胶质瘤中MKK7与c-Jun磷酸化的表达及其相关性

目的 探讨胶质瘤中MKK7和c-Jun磷酸化（p-c-Jun）的表达及意义，分析两者表达的相关性。方法 选取弥漫型星形细胞瘤（15例）、少突胶质细胞瘤（5例）、间变性星形细胞瘤（11例）、间变性少突胶质细胞瘤（8例）、胶质母细胞瘤（53例）及其瘤旁正常脑组织（25例）共117例，采用免疫组织化学法检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达。体外培养神经胶质瘤细胞株U87，用脂质体转染MKK4-siRNA、MKK7-siRNA和对照siRNA，48 h后Western blot检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达水平。结果 胶质母细胞瘤中p-c-Jun及MKK7的表达均明显高于其他组织学类型胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中的表达（P=0.000, P=0.000）。随着胶质瘤WHO分级的升高，p-c-Jun及MKK7的表达增高，且与WHO分级呈明显正相关（r=0.494, P=0.000; r=0.606, P=0.000）。胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中MKK7与p-c-Jun的表达存在正相关关系（r=0.387, P=0.000）。沉默神经胶质瘤细胞株U87 MKK7表达抑制了c-Jun磷酸化水平。结论 MKK7可以通过调控JNK/c-Jun活性进而促进胶质母细胞瘤的发生。     

新生儿窒息的防治

围产儿和儿童神经系统发育异常是新生儿窒息的主要原因 ,尤其重度窒息可致严重的后症。为提高围产期保健质量 ,优生优育 ,减少病残儿的发生 ,现就本院 2 0 0 0年 1月～2 0 0 0年 12月期间共计活产儿 10 89例进行回顾性分析 ,其中轻度窒息 16 6例 ,重度窒息 39例 ,窒息率达 18.8     

过表达E2F1保护神经元依赖其转录活性

目的探讨E2F1对小脑颗粒神经元死活的影响及机制。方法构建表达质粒pcDNA-E2F1(pE2F1)及突变体pcDNA-E2F1-m132(pm132),转染293细胞验证表达,转染小脑颗粒神经元用6×E2F-luciferase报道基因检测转录活性。转染神经元24 h或48 h后Hoechst 33258核染色,统计转染pE2FI及pm132神经元(GFP阳性细胞)的核固缩率(即凋亡率);或者转染48 h后进行25K、5K处理12hr,统计凋亡率。结果构建质粒表达E2F1及突变体E2F1-m132成功,E2F1具有转录活性而E2F1-m132没有;表达E2F1及E2F1-m132均未诱导神经元凋亡(P>0.05);表达E2F1抑制5K诱导的神经元凋亡(P<0.05),而E2F1-m132没有抑制效应。结论E2F1抑制神经元凋亡依赖其转录活性。     

抑癌基因Deleted in Liver Cancer1在人胶质瘤细胞株中的作用及机制

目的探讨抑癌基因DLC1表达的isoform1及isoform2两个亚型在人胶质瘤细胞株中的表达、功能及机制。方法RT-PCR方法检测体外培养的胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44中DLC1isoform1,2的mRNA水平;10μM5-aza-2'-de-oxycytidine(5'-AZA)或者共含有500nMtrichostatinA(TSA)处理细胞36h,检测DLC1isoform1,2的表达;MTT方法检测转染DLC1isoform2及没有GAP活性的isoform2突变体DLC1-K714E表达质粒对胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44增殖的影响。结果在U87-MG细胞株中没有检测到DLC1isoform1;在SHG-44中检测到微量的DLC1isoform1,5'-AZA或者共含有TSA处理使其表达上调;DLC1isoform2在上述细胞株都能检测到,5'-AZA或者共含有TSA处理细胞未改变其表达水平;过表达DLC1isoform2及其突变体DCL1-K714E促进U87-MG和SHG-44细胞株增殖。结论DLC1isoform1在胶质瘤细胞株中不表达或低表达,可能原因是由于不转录或者启动子发生甲基化。DLC1isoform2有一定的表达水平,高表达的DLC1isoform2促进胶质瘤细胞增殖,且不依赖GAP活性。     

抑癌基因Deleted in Liver Cancer1在人胶质瘤细胞株中的作用及机制

目的探讨抑癌基因DLC1表达的isoform1及isoform2两个亚型在人胶质瘤细胞株中的表达、功能及机制。方法RT—PCR方法检测体外培养的胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44中DLC1 isoform1，2的mRNA水平；10μM5-aza-2’de-oxycytidine（5＇-AZA）或者共含有500nM trichostatinA（TSA）处理细胞36h，检测DLC1 isoform1，2的表达；MTT方法检测转染DLC1 isoform2及没有GAP活性的isoform2突变体DLC1-K714E表达质粒对胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44增殖的影响．结果在U87-MG细胞株中没有检测到DLC1 isoform1；在SHG-44中检测到微量的DLC1 isoform1，5＇-AZA或者共含有TSA处理使其表达上调;DLC1 isoform2在上述细胞株都能检测到，5＇-AZA或者共含有TSA处理细胞未改变其表达水平；过表达DLC1 isoform2及其突变体DCL1—K714E促进U87-MG和SHG-44细胞株增殖。结论DLC1 isoform1在胶质瘤细胞株中不表达或低表达．可能原因是由于不转录或者启动子发生甲基化。DLC1 isoform2有一定的表达水平，高表达的DLC1 isoform2促进胶质瘤细胞增殖．且不依赖GAP活性．     

携带bFGF-siRNA质粒表达载体的生物降解支架防治兔颈动脉再狭窄的初步实验研究

目的初步探讨携带bFGF-siRNA质粒表达载体的生物降解支架防治兔颈动脉再狭窄的作用。方法经股动脉入路建立球囊损伤兔颈动脉狭窄模型,实验动物分组后分别植入裸生物降解支架和携带bFGF-siRNA质粒表达载体的生物降解支架,分别以光镜和电镜观察狭窄段血管病理形态学变化,计算血管中膜和内膜厚度。结果裸支架组和siRNA支架组血管内膜厚度明显较对照组小,且siRNA支架组和裸支架组相比,血管内膜厚度明显减小,但三组之间中膜变化不明显。结论携带bFGF-siRNA质粒表达载体的生物降解支架能有效防治兔颈动脉再狭窄的发生,其具体分子机制尚需进一步的检测。     

siRNA沉默兔bFGF基因表达对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨利用RNAi技术沉默bFGF基因抑制兔血管平滑肌细胞增殖的作用。方法：针对兔bFGF基因的mRNA序列合成siRNA，然后构建携带bFGF—siRNA的质粒载体，将其转染体外培养的VSMC，分别用MTT法、流式细胞术分析细胞增殖率和凋亡率的变化，免疫细胞化学染色观察细胞PCNA的表达变化，同时用RT—PCR检测细胞转染前后bFGF基因表达量的变化。结果：表达bFGF—siRNA的质粒载体转染后VSMC增殖能力减弱，凋亡增加，bFGF的mRNA表达量明显减弱。结论：利用bFGF—siRNA质粒表达载体沉默bFGF基因mRNA能抑制VSMC的增殖。     

肝癌缺失基因-1不同亚型在人神经胶质瘤组织中的表达及意义

目的：探讨肝癌缺失基因-1（DLC-1）亚型（Isoform）1及2在人神经胶质瘤组织中的表达及其意义。方法：收集神经胶质瘤样本49例及对照脑组织14例,采用定量PCR检测DLC-1Isoform1、2的mRNA水平,比较两组差异。结果与结论：与对照脑组织比较,DLC-1Iso-form1在神经胶质瘤中低表达,而DLC-1Isoform2在神经胶质瘤中高表达,差异具有统计学意义（P〈0.05）;DLC-1Isoform1在Ⅱ,Ⅲ及Ⅳ级神经胶质瘤中的表达水平低于Ⅰ级神经胶质瘤,DLC-1Isoform2在I级神经胶质瘤中表达程度最高。DLC-1Isoform1在神经胶质瘤组织中低表达,而Isoform2高表达,提示DLC-1的功能可能具有组织特异性以及亚型特异性,DLC-1Isoform2是否可促进神经胶质瘤的生成,值得进一步行大样本研究。     

组蛋白乙酰化转移酶GCN5活性促神经元存活

目的探讨GCN5活性对神经元存活和凋亡的作用。方法体外培养小脑颗粒神经元,用GCN5抑制剂CPTH2和MB3处理神经元24 h后,核染色检测神经元的凋亡率,Western blot检测H3K9的乙酰化及Caspase 3活性。结果 CPTH2和MB3浓度依赖抑制了H3K9乙酰化,CPTH2和MB3浓度和时间依赖地诱导了神经元凋亡(P0.05),且激活了Caspase 3。结论 GCN5活性对神经元存活起关键作用。