曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达

目的研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatinA，TSA)对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1。表达的影响。方法应用300、150、75、37．5、18．75nmol／L浓度的TSA分别作用NB4细胞4、8、12、24、48h，提取细胞的总mRNA和总蛋白，采用RT-PCR技术检测p21^WAF1/CIP1表达情况，并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21^WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化；在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对p21^WAF1/CIP1 p21^WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平，促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1的表达。     

曲古菌素A对乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用

目的:研究组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭、细胞周期及ERa表达的影响.方法:100～400nmol/L的TSA分别处理MDA-MB-231细胞6～48h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测MDA-MB-231细胞的生长活性.应用流式细胞仪观察细胞周期的变化.采用RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100～400nmol/L TSA作用下对ERa,MMP-9 mRNA表达的影响.采用免疫组织化学法检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100～400nmol/L TSA作用下对ERa,MMP-9在细胞中表达的影响.采用细胞侵袭实验检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100～400nmol/L TSA作用下细胞侵袭力的变化.结果:TSA可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈时间及剂量依赖性.TSA能够延缓细胞周期C2/M期进程,阻滞细胞于G2期.RT-PCR显示,TSA能够上调ERa mRNA在MDA-MB-231细胞中的表达,下调MMP-9在MDA-MB-231细胞中的表达.侵袭实验显示TSA能够较明显的抑制MDA-MB-231细胞的侵袭.结论:TSA能够较明显的上调ERa与下调MMP-9的表达可能是抑制MDA-MB-231细胞增生侵袭与转移的重要机制之一.     

曲谷抑霉素A调控人干扰素调节因子3基因初步研究

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACi）曲谷抑霉素A（trichostain A, TSA）对人干扰素调节因子3（interferon regulatory factor 3, IRF3）基因表达的影响,初步分析TSA调控IRF3基因的乙酰化机制。方法：双荧光素酶活性分析法检测TSA和组蛋白乙酰化酶（histone acetylase, HAT）野生型p300对IRF3基因启动子活性的影响;实时荧光定量PCR检测TSA对IRF-3基因mRNA水平的影响;Western blot检测TSA对IRF3蛋白水平的影响。结果：不同浓度TSA干预后IRF3基因启动子活性均增加,TSA浓度为1 μmol/L时,PS1、PS6相对荧光素酶活性分别增加75%、155%;过表达野生型p300后PS1相对荧光素酶活性增加267%;TSA（1、10 μmol/L）干预细胞6 h后,IRF3基因mRNA水平增加23%、39%,干预24 h后,mRNA水平增加17%、64%;TSA（0.1、1、5 μmol/L）干预细胞24 h后,蛋白表达量分别增加15%、72%、191%。结论：TSA上调IRF3基因mRNA和蛋白表达,TSA和组蛋白乙酰化酶p300均可正向调控IRF3基因启动子活性,TSA可能通过IRF3通路发挥治疗免疫性疾病和抗肿瘤作用。     

曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用

目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用.方法 分别以体外药物敏感实验、流式细胞术观察TSA处理肺腺癌细胞株A549后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,Western blot检测p21及细胞外信号调节激酶(ERK)表达水平的变化.结果 TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其细胞毒性呈时间依赖性和浓度依赖性;TSA作用48及96h后,A549细胞凋亡、G0/G1期及G2/M期细胞显著增加(P<0.05);S期细胞显著下降(P<0.05).p21蛋白表达显著增强,磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 HDAC抑制剂TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,阻断ERK通路的活化,从而引起细胞周期的阻滞和细胞凋亡.     

曲古菌素A对K562细胞中HDAC1表达的影响

目的研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC1)在多种肿瘤中高表达,曲古菌素A(trichostatin A,TSA)可以抑制肿瘤细胞的生长.该实验研究HDAC1在K562细胞的表达及TSA对其增殖的影响.方法50～400 nmol/L的TSA分别处理K562细胞8～48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)比色检测K562细胞的生长活性;应用流式细胞仪法观察细胞凋亡.RT-PCR和蛋白印迹法(western blot)方法检测K562细胞在24 h不同浓度(50～400 nmol/L)的条件下HDAC1的mRNA和蛋白的表达以及TSA对其作用.结果TSA可显著抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈时间及剂量依赖性.HDAC1的mRNA A值的半定量表达以及蛋白表达明显增强(P＜0.05),但随着浓度的增加而表达下调.结论TSA对K562细胞具有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,抑制HDAC1的表达,可能是其重要作用机制之一.     

硼替佐米联用组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导血液肿瘤细胞凋亡的效率

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA)、Apicidin与Bortezomib单药及联合应用对恶性血液病肿瘤细胞凋亡的影响.方法 应用200～2 000 nmol/L TSA、 Apicidin, 5～80 μmol/L Bortezomib分别处理恶性血液病肿瘤细胞株K562、 SHI-1、 Jurkat 24 h, 用流式细胞仪检测细胞凋亡.根据流式细胞术结果选取TSA 800 nmol/L,Apicidin 400 nmol/L分别与5～80 μmol/L Bortezomib联合作用于K562细胞,TSA 1 000 nmol/L, Apicidin 400 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于SHI-1细胞,TSA 600 nmol/L, Apicidin 600 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于Jurkat细胞.以上药物作用24 h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡并绘制浓度-凋亡曲线.分别以Apicidin 200 nmol/L,Bortezomib 20 μmol/L及Apicidin 200 nmol/L 与Bortezomib 5 μmol/L联用作用于K562细胞24 h, 用Western blot检测 Bcl-XL蛋白的表达差异.结果 TSA、Apicidin、Bortezomib均可促进K562、Jurkat、SHI-1细胞凋亡.TSA、Apicidin分别与Bortezomib联用,可导致K562、SHI-1细胞系凋亡率的明显提高,而对 Jurkat 细胞系没有明显影响.Bcl-XL蛋白在Apicidin与Bortezomib联用24 h组较对照组及单一药物处理组表达水平明显下调.结论 小剂量Bortezomib联合TSA或Apicidin应用于K562、SHI-1细胞系,可以明显提高细胞凋亡率,此时,TSA、Apicidin用量较用单药时显著减少.     

曲古霉素A体外诱导膀胱癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的机制探讨

目的:观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古霉素A(TSA)对体外培养膀胱癌细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L)的TSA对人膀胱癌T24细胞生长的影响.透射电镜观察TSA(0.4 μmol/L) 诱导后膀胱癌细胞的形态学变化;流式细胞术检测处理后膀胱癌细胞周期分布及凋亡率的变化;Western 印迹法检测处理后膀胱癌细胞组蛋白乙酰化水平的变化;FQ-PCR检测处理后膀胱癌细胞p21CIP1/WAF1、cyclin A和cyclin E mRNA的表达.结果:TSA体外能明显抑制T24细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性.TSA(0.4 μmol/L)诱导后,透射电镜下可见大量具有凋亡形态特征的T24细胞;流式细胞术检测示细胞阻滞于G0/G1期,并且出现典型的亚二倍体(Sub-G1)峰;TSA可明显提高组蛋白乙酰化水平,并诱导p21CIP1/WAF1的mRNA表达和抑制cyclin A的mRNA表达,而对cyclin E无明显作用.结论:TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗膀胱癌作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及相关基因(p21CIP1/WAF1、cyclin A)表达的调控.     

TSA对人胃癌MKN-28细胞生物学行为及其RASSF1A基因表达的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌MKN-28细胞生物学行为及其RASSFIA基因表达调控的影响.方法 0.1、0.3、1.0μmol/L不同浓度的TSA分别处理人胃癌MKN-28细胞,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR、Western blot分别检测RASSFIA mRNA和蛋白表达水平.结果 不同浓度的TSA处理MKN-28细胞后,细胞增殖受到明显抑制,细胞周期发生改变,使细胞阻滞于G1期,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05),并呈浓度及时间依赖性(P<0.05),细胞凋亡率无明显变化,差异无显著性(P>0.05).RT-PCR、Western blot显示MKN-28细胞无RASSF1A mRNA及蛋白表达,TSA处理后,KASSF1A mKNA及蛋白表达分别上调,呈浓度及时间依赖性(P<0.05).结论 TSA抑制人胃癌MKN-28细胞增殖,使细胞阻滞于G1期,可能与KASSF1A基因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关.     

热休克诱导细胞周期素D1表达水平降低的转录调控机制

目的:研究人的细胞周期素D1基因启动子热休克效应的表达调控机制.方法:以RT-PCR技术研究细胞周期素D1mRNA水平的变化;构建一系列人细胞周期素D1基因启动子报告基因质粒.通过报告基因方法确认细胞周期素D1启动子的热休克效应区.应用染色质免疫沉技术检测核心启动子区域的组蛋白乙酰化修饰情况.结果:热休克造成细胞周期素D1mRNA水平下降;报告基因结果显示人细胞周期素D1基因的热休克的效应区位于-50～+141bp范围.核心启动子区组蛋白H3第九位赖氨酸乙酰化程度降低.结论:热休克抑制人的细胞周期素D1基因的启动子转录活性,其效应区位于核心启动子的-50～+141bp范围.热休克效应与核心启动子区的组蛋白乙酰化程度下降有关.     

曲古霉素A对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及相关机制

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。【方法】应用不同浓度的TSA处理子宫内膜癌HEC-1B细胞72 h,Western blotting法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平及p21蛋白,荧光定量PCR方法检测p21基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】经TSA作用后,人子宫内膜癌HEC-1B细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA及蛋白表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。【结论】TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

曲古抑菌素A 对人卵巢癌细胞系A2780细胞周期的影响

 目的研究曲古抑菌素A（TSA）对人卵巢癌细胞系A2780 细胞周期的影响及其相关机制。方法通过流式细胞仪检测
不同浓度和时间的曲古抑菌素A 对A2780 细胞周期的影响;RT-PCR 法检测不同浓度和时间的曲古抑菌素A 对
mRNA表达水平的影响。结果100 nmol/L 曲古抑菌素A作用于A2780 细胞,随着作用时间的延长,G2/M 期细胞增加,S 期细
胞减少,在36 h G2/M 期细胞增加达到顶峰,S 期细胞减少到最低;12 h后p21^WAF/CIPImRNA表达水平开始增高,于24 h达到顶
峰,48 h 后出现下降;不同浓度的TSA 作用于A2780细胞,从100 nmol/L浓度开始G2/M 期细胞增加,S 期细胞减少,
mRNA的表达水平出现升高,并随着浓度的增加而升高（ < 0.05）。结论曲古抑菌素A 通过增加mRNA 表达,影
响细胞周期素依赖的蛋白激酶的活性,使细胞周期阻滞于G2/M 期,抑制A2780细胞增殖。     

曲古抑菌素A对人乳腺癌MCF-7细胞抑制作用的实验研究

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长增殖、细胞周期相关基因CDK4、Cyclin D1、Rb表达的影响.方法 分别以不同浓度的TSA处理MCF-7细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR方法检测CDK4、Cyclin D1、Rb mRNA的表达水平;用Western blotting法检测MCF-7细胞的CDK4、Cyclin D1、Rb蛋白表达.结果 各组细胞均随着药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加(P＜0.01),细胞滞留在G1期;经不同浓度TSA处理的细胞CDK4和Rb mRNA表达水平没有明显变化;Cyclin D1的mRNA表达水平显著下降.CDK4蛋白表达水平也没有明显变化,Cy-clin D1和pRb磷酸化蛋白的水平明显下降.结论 TSA抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖可能是通过下调Cyclin D1和Rb蛋白的磷酸化水平来实现的.     

组蛋白乙酰化修饰调控流感病毒复制中间体dsRNA引起的IL-6激活表达

目的研究组蛋白乙酰化修饰在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6 表达中的调控作用。方法以病毒复制中间体
dsRNA为诱导物,利用组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂、DNA甲基转移酶（DNMT）抑制剂或HDAC siRNA分别处理A549细
胞,双荧光素酶报告系统分析IL-6启动子活性、RT-PCR检测mRNA转录水平以及ELISA检测蛋白表达。结果dsRNA可激活
IL-6启动子活性、增强mRNA转录水平和蛋白的分泌表达,用HDAC抑制剂TSA处理或HADC siRNA干扰均可显著增强IL-6
启动子活性和mRNA转录,同时,HDAC抑制剂TSA和DNA甲基转移酶抑制剂DAC在调控IL-6表达过程中无协同作用。结
论在流感病毒复制中间体dsRNA引起IL-6表达上调过程中受到组蛋白乙酰化修饰调控。
     

5-氮-2′-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响

目的 探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)联合组蛋白去乙酰化抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响.方法 人肺腺癌细胞株A549细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养.实验分4组,5-aza-dC组:细胞接种20 h后,加入5 μmol/L的5-aza-dC;TSA组:细胞接种20 h后,加入300 nmol/L TSA;5-aza-dC+TSA组:细胞接种20 h后,加入5 μmol/L 5-aza-dC,24 h后再加入300 nmol/L TSA;对照组:DMEM培养液中加入等量的二甲基亚砜( DMSO).MTT比色法测定各处理因素对A549细胞生长的影响;Annexin V/PI双染法测定各组细胞培养72 h后的凋亡情况;应用RT-PCR检测各组细胞培养72 h后细胞CCAAT增强子启动蛋白α(C/EBPα) mRNA的表达.结果 (1)5-aza-dC及TSA呈时间依赖性地抑制A549细胞的生长,而在同一时间不同组别比较联合用药组细胞生长抑制率较单用药组明显增加[12 h:35.51% vs 21.63%,19.59%;24 h:43.19% vs 32.39%,30.60%;36 h:54 85% vs 38.83%,37.35%;48 h:60.69% vs 45.79%,43.84%;60 h:68.92% vs 50.60%,50.20%;72 h:74.54% vs 59 23%,57 82,P<0.05];(2)5-aza-dC和TSA能够诱导A549细胞凋亡,且联合用药组A549细胞凋亡率(75.35±1 46)%明显高于5-aza-dC (49.76±1.32)%(P<0.05)和TSA组(50.88±1.06)%(P<0.05);(3)5-aza-dC和TSA能够上调C/EBPα mRNA的表达,联合用药组中C/EBPα mRNA表达量(0.581±0.024)明显高于5-aza-dC组(0.402±0.016)(P<0.05) 和TSA组(0.394±0.031)(P<0.05),有统计学意义;(4)5-aza-dC组与TSA组在抑制A549细胞生长、诱导细胞凋亡、增强C/EBPα mRNA的表达方面比较,差别均无统计学意义(P>0 05).结论 与单用5-aza-dC或TSA相比,联合应用两种药物能够更好的抑制人肺腺癌A549细胞的增殖、诱导细胞凋亡和增强C/EBPα基因mRNA的表达.     

曲古霉素A对肺腺癌细胞NCI-H1299增殖抑制作用及机制

目的观察组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase）抑制剂曲古霉素A（trichostatin A,TSA）对体外培养肺腺癌NCI-H1299细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度（0.1、0.2、0.4、2.0μmol/L）的TSA对人肺腺癌NCI-H1299生长的影响,流式细胞术检测处理后NCI-H1299细胞周期分布及凋亡率的变化;Western印迹法检测处理后人肺腺癌NCI-H1299组蛋白H4乙酰化水平的变化;Real-TimePCR检测处理后人肺腺癌NCI-H1299、p21、cyclin B1、Bcl-2和Bax的表达。结果TSA体外能明显抑制NCI-H1299细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性。0.4μmol/L TSA诱导后,流式细胞术检测示细胞阻滞于G2/M期;TSA可明显提高NCI-H1299组蛋白乙酰化水平,并诱导p21和Bax的mRNA表达和抑制Bcl-2和cyclin B1的mRNA表达。结论TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗肺腺癌细胞株作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及诱导调控相关基因p21、Bax、Bcl-2和cyclin B1。     

TSA可能通过抑制APE1 BER功能增强顺铂的肺腺癌细胞毒性

目的 探讨曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对顺铂诱导的细胞毒性的影响.方法 给予0、250、500 nmol/L TSA预处理A549细胞24 h后,分别联合0、5、10、15 μmol/L顺铂处理A549细胞24 h后,通过0、0.5、1、2μmol/L APE1 InhibitorⅢ调控APE1 BER功能,应用CCK-8方法检测细胞增殖率,AP内切酶活性实验检测APE1 BER功能,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平,immunoblot检测γ-H2AX表达水平.结果 TSA联合顺铂处理A549细胞明显增强顺铂的细胞增殖抑制,并促进顺铂诱导的细胞凋亡;随着TSA浓度的升高APE1内切酶活性逐渐减弱,TSA联合顺铂促进顺铂诱导的γ-H2AX表达;利用inhibitorⅢ抑制APE1内切酶活性,促进顺铂诱导细胞增殖抑制和凋亡水平.结论 TSA可能通过抑制APE1 BER功能增强顺铂诱导的细胞毒性反应.     

trichostatin A对多巴胺能神经细胞的影响

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂 trichostatin A（TSA）对多巴胺能神经细胞的影响。方法将体外培养多巴胺能神经细胞 SH - SY5Y 分为6组，DMSO 处理为对照组，不同浓度（50、100、200、500、1000 nmol/ L） TSA 处理为 TSA 组，处理48 h 后行 MTT 法检测细胞活力；采用200 nmol/ L TSA 处理细胞不同时间段，MTT 法检测细胞活力，Western blot 检测 Fra1表达；构建腺病毒载体过表达 Fra1或对照 GFP，检测正常或 TSA 处理条件下过表达 Fra1对细胞活力的影响。结果对照组与50 nmol/ L TSA 组比较，细胞存活率差异无统计学意义，与100 nmol/ L TSA 组比较，细胞活力明显减少（P ＜0.05），随 TSA 浓度升高，活力减少更显著（P ＜0.05）；200 nmol/ L TSA 处理细胞8 h 未检测到抑制细胞存活（ P ＜0.05），处理16 h 有显著抑制作用，处理时间越久抑制效应越明显（ P ＜0.05）；Western blot 结果显示，TSA 处理6 h 未抑制 Fra1表达（P ＜0.05），处理12 h 明显抑制 Fra1表达，24 h 抑制效应更显著（P ＜0.05）；过表达 Fra1促进细胞存活（P ＜0.05），显著拮抗 TSA 的抑制存活效应（P ＜0.05）。结论TSA 抑制多巴胺能神经细胞存活通过抑制 Fra1表达。     

硼替佐米对A549细胞增殖及p21、p27表达的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人肺癌A549细胞增殖、细胞周期及在体成瘤的影响。方法采用不同浓度的硼替佐米(0、100、200 nmol/L)作用于A549细胞4 h,观察其对蛋白酶体活性的影响。用硼替佐米(0、100、200 nmol/L)处理A549细胞48 h,采用MTT法、3H-TdR掺入法检测细胞增殖;流式细胞术PI染色检测细胞周期;Westernblot检测p21、p27表达水平的变化;连续注射观察硼替佐米对裸鼠A549细胞移植瘤体积及质量的影响。结果硼替佐米可显著抑制A549细胞的蛋白酶体活性。MTT法、3H-TdR法检测显示,100 nmol/L处理组细胞较对照组增殖率分别降低24.5%、29.5%,200 nmol/L处理组进一步显著下降(P<0.05);细胞周期分析显示,100、200 nmol/L处理组G0/G1期较对照组明显增加(P<0.05)。Western blot检测显示,48 h时100、200 nmol/L处理组p21、p27蛋白表达较对照组明显增加,且呈浓度依赖(P<0.05),48 h蛋白质水平高于24 h。连续注射硼替佐米后裸鼠移植瘤的质量抑制率达(36.0±12.4)%。结论硼替佐米可抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡及发生G0/G1期阻滞,在体注射可抑制裸鼠成瘤,其抗肿瘤活性可能与抑制细胞周期蛋白p21、p27的降解有关。     

曲古抑菌素A对低氧肺腺癌细胞株A549HIF-1α、VEGF表达的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶1抑制剂曲古抑菌素 A (trichostain A, TSA) 对低氧条件下人肺腺癌细胞株 A549缺氧诱导因子1α(hypoxia induced factor 1α, HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法 实验分为:常氧组(对照组)及低氧组(实验组),其中低氧组设4组,即低氧6 h组,低氧6 h前加TSA (1.25 μg/ml) 组,低氧24 h组,低氧24 h前加TSA (1.25 μg/ml) 组.运用免疫组织化学,RT-PCR方法检测HIF-1α、VEGF蛋白质和mRNA的表达.结果 人肺腺癌细胞株A549在低氧6 h和24 h组HIF-1α、VEGF蛋白质和mRNA的表达较常氧组明显增强 (P＜0.05),TSA减弱低氧6 h和24 h组HIF-1α、VEGF蛋白质和mRNA的表达 (P＜0.05).结论 组蛋白去乙酰化酶1参与低氧人肺腺癌细胞血管生成的调节,TSA可能降低低氧条件下肺腺癌新生血管的生成.     

曲古菌素A对人肺癌细胞的诱导分化及其机制的实验研究

目的通过应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（TSA）调节人肺腺癌细胞A549中组蛋白去乙酰化酶3的表达,观察肺腺癌细胞A549生长抑制、细胞周期阻滞以及对抑癌基因表达的变化。方法培养人肺腺癌细胞A549,应用MTT比色法观察TSA对A549细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,以RT—PCR、Western印迹分别检测A549细胞中组蛋白去乙酰化酶3、P^21WAFL/CIPt和蛋白的表达水平。结果TSA处理后A549细胞的生长受到抑制（24h时对照组和各处理组细胞抑制率分别为6．2％±1．1％、18．5％±2．3％、28．9％±3．6％、39．4％±3．7％、45．6％±2．7％,P〈0．05;48h时分别为8．1％±2．3％、26．9％±4．2％、35．6％±3．8％、56．5％±6．1％、69．8％±5．3％,P〈0．05;72h时分别为10．5％±1．3％、28．4％±3．2％、50．5％±5．8％、70．5％±6．9％、78．6％±4．5％,P〈o．05）,细胞阻滞于G1期（对照组和各处理组细胞G1期分布：56．5％±8．1％、70．5％±6．7％、78,6％±4．6％、82．4％±3．7％、85．6％±7．5％,P〈0．05）,P^21WAFL/CIPt基因表达水平增强（对照组和各处理组RT—PCR吸光度分别为o．09、0．17、0．20、0．27、0．35,P〈0．05）。同时TSA处理A549细胞中组蛋白去乙酰化酶3的基因表达水平明显降低。结论TSA可能通过抑制组蛋白去乙酰化酶3,提高组蛋白的乙酰化水平诱导P^21WAFL/CIPt基因表达。