变应性疾病的实验室检查方法进展

变应性疾病包括变应性皮炎、食物过敏、过敏性鼻炎和变应性哮喘等，其发病率日益增高，且病情逐趋复杂化。WHO已将变应性疾病列为21世纪重点研究和防治的疾病。近年随着免疫组化、分子生物学技术和临床新技术，如纤维支气管镜的开展，已对此病有了共识，即其属于过敏性炎症，在炎症区有大量炎症细胞（包括嗜酸粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞等）浸润。此病的发病主要涉及变应原、抗体、细胞、受体和介质5个环节。当过敏原激发后，在15～20min所发生的速发相反应主要与肥大细胞有关，而在激发后4～24h所发生的迟发相反应则被认为…     

粉尘螨抗原对支气管哮喘患者外周血单个核细胞T-bet和GATA-3及FOXP3 mRNA表达水平的影响

目的 对支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMC)经粉尘螨刺激前、后T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平及相互关系进行研究.方法 选择25例哮喘患者和15名健康人为研究对象,每例受试者又分为变应原刺激组和未经变应原刺激的自体对照组,采用半定量-逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组受试者PBMC培养后T-bet mRNA、GATA-3mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平.结果 哮喘患者PBMC中FOXP3、T-bet的表达水平分别为0.3±0.4、0.42±0.24,与健康人(0.4±0.3、0.39±0.37)比较差异无统计学意义(t值分别为0.78、0.38,P均＞0.05),哮喘患者GATA-3(1.0±0.3)的表达与健康人(0.8±0.3)比较差异有统计学意义(t=2.27,P＜0.05);健康人PBMC经变应原刺激后FOXP3的表达(0.72±0.61)与未经变应原刺激的自体对照组(0.27±0.21)比较差异有统计学意义(t=3.12,P＜0.01);而T-bet、GATA-3的表达分别为0.3±0.4、0.9±1.0,与未经变应原刺激的自体对照组(0.3±0.6、0.8±0.6)比较差异无统计学意义(t值分别为0.27、0.77,P均＞0.05);哮喘患者PBMC经变应原刺激后T-bet、GATA-3的表达分别为0.49±0.42、2.1±1.7,与未经变应原刺激的自体对照组(0.16±0.06、0.6±0.3)比较差异有统计学意义(t值分别为3.72、5.15,P均＜0.01);但哮喘患者PBMC中经变应原刺激后FOXP3的表达为0.5±0.4,与未经变应原刺激的自体对照组(0.4±0.4)比较差异无统计学意义(t=1.60,P＞0.05);经变应原刺激后哮喘患者PBMC中△T-bet、△GATA-3、△FOXP3的表达分别为0.33±0.39、1.58±1.44、0.11±0.32,与健康人(0.03±0.40、0.11±0.53、0.43±0.66)比较差异有统计学意义(t值分别为2.30、3.79、2.08,P分别＜0.05、＜0.01、＜0.05);哮喘患者△FOXP3与△GATA-3、△T-bet表达水平呈负相关(r值分别为-0.62、-0.46,P分别＜0.01、＜0.05).结论 哮喘患者经变应原刺激后,既存在Th2特定转录因子GATA-3的优势表达,也存在Th1特定转录因子T-bet的优势表达,同时还存在调节性T淋巴细胞(Treg)特定转录因子FOXP3的表达低下.     

肽聚糖对变态反应性哮喘产妇新生儿脐带血中嗜碱性粒细胞的作用

目的 通过采用肽聚糖(PGN)刺激变态反应性哮喘产妇新生儿脐带血中嗜碱性粒细胞,测定其Toll样受体2(TLR2)的表达及白细胞介素(IL)-4的分泌,探讨PGN对变态反应性哮喘产妇新生儿脐带血中嗜碱性粒细胞的作用.方法 自2008年3 月1日至2009年3月1日在上海交通大学医学院附属新华医院住院分娩的12例变态反应性哮喘产妇(哮喘组)和16例健康产妇(对照组)的新生儿脐带血中提纯嗜碱性粒细胞,采用PGN刺激,经TLR2荧光抗体标记后,通过流式细胞术从抗体水平测定脐带血中嗜碱性粒细胞的TLR2表达;采用原位杂交技术从核酸水平观察TLR2 mRNA表达;采用ELISA法检测培养的上清液中IL-4含量(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).两组孕妇年龄、分娩方式、分娩孕龄及脐带血采集方式等比较,差异无统计学意义(P>0.05).结果 流式细胞术检测及原位杂交结果显示,采取PGN刺激后,哮喘组新生儿脐带血中嗜碱性粒细胞TLR2蛋白表达及核酸表达均显著高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);上清液中IL-4的含量明显高于对照组,差异亦有统计学意义(P<0.01).结论 TLR2介导的天然免疫反应通过嗜碱性粒细胞释放介质而导致变态反应性炎症发生.细菌成分可通过TLR2受体激活嗜碱性粒细胞(尤其有变态反应性疾病遗传史时)释放介质,可能是变态反应性疾病发病增加的原因.     

支气管哮喘患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞变化及其尘螨过敏状态的测定

目的通过对支气管哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平变化和尘螨过敏状态的测定,探讨调节性T细胞在过敏性支气管哮喘发病中的作用。方法用流式细胞仪测定CD4+CD25+Tr占CD4+T细胞的比例,采用过敏原皮试点刺方法测定支气管哮喘患者的尘螨过敏状态。结果 25例正常对照组和支气管哮喘发作组患者外周血CD4+CD25+Tr水平分别为8.66%±1.61%和4.81%±2.76%,两组有显著差异(P<0.01)。14例粉尘螨或屋尘螨(+～++)阳性组和11例粉尘螨或屋尘螨(+++)及以上阳性组的CD4+CD25+Tr水平分别为6.45%±2.08%,和2.73%±2.03%,两组有显著差异。结论哮喘患者体内存在Tr细胞免疫功能平衡失调,CD4+CD25+Tr细胞处于低水平,CD4+CD25+Tr数量和抑制功能减弱或呈低反应性可能是导致支气管哮喘发病的原因之一。粉尘螨或屋尘螨重度过敏患者的外周血CD4+CD25+Tr水平明显低于轻度过敏者,提示CD4+CD25+Tr可能与支气管哮喘的过敏状态有关。     

神经肽和哮喘

在人类呼吸道的神经中有多种神经肽，它们可能参与哮喘的炎症过程。神经肽的许多炎症性和功能性效应与哮喘有关，而且有令人信服的证据表明神经肽与哮喘的病理生理过程及症状有关。     

流式细胞仪与免疫磁珠分选法纯化脐血嗜碱粒细胞的比较

近年来研究结果显示,嗜碱粒细胞在过敏反应炎症中担当重要角色,是炎症的发起者和传播者~[1].嗜碱粒细胞占外周血白细胞的小部分(<1%),提纯一定数量的嗜碱粒细胞就需要较多的血,这限制了对它的深入研究.产妇脐带血血量较多,可得到50-150 ml的量,而且脐带血尚未直接受到外界抗原刺激,是研究过敏性疾病发病机制的理想标本.本研究比较流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法提纯产妇脐带血中嗜碱粒细胞的分选效率.     

过敏原皮试虾阳性者血清虾特异性IgG的检测

近年来食物过敏患者日益增多,有报道食物过敏患者发病不仅与体内IgE有关,也与体内过敏原特异性IgG抗体升高有关[1]。为探讨经过敏原皮试确诊为虾阳性患者体内特异性IgG水平及与过敏原皮试的关系,我们测定部分皮试虾阳性患者血清虾特异性IgG,观察这类人群是否产生虾特异性IgG及其升高程度。一、方法采集皮试虾阳性者血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测虾特异性IgG,检测正常组22名、皮试虾(-)组7例、皮试虾( )组18例、皮试虾( )组7例。判断标准:虾特异性IgG≥90 U/m l判定为阳性。二、结果见表1。表1 4组受检者虾特异性IgG检测结…     

2475例过敏患者过敏原分析

收集2475例过敏患者资料,观察过敏原的变化和皮肤点刺试验与sIgE的结果.过敏患者对狗、猫、真菌2、虾过敏逐年递增(P＜0.01);对胶乳和真菌1过敏在2001～2004年逐年递增,2005年稍减少(P＜0.01);对草本、螨过敏2002年起逐年递增;对树花粉、鸡蛋、牛奶过敏5年中变化不明显(P＞0.05).患者对螨过敏与年龄有关(P＜0.01),以20～40岁最明显,40～60岁男性最低.患者对真菌2过敏也与年龄有关(P＜0.01);对狗、猫、胶乳、真菌1、树花粉、草本、鸡蛋、牛奶、虾的过敏与患者年龄无关(P＞0.05).5年来单个过敏原过敏患者逐渐减少,患者过敏原个数明显增加(P＜0.01).吸入过敏患者皮试与sIgE相关,r=0.467.食物过敏患者皮试和sIgE结果的相关性差.总的皮试和sIgE的符合率为77.7%.     

新生儿、儿童及成人外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞分泌IFN—γ及IL—4变化研究

本研究应用相应的荧光标记的抗体 ,从单细胞水平检测了正常无家族过敏史的 17例新生儿、 18例儿童及 10例成人外周血CD4+ 、CD8+ 细胞分泌IFN γ、IL 4的变化 ,结果显示产生IFN γ的CD4+ (Th1)和CD8+ (Tc1)细胞、产生IL 4的CD4+ (Th2 )细胞及同时产生IFN γ/IL 4的CD4+ (Th0 )细胞 ,随着年龄的增长而明显增高 (P <0 0 5 ) ,Th1/Th2比值也明显升高 (P <0 0 5 )。表明从新生儿期至成人Th1、Tc1、Th2、Th0有一个正常生理性增加过程 ,其中Th1、Tc1变化更为显著 ,可能与抗原暴露接触有关。