Caspase非依赖性细胞程序性死亡

一直以来细胞死亡被分为细胞坏死和凋亡。后者是一种程序化的主动性细胞死亡,caspase在其中起着决定性作用。但是凋亡并非细胞程序性死亡的唯一形式。大量研究结果表明还存在caspase非依赖性的细胞程序性死亡,已被人们初步认识的有自体吞噬作用、paraptosis以及与线粒体相关的途径。这些caspase非依赖性的细胞程序性死亡途径在清除机体有害细胞和成分上起着非常重要的作用,并与发育和许多生理/病理现象密切相关。     

ROCK-I蛋白表达或活性的改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响

目的:探讨ROCK-I蛋白表达或活性改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响。方法:将ROCK-I的反义寡核苷酸(ASODN)或其显性激活突变体p160Δ3用脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系CAOV-3细胞,用RT-PCR与W estern blot印迹法检测转染前后ROCK-I和p160Δ3 mRNA和蛋白的表达;rhodam ine-phalloid in染色显示ROCK-I ASODN和p160Δ3对细胞骨架的影响;Transwell小室和划痕实验观察ROCK-I表达降低及其活性提高后卵巢癌细胞系CAOV-3运动能力的改变。结果:转染ROCK-I ASODN后,CAOV-3细胞内ROCK-I蛋白的表达明显减少,最大抑制率可达49%;转染的p160Δ3在细胞内获得有效表达。转染ROCK-I ASODN后CAOV-3细胞伪足消失,肌动蛋白纤维减少且变得无序,而转染p160Δ3后细胞伪足增多变长,肌动蛋白纤维亦明显增多,且沿细胞长轴分布。伤口愈合实验显示,ROCK-I ASODN明显抑制了CAOV-3细胞的迁移,p160Δ3则显著增强了其迁移能力;转染10μmol/L或20μmol/L ROCK-I ASODN后细胞的随机运动能力分别为其对照组的(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%,定向运动能力分别为其对照组的(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%;转染p160Δ3后,与对照组相比细胞的随机运动能力提高(38.7±1.2)%,定向运动能力提高(40.2±2.6)%。结论:ROCK-I蛋白表达或活性改变与人卵巢癌细胞CAOV-3的运动能力密切相关,ROCK-I可能成为治疗卵巢癌肿瘤细胞转移的新靶点。     

硼替佐米联用组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导血液肿瘤细胞凋亡的效率

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA)、Apicidin与Bortezomib单药及联合应用对恶性血液病肿瘤细胞凋亡的影响.方法 应用200～2 000 nmol/L TSA、 Apicidin, 5～80 μmol/L Bortezomib分别处理恶性血液病肿瘤细胞株K562、 SHI-1、 Jurkat 24 h, 用流式细胞仪检测细胞凋亡.根据流式细胞术结果选取TSA 800 nmol/L,Apicidin 400 nmol/L分别与5～80 μmol/L Bortezomib联合作用于K562细胞,TSA 1 000 nmol/L, Apicidin 400 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于SHI-1细胞,TSA 600 nmol/L, Apicidin 600 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于Jurkat细胞.以上药物作用24 h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡并绘制浓度-凋亡曲线.分别以Apicidin 200 nmol/L,Bortezomib 20 μmol/L及Apicidin 200 nmol/L 与Bortezomib 5 μmol/L联用作用于K562细胞24 h, 用Western blot检测 Bcl-XL蛋白的表达差异.结果 TSA、Apicidin、Bortezomib均可促进K562、Jurkat、SHI-1细胞凋亡.TSA、Apicidin分别与Bortezomib联用,可导致K562、SHI-1细胞系凋亡率的明显提高,而对 Jurkat 细胞系没有明显影响.Bcl-XL蛋白在Apicidin与Bortezomib联用24 h组较对照组及单一药物处理组表达水平明显下调.结论 小剂量Bortezomib联合TSA或Apicidin应用于K562、SHI-1细胞系,可以明显提高细胞凋亡率,此时,TSA、Apicidin用量较用单药时显著减少.     

体外小儿骨髓间充质干细胞对牵张应力早期应答反应的研究

目的 观察体外小儿骨髓间充质干细胞(MSCs)对周期性牵张应力的早期应答反应.方法 分离并培养小儿MSCs,利用体外细胞牵张应力装置对第三～六代细胞加载短期力学信号,检测各组细胞内Oa2+以及早期反应基因蛋白(c-fos、c-jun和c-myc)的表达情况.结果 应力干预MSCs后,细胞内Ca3+浓度在受力1min后即增高,荧光强度是对照组的164.63%,3、5min升高更明显,干预10 min后Ca2+浓度升高的幅度有下降趋势;c-fos、c-jun和c-myc基因蛋白在未受力组细胞内不表达或微量表达,加载力学信号后,表达发生了明显的变化,随时间的延长,均表现为增强-持续-回复原来水平.结论 周期性牵张应力影响MSCs内Ca2+的浓度及早期反应基因蛋白(c-fos、c-jun和c-myc)的表达,推测c-fos、c-jun和c-myc参与了MSCs响应力学的信号传导途径,可能依赖Ca2+通道的活化来调控.     

RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的过度激活对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的 探讨 RhoC/ROCK-Ⅰ的过度激活对卵巢癌细胞生物学特性的影响.方法 RT-PCR 及 Western blot检测 RhoC 及ROCK-Ⅰ在卵巢癌细胞 SW626、Skov-3、A2780 和 Caov-3 中 mRNA 及蛋白的表达水平;将携带ROCK-Ⅰ组成性激活突变体 p160ROCK-Ⅰ△3的质粒(pCAG-myc-p160ROCK-Ⅰ△3)以脂质体介导,转染上述 4 株人卵巢癌细胞,划痕试验和 Boyden 小室检测转染前后 4 种卵巢癌细胞的体外迁移与侵袭能力的变化,MTT 比色法测定 p160ROCK-Ⅰ△3 对细胞增殖能力的影响.结果 RhoC 和 ROCK-Ⅰ在 4 种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中 RhoC 的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关(r=0.95,P<0.01),转染 pCAG-myc-p160ROCK-Ⅰ△3后,4 株细胞的侵袭能力与对照组比较分别提高31.1%、33.0%、24.5%和39.4%;迁移能力分别提高33.9%、33.0%、25.0%和40.2%.各株细胞的增殖能力未显示出明显的变化.结论 RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的活性与卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移能力相关,ROCK-Ⅰ活性的提高可显著增强卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭和迁移能力.     

Discovery of chrysoeriol,a PI3K-AKT-mTOR pathway inhibitor with potent antitumor activity against human multiple myeloma cells <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

This study was designed to determine the impact of chrysoeriol on proliferation and cell cycle progression in the human multiple myeloma cell lines RPMI 8226 and KM3,and its related molecular mechanisms.Chryseoriol was identified by using the phosphorylated AKT-specific cytoblot high throughput assay.CCK-8 assay was employed to examine the growth inhibition rate and IC 50 (48 h) in peripheral blood mononuclear cells (PBMNCs),RPMI 8226 and KM3 cells treated with chrysoeriol at various concentrations.Cells were labeled with 5-6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE),and the proliferation dynamics was detected by flow cytometry and analyzed with ModFit software.The cell cycles of RPMI 8226 and KM3 cells were measured by flow cytometry when the IC 50 concentration of chrysoeriol was adopted.The alterations in cell-cycle related proteins (Cyclin B1,Cyclin D1,p21) and proteins in PI3K-AKT-mTOR pathway were determined by Western blot analysis.The results showed the proliferation of multiple myeloma cells was significantly inhibited by chrysoeriol,resulting in cell cycle arrest in G 2 /M phase.Chrysoeriol could significantly reduce the expression of p-AKT (s473) and p-4eBP1 (t37/46) protein,meanwhile enhanced Cyclin B1 and p21 protein expression.Similar effects were not observed in PBMNCs from normal donors.It was concluded that chrysoeriol was a selective PI3K-AKT-mTOR pathway inhibitor.It restrained the proliferation of human multiple myeloma cells,but didn’t affect proliferation of PBMNCs from normal donors.It might exhibit the cell cycle regulatory effect via the inhibition of PI3K-AKT-mTOR signal pathway.     

伏立康唑治疗血液病合并侵袭性真菌病61例临床观察

目的:观察伏立康唑治疗血液病合并侵袭性真菌感染(IFD)患者的疗效。方法:回顾性分析61例伏立康唑治疗血液病合并IFD患者的临床资料。结果:足量足疗程的伏立康唑治疗血液病合并IFD的总有效率为67.2%,其中预防治疗31例中24例(77.4%)有效,经验治疗24例中13例(54.2%)有效,两者的差异无统计学意义(P0.05)。9例患者用药后出现肝功能轻度异常,2例出现皮疹,1例出现恶心呕吐,均不影响治疗。结论:足量足疗程的伏立康唑治疗血液病合并IFD患者有一定疗效,不良反应较少。     

移植日C反应蛋白水平对异基因造血干细胞移植早期感染及预后的预测意义

目的探讨移植日C反应蛋白（CRP）水平对异基因造血干细胞移植早期败血症等感染事件发生的预测意义。方法回
顾性分析78 例异基因移植患者病例资料,采用受试者工作特征曲线（ROC）评估CRP诊断移植早期败血症的临床参考值及
相应灵敏度和特异度,以所得临床参考值为临界值将病例资料分为低CRP组和高CRP组,分析比较两组间的移植相关并发
症及总生存（OS）和复发率等。结果CRP 诊断移植早期败血症的临床参考值为23.3 mg/L（AUC=0.735,P=0.001,95% CI
0.623~0.848）,相应灵敏度和特异度分别为0.793 和0.592;高CRP组粒系平均重建时间较低CRP组延迟0.71 d（P=0.237）,巨
核系平均重建时间显著延迟4.09 d（P=0.048）;高CRP组移植早期败血症及巨细胞病毒（CMV）血症发生率较低CRP组显著
增高（53.5% vs 17.1%,P=0.001;72.1% vs 37.1%,P=0.003）,但两组间EB病毒（EBV）血症、肺部侵袭性真菌感染及急性移植
物抗宿主病（aGVHD）发生率无统计学差异（41.9% vs 22.9%,P=0.094;14.0% vs 5.7%,P=0.285, 51.2% vs 45.7,P=0.656）;高
CRP 组中位随访318（7~773）d,低CRP 组中位随访299（78~747）d,高CRP 组2 年OS 率较低CRP 组显著降低（42.5% vs
78.4%,P=0.022）,高CRP组2 年累计复发率较低CRP组高（52.3% vs 19.8%,P=0.235）,但差异无统计学意义;Logistic 多因素
分析显示高CRP水平是移植早期败血症的独立危险因素（OR=5.090,95% CI 1.115~23.229,P=0.036）。结论移植日CRP水
平对异基因造血干细胞移植早期败血症有一定的预测意义,高CRP水平提示较高的移植早期败血症和CMV血症发生率
以及较差的预后。
     

牵张应力对小儿体外骨髓间充质干细胞向成骨、成脂肪分化的相关性研究

目的 探讨周期性机械应力对小儿骨髓问充质干细胞(MSCs)分化方向的影响.方法 利用自行建立的机械牵张应力装置,对体外MSCs加载力学信号,并复合成脂肪诱导剂,选用化学染色、RT-PRC、免疫组化、Western Blot的方法检测MSCs干预后成骨指标(OC、BMP-2、I型胶原)和成脂肪分化的指标(PPART-2、脂滴).结果 MSCS受力后,细胞OC mRNA表达较对照组明显增高,而且与干预时间相关;干预7 d后,细胞内BMP-2、I型胶原蛋白表达较对照组明显增强;MSCs在成脂肪诱导过程中,接受应力后细胞脂滴的出现和PPARy-2 mRNA的表达均明显下降.结论 适当的应力促进MSCs向成骨方向分化,抑制其向脂肪方向分化.