293细胞，GST—Pulldown／Westernblot实验检测S100A2与这些蛋白质和β-catenin之间的相互作用。结果S100A2使MG63和HCT116细胞中β-catenin含量增加、β-catenin／TCF4活性增强；S100A2分别与β-eatenin和GSK-313之间存在相互作用，而与DVL和Axin之间则未发现相互作用。结论S100A2可以上调Wnt／β-catenin信号途径的活性，其机制可能涉及S100A2与β-catenin和GSK-3β之间的相互作用。