肥大细胞类胰蛋白酶在其相关疾病中作用的研究

作为近年来备受关注的一种炎症介质，肥大细胞类胰蛋白酶有着多重生物活性效应，本文主要综述了肥大细胞类胰蛋白酶在其相关疾病发病机制中所起的重要作用；而对类胰蛋白酶的分泌和活性进行调控将有望成为此类相关疾病治疗的新途径。     

类胰蛋白酶的检测及临床意义

类胰蛋白酶是主要由肥大细胞分泌的一种炎症介质,具有多重生物活性效应,可启动多种疾病反应的进程,并与其发生和发展有关.在很多肥大细胞相关疾病中,血清类胰蛋白酶都伴随肥大细胞的脱颗粒过程而升高.检测此类疾病时类胰蛋白酶血清水平的变化,有望为疾病的临床诊断和治疗提供重要的依据.     

肥大细胞类胰蛋白酶释放促进淋巴管平滑肌瘤病的疾病进展

淋巴管平滑肌瘤病是一种引起肺囊性改变和呼吸衰竭的多系统疾病。结节性硬化病(TSC)1/2基因功能缺失导致哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性失调, 异常平滑肌细胞(即LAM细胞)过度增殖。LAM细胞与成纤维细胞、淋巴内皮细胞、多种炎性细胞相互作用, 在肺部形成类似于"癌巢"的LAM结节。此外, LAM结节中亦发现存在肥大细胞聚集, 但其功能和机制尚不明确。肥大细胞是一种在组织中驻留的颗粒状造血细胞, 在过敏、哮喘、纤维化和关节炎的病理过程中发挥了关键作用。类胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶, 其为肥大细胞分泌最多的物质之一, 在肺部疾病中可作为成纤维细胞有丝分裂原。该研究分析了LAM细胞与LAM相关成纤维细胞(LAM-associated fibroblasts, LAF)的交互作用, 通过3D球状体共培养评估LAM细胞与肥大细胞迁移之间的关系, 并构建了LAM小鼠同种异体移植瘤模型探究肥大细胞及其分泌的类胰蛋白酶对LAM的影响。结果发现, LAM细胞/LAF共培养诱导LAF分泌多种CXC趋化因子, LAM肺中表达CXC趋化因子受体(CXCRs)的类胰蛋白酶阳性肥大细胞显著增加(P<0....     

蛋白酶激活受体-2激动剂对人皮肤和扁桃体肥大细胞释放组胺和类胰蛋白酶的影响

目的:研究蛋白酶激活受体-2(PAR-2)激动剂对人皮肤和扁桃体肥大细胞释放组胺和类胰蛋白酶的影响.方法:用PAR-2激动剂激发经酶悬浮的人皮肤和扁桃体肥大细胞,并分别测量类胰蛋白酶和组胺的释放量.结果:PAR-2激动剂丝-亮-异亮-甘-赖-缬(SLIGKV)可引起皮肤肥大细胞组胺释放,但对类胰蛋白酶释放无影响.相反,SLIGKV可引起扁桃体肥大细胞的类胰蛋白酶,而不是组胺释放.另外一种PAR-2激动剂反肉桂酰-亮-异亮-甘-精-亮-鸟-[酰胺](te-LIG-RLO-NH2)比SLIGKV-NH2诱导类胰蛋白酶和组胺释放的作用弱.结论:我们首次报道了皮肤和扁桃体肥大细胞具有在体外释放类胰蛋白酶的特性.皮肤和扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的差别揭示了一种新的肥大细胞对刺激产生反应的异质性的类型,提示人类肥大细胞至少有2种脱颗粒信号的自我放大机制.     

肥大细胞中类胰蛋白酶及其相关疾病

肥大细胞（mast cell,MC）是一种重要的炎症反应细胞。依据MC颗粒含有的蛋白酶和分布,将其分为T肥大细胞和TC肥大细胞两种类型。T肥大细胞内含有类胰蛋白酶,主要分布在呼吸道和肠黏膜层T淋巴细胞的周围。TC肥大细胞颗粒内含有类胰蛋白酶和胃促胰酶,主要分布在结缔组织,如皮肤、结膜、滑膜处。     

人原代肥大细胞体外诱导和组织分离方法的建立

目的: 建立获取和培养人原代肥大细胞的方法,为探讨肥大细胞的免疫调节作用及其机制奠定基础。方法: 用重组人源干细胞因子、IL-6和IL33刺激CD34+造血干细胞使之分化成肥大细胞;Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选法,分离肠道黏膜肥大细胞。应用免疫荧光染色技术分析所获得的原代肥大细胞表面分子CD117和FcεRⅠ,甲苯胺蓝染色或间接免疫荧光染色检测胞内类胰蛋白酶含量。结果: 黏膜肥大细胞及CD34+造血干细胞刺激分化而来的肥大细胞均表达CD117和FcεRⅠ,胞内均含有类胰蛋白酶。结论: 这两种方法均可以有效地获得大量纯化的原代肥大细胞,且各有优势,所得细胞适用于肥大细胞在机体免疫调节和病原防御等生理功能的后续研究。     

类胰蛋白酶与过敏性疾病

类胰蛋白酶是肥大细胞的重要介质之一,在肥大细胞被激活后释出胞外,与其他介质一起参与过敏性炎症过程。类胰蛋白酶一方面对过敏反应症状的出现有一定影响,另一方面可以作为肥大细胞脱颗粒的标志物,在过敏性疾病的鉴别诊断中起重要作用。     

双重免疫胶体金标记组织中肥大细胞内分泌颗粒的超微结构

目的：观察肥大细胞分泌颗粒内特异性酶的分布及其超微结构，并探讨肥大细胞的功能。方法：用双重免疫胶体金标记类胰蛋白酶抗体（AA5）及类糜蛋白酶抗体（CC4），在透射电子显微镜下观察肥大细胞内分泌颗粒的超微结构。结果：在肥大细胞内分泌颗粒中富集类胰蛋白酶和（或）类糜蛋白酶，多数酶蛋白呈细小球形结构；在细胞膜内侧分泌颗粒融合形成分泌通道，细胞的外侧可见肥大细胞脱出的颗粒；细胞内的另侧分泌颗粒呈球形小泡。结论：肥大细胞内酶蛋白的富集可为肥大细胞参与Ⅰ型变态反应提供物质基础。     

慢性荨麻疹患者的类胰蛋白酶测定

目的研究类胰蛋白酶与慢性荨麻疹发病的关系. 方法采用Pharmacia Unicap-100系统酶免疫荧光检测仪,分别对25例慢性荨麻疹患者和29例正常人作类胰蛋白酶检测. 结果慢性荨麻疹患者组类胰蛋白酶阳性率为72.0%,正常对照组阳性率为10.3%,两组比较有明显差异(P＜0.01). 结论类胰蛋白酶可作为慢性荨麻疹发病过程中肥大细胞激活的一个标示物,并可能与Ⅰ型变态反应的延缓相有关.     

丝氨酸蛋白酶对肥大细胞IL-4分泌的影响

目的探讨凝血酶、胰蛋白酶和类胰蛋白酶等丝氨酸蛋白酶对肥大细胞P815分泌IL-4的影响。方法肥大细胞培养后用凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶单独或与相应抑制剂凝血酶抑制剂、大豆胰蛋白酶抑制剂、α抗胰蛋白酶抑制剂、亮肽素结合处理肥大细胞,收集上清并用ELISA方法检测IL-4的水平。结果胰蛋白酶、类胰蛋白酶以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4。大豆胰蛋白酶抑制剂和α抗胰蛋白酶能阻断胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P0.05)。亮肽素能阻断类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P0.05)。而凝血酶对肥大细胞IL-4的分泌功能无影响。结论胰蛋白酶和类胰蛋白酶刺激肥大细胞IL-4分泌。     

肥大细胞类胰蛋白酶对人肾成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨肥大细胞类胰蛋白酶在慢性肾组织纤维化中的作用.方法应用MTT比色法检测类胰蛋白酶对成纤维细胞的增生,RT-PCR检测Ⅰ型胶原mRNA的表达.结果肥大细胞类胰蛋白酶可促进肾间质成纤维细胞增生和Ⅰ型胶原mRNA的表达,且依赖于肝素的存在.蛋白水解酶抑制剂苯甲脒能抑制类胰蛋白酶的上述效应.结论肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于肾间质成纤维细胞,参与肾间质纤维化过程.     

人血清类胰蛋白酶含量测定方法的建立

目的：检测正常人血清类胰蛋白酶含量，为肥大细胞相关疾病的诊断提供依据。方法：随机抽取正常人血清标本和1例过敏性休克死亡患者血清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测类胰蛋白酶的水平。结果：206份正常血清类胰蛋白酶含量的平均值为2.24ng/mL。过敏性休克死者血清胰蛋白酶含量为正常人的50倍。结论：本实验建立了较灵敏的检测类胰蛋白酶的ELISA法，为临床肥大细胞相关疾病的诊断提供依据。     

玉屏风散对变应性鼻炎肥大细胞释放类胰蛋白酶影响的实验研究

目的：探讨玉屏风散对变应性鼻炎肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用。方法：采用血清药理学和体外细胞培养的方法,研究玉屏风散含药血清体外对变应性鼻炎动物模型中腹腔肥大细胞（RPMC）释放类胰蛋白酶的影响。结果：与空白血清组比较,玉屏风散血清组RPMC释放类胰蛋白酶的量明显降低。结论：玉屏风散体外可抑制变应性鼻炎RPMC脱颗粒释放类胰蛋白酶,可能是该方通过稳定肥大细胞用于治疗变应性鼻炎的相关机制之一。     

腹泻型肠易激综合征患者结肠肥大细胞与症状相关性研究

目的 探讨腹泻型肠易激综合征（D-IBS）患者结肠黏膜中肥大细胞与症状的相关性. 方法 通过免疫荧光法检测肥大细胞在结肠黏膜的分布与计数,酶联免疫实验（ELISA）检测类胰蛋白酶的含量,通过Spearman相关性分析检验肥大细胞计数与症状的相关性. 结果 肥大细胞主要分布于结肠黏膜固有层腺体之间.D-IBS患者肠黏膜肥大细胞明显高于健康对照组（P＜0.05）,肥大细胞计数与腹痛严重程度相关（r =0.35,P＜0.05）.D-IBS患者结肠黏膜类胰蛋白酶含量高于健康对照组（P＜0.01）. 结论 D-IBS患者结肠黏膜中的肥大细胞数目增多与腹痛程度有关,可能是因为肥大细胞活化后类胰蛋白酶等产物释放增加调节内脏感知.     

慢性荨麻疹患者的类胰蛋白酶测定

目的 研究类胰蛋白酶与慢性荨麻疹发病的关系。方法 采用Pharmacia Unicap-100系统酶免疫荧光检测仪,分别对25例慢性荨麻疹患者的29例正常人作类胰蛋白酶检测。结果 慢性荨麻疹患者组类胰蛋白酶阳性率为72．0％,正常对照组阳性率为10．3％,两组比较有明显差异（P＜0．01）。结论 类胰蛋白酶可作为慢性荨麻疹发病过程中肥大细胞激活的一个标志物,并可能与Ⅰ型变态反应的延缓相有关。     

肥大细胞类胰蛋白酶对人肾成纤维细胞增殖和I型胶原表达的影响

目的　探讨肥大细胞类胰蛋白酶在慢性肾组织纤维化中的作用。方法　应用MTT比色法检测类胰蛋白酶对成纤维细胞的增生,RT PCR检测I型胶原mRNA的表达。结果　肥大细胞类胰蛋白酶可促进肾间质成纤维细胞增生和I型胶原mRNA的表达,且依赖于肝素的存在。蛋白水解酶抑制剂苯甲脒能抑制类胰蛋白酶的上述效应。结论　肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于肾间质成纤维细胞,参与肾间质纤维化过程。     

肥大细胞在良性前列腺增生和前列腺腺癌组织的分布及生物学意义

目的　研究良性前列腺增生和前列腺腺癌组织中肥大细胞分布及其生物学意义。方法　以肥大细胞特异的类胰蛋白酶作为标记蛋白 ,采用免疫组织化学染色法观察前列腺增生和前列腺腺癌组织内肥大细胞的分布。结果　良性前列腺增生组织肥大细胞平均数与合并有炎症的良性前列腺增生组织肥大细胞平均数差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。前列腺癌区肥大细胞数量明显少于前列腺癌旁间质 (P<0 .0 5 )。分化程度不同的前列腺癌旁间质的肥大细胞数量不同 (P<0 .0 5 )。结论　前列腺癌组织肥大细胞数量分布的差异提示肥大细胞可能参与机体抗肿瘤反应     

肥大细胞在肠易激综合征患者结肠的分布特点及其作用

目的：观察肥大细胞在回盲部和直肠乙状结肠交界部的分布特点和数量，探讨肥大细胞在肠易激综合征（IBS）发病机理中的作用。方法：组织切片采用免疫组化的方法，用鼠抗人肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体，测定类胰蛋白酶染色阳性的肥大细胞。结果：在IBS患者回盲部肥大细胞的数量明显高于对照组（P〈0．05），其中以腹泻型IBS患者增加更加明显（P〈0．01）。而在直肠乙状结肠交界部没有看到肥大细胞明显增加，但可见明显的肥大细胞脱颗粒现象。活动性非特异性结肠炎的患者在回盲部和直肠乙状结肠交界部均可见到肥大细胞的轻度增加，但与正常对照组相比没有统计学意义。结论：IBS患者回盲部肥大细胞的增加可能与其发病机理有关。     

蛋白酶激活受体2在类风湿关节炎中的作用研究进展

蛋白酶激活受体2 (protease activated receptor-2,PAR-2)是G蛋白偶联受体,主要是由肥大细胞表达,并可被胰酶、类胰蛋白酶激活,然后可导致肥大细胞去颗粒化而引起炎症。类风湿关节炎发生的本质过程可能就是通过激活肥大细胞上表达的PAR-2起作用。     

椒目油对豚鼠哮喘模型肥大细胞和类胰蛋白酶的影响

目的:探讨椒目油(ZSO)对豚鼠哮喘模型肺组织中肥大细胞及血浆类胰蛋白酶的影响,为ZSO治疗哮喘提供理论依据. 方法:实验分为4组:对照组,哮喘模型组,地塞米松治疗组和ZSO治疗组. 用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型. 镜下观察肺组织肥大细胞数量及脱颗粒现象. 运用UniCAP100全自动体外变应原检测仪测定豚鼠血浆类胰蛋白酶含量. 结果:哮喘模型组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为(14.87±4.67),(42.85±5.99),(119.78±12.50),与对照组(2.38±0.52),(24.91±9.79),(88.78±4.74)相比均升高,差异有统计学意义(P＜0.01). ZSO治疗组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为(6.38±1.06),(25.44±8.21),(93.22±6.40),与地塞米松治疗组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为(6.63±1.41),(25.33±6.14),(92.10±7.11),与哮喘模型组相比显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01). ZSO与地塞米松两治疗组之间上述指标相比差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论:ZSO能有效地减少哮喘豚鼠肺肥大细胞数量,抑制肥大细胞脱颗粒、释放类胰蛋白酶,从而能有效地治疗哮喘.