IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白降低软骨细胞的自噬功能

目的 探究肌醇依赖性激酶1α（IRE1α）通过调控内质网钙稳态蛋白（CHERP）影响软骨细胞自噬功能的相关机制。方法 衣霉素（TM）处理人软骨细胞C28/I2,Western blot检测不同时间点的内质网应激和自噬相关蛋白指标。4μ8c、雷帕霉素（Rapa）处理C28/I2（分为：NC组、4μ8c组、Rapa组、4μ8c+Rapa组）,Western blot检测自噬相关蛋白指标。分别从软骨组织特异性ERN1基因敲除小鼠（ERN1 CKO）和对照小鼠（Control）软骨组织分离原代软骨细胞,qPCR检测ERN1及自噬相关蛋白ATG5、ATG7的mRNA 水平,Western blot 检测 IRE1α/p- IRE1α、CHERP 表达水平,流式细胞术检测胞内钙离子含量。巴佛洛霉素 A1 （Bafilomycin A1）处理原代软骨细胞（分为Control组、Control+Bafilomycin A1组、ERN1 CKO组、ERN1 CKO+Bafilomycin A1 组）,Western blot检测LC3Ⅱ、LC3Ⅰ的表达。自噬双荧光病毒在Rapa处理下检测自噬流（分为Control+Rapa组、ERN1 CKO+Rapa组）。C28/I2中过表达CHERP与IRE1α,免疫荧光检测自噬水平。结果 TM处理C28/I2细胞后,内质网应激相关标志蛋白表达上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P<0.05）,p62表达下调（P<0.05）。相较对照组,Rapa上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P<0.001）,4μ8c+Rapa组相较Rapa组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P<0.05）。相较于对照组,原代软骨细胞中敲除ERN1/IRE1α后,ERN1（P<0.01）、ATG5（P<0.001）、ATG7（P<0.001）mRNA水平显著下调。IRE1α/p-IRE1α蛋白表达缺失或显著下调（P<0.01）,CHERP蛋白表达上调（P<0.05）,胞内钙离子含量显著上升（P<0.001）。巴佛洛霉素 A1 处理原代软骨细胞后,Control+Bafilomycin A1 组较Control组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P<0.01）,ERN1 CKO+Bafilomycin A1组较ERN1 CKO组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P<0.05）、较Control+Bafilomycin A1组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降（P<0.05）。自噬双荧光病毒处理后,ERN1 CKO+Rapa组较Control+Rapa组未淬灭LC3-GFP荧光增强（P<0.05）。C28/I2细胞中过表达CHERP降低LC3荧光强度,过表达IRE1α增强LC3荧光表达并能部分挽救CHERP导致的荧光降低情况。结论 IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白,升高胞内钙离子含量,进一步导致软骨细胞的自噬功能受损。     

马钱苷对AGEs致巨噬细胞极化的影响

目的 观察马钱苷对晚期糖基化终末产物（AGEs）致巨噬细胞极化的影响。方法 建立AGEs刺激巨噬细胞模型,设置空白对照组,模型组,氨基胍组,马钱苷低剂量组（1 μmol/L）和马钱苷高剂量组（10 μmol/L）。除空白对照组外,加入100 mg/L的AGEs刺激24 h后采用ELISA法检测细胞上清促炎性细胞因子IL-12、TNF-α和抑炎性细胞因子IL-10水平,采用流式细胞仪检测巨噬细胞M1型标记蛋白CD86和M2型标记蛋白CD206表达水平;免疫荧光法检测M1型标记蛋白iNOS和M2型标记蛋白CD206表达;Western blot法检测RAGE和巨噬细胞极化相关蛋白RBP-J、IRF8表达。结果 AGEs可上调IL-12、TNF-α水平（P<0.01）,促进巨噬细胞iNOS、RAGE、RBP-J和IRF8蛋白表达（P<0.01）;而马钱苷预孵能够下调IL-12、TNF-α水平（P<0.01）,上调IL-10水平,抑制RAGE、iNOS、RPB-J、IRF8蛋白表达（P<0.05~0.01）。结论 马钱苷可通过抑制RAGE/RBP-J/IRF8通路,抑制M1巨噬细胞极化,下调促炎因子IL-12、TNF-α水平,上调抑炎因子IL-10分泌,改善肾脏巨噬细胞炎症反应。      

干扰肿瘤相关巨噬细胞的P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭

目的 研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及分子机制。方法 将16只健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组、对照组（8只/组）,利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核,建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21天处死小鼠,取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织,采用HE染色观察小鼠胶质瘤形态,利用免疫荧光检测Iba-1、 P2X4受体的表达情况;应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为TAMs,采用RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关标志物及P2X4受体在TAMs的mRNA表达情况;采用Western blot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况;采用siRNA P2X4,下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达,RT-qPCR、Western blot检测siRNA P2X4转染后TAMs中IL-1β、IL-18的mRNA及蛋白表达;利 用transwell侵袭及迁移实验检测siRNA P2X4 转染后TAMs对GL261细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与对照组相比,荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞（P<0.0001）,且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高（P=0.001）;使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后,M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调（P=0.0001、0.001）,M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调（P=0.006、0.001）,但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著,同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高（P=0.005、0.014）。干扰TAMs中P2X4受体表达引起其IL-1β、IL-18的mRNA（P<0.01）及蛋白表达水平（P<0.01,P<0.05）降低,并抑制TAMs促进胶质瘤细胞侵袭和迁移的能力（P=0.004、0.017）。结论 降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可能通过IL-1β、IL-18影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭。     

重组Klotho蛋白对骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转变的影响

目的:探究重组Klotho蛋白对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞表型转变的影响.方法:分离并鉴定小鼠骨髓来源性巨噬细胞,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)转变为巨噬细胞M0,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定细胞,普通光镜观察M0细胞形态.将成熟骨髓来源巨噬细胞细胞M0分成LPS组、LPS+Klotho组和空白组.LPS组用 100ng/mL LPS处理,LPS+Klotho组给与 1 μg/mL Klotho和 100ng/mL LPS+LPS共同处理.RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关分子:M1亚型巨噬细胞相关标志物(IL-1β、IL-6、iNOS)mRNA和M2亚型巨噬细胞相关标记物(Arg-1、IL-10)mRNA表达.Western blotting检测iNOS、Arg-1蛋白表达水平,细胞免疫荧光检测细胞肿瘤坏死因子(TNF-a)和Arg-1蛋白含量.结果:流式细胞术显示骨髓巨噬细胞纯度为98.4％,光镜和细胞免疫荧光显示骨髓巨噬细胞呈现不规则形态.与空白组相比,LPS组IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-a蛋白相对表达量明显提高(P＜0.001).而与LPS组相比,LPS+Klotho组降低Ml亚型巨噬细胞标记物IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量(P＜0.001),显著提高了M2型巨噬细胞标志物Arg-1、IL-10 mRNA和Arg-1的蛋白的表达(P＜0.001).结论:重组Klotho蛋白可促进骨髓来源性巨噬细胞由Ml表型向M2表型转变.     

中国优势基因型弓形虫Wh3株诱导人单核巨噬细胞THP-1偏移极化的研究

目的 研究弓形虫Wh3株感染巨噬细胞后,诱导巨噬细胞偏移分化情况.方法 获取弓形虫Wh3株、RH株和ME49株,感染人巨噬细胞THP-1,感染后6、24 h分别收集培养上清液和巨噬细胞.ELISA检测培养上清液中巨噬细胞分泌的白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TGF-β等细胞因子浓度.qRT-PCR分析M1/M2相关基因iNOS、Arginase-1和TNF-α、IL-12、TGF-β、IL-10等细胞因子mRNA转录水平.Western blot分析巨噬细胞iNOS和Arginase-1蛋白表达水平.结果 ELISA检测培养上清液中细胞因子含量,发现弓形虫ME49株感染巨噬细胞6、24 h后,IL-6和TNF-α含量最高(P<0.01);弓形虫RH株感染后IL-10和TGF-β含量最高(P<0.01);弓形虫Wh3株感染后培养上清液细胞因子含量介于RH株和ME49株之间(P<0.01).感染ME49株弓形虫的巨噬细胞24 h后iNOS转录水平及感染6、24 h后TNF-α和IL-12转录水平均升高(P<0.001);RH株感染6、24 h后巨噬细胞的IL-10和Ar-ginase-1的转录水平及感染6 h后TGF-β转录水平升高(P<0.05);同样发现弓形虫Wh3株介于RH株和ME49株之间.Western blot测定iNOS、Arginase-1也得到相似的结果 .在感染Wh3株和ME49株弓形虫24 h后,iNOS蛋白表达增高(P<0.0001),而在感染RH株24 h后,Arginase-1表达量升高(P<0.001).结论 弓形虫Wh3株感染后,巨噬细胞表现出介于M1和M2之间的极化方向,且更接近于M2极化方向.     

原花青素对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的影响

目的：研究原花青素对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）基因表达的影响。方法：建立大鼠佐剂性关节炎（AA）模型。硝酸还原酶法测大鼠关节液中NO的含量；RT-PCR和Western blot分别检测大鼠腹腔巨噬细胞内iNOS mRNA和蛋白的表达；同时EHSA检测大鼠血清中细胞因子IL-1β、TNF-α的含量。结果：原花青素显著减低AA大鼠足跖炎症组织中NO的含量以及血清中IL-1β、TNF-α的水平，同时下调AA大鼠腹腔巨噬细胞iNOS mRNA和蛋白的表达。结论：原花青素对大鼠佐剂性关节炎的抗炎作用可能与其降低TNF-α和IL-1β的水平，抑制iNOS的mRNA和蛋白表达从而减少NO的释放有关。     

IRE1-XBP1通路调控肝巨噬细胞极性的机制研究

目的：分离、培养 LEWIS 大鼠肝脏肝巨噬细胞（KCs），观察肌醇酶1-X 盒连接蛋白1（IRE1-XBP1）通路活性改变对KCs 功能的调控的作用机制。方法（1）采取Ⅳ型胶原酶消化肝脏联合非连续梯度离心法分离 Lewis 大鼠 KCs ；（2）鉴定后的KCs 分为4组：XBP1沉默组（XBP1-shRNA 组）、错义序列沉默对照组（Ctrl-shRNA 组）；Adv-XBP1过表达组（AdV-XBP1组）、错义序列过表达对照组（Ctrl-AdV 组）；（3）实时荧光定量 PCR（RT-PCR）检测各组 KCs 中 XBP1、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17转录水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 JAK1、JAK2、STAT1及 STAT3的蛋白表达水平；（4）流式细胞术（FCM ）及激光共聚焦检测各组 KCs 表型的变化情况；（5）分离大鼠脾脏淋巴细胞，尼龙毛柱过滤纯化 T 细胞，与上述各组 KCs 共培养，Brdu 渗入法检测T 细胞增殖情况；（6） Annexin V ／PI 法 FCM 观察 T 淋巴细胞凋亡情况；（7）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测上清液中 IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17及 IL-10水平。结果（1）RT-PCR 结果显示，XBP1-shRNA 组中 XBP1的表达量较对照组显著降低，而在 Adv-XBP1组则明显上调（P＜0．05）；（2）FCM 发现，XBP1-shRNA 组中 M HC-Ⅱ、CD86、CD40的表达明显低于对照组，而 CD204和CD206的表达则显著高于对照组；而在 Adv-XBP1组，则呈相反趋势；（3）Western blot 检测发现 XBP1-shRNA 组中 JAK1、JAK2、STAT1和 STAT3的蛋白表达及其磷酸化水平均受到抑制，而在 Adv-XBP1组则上述蛋白的表达及磷酸化水平得到显著增强；（4）Brdu 发现抑制 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖受到明显抑制，凋亡增加，促炎细胞因子分泌减少，抗炎细胞因子分泌增加（P＜0．05），而上调 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖则明显增强，凋亡明显减少，促炎细胞因子分泌增加，抗炎细胞因子分泌减少（P＜0．05）。结论 KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以转化 KCs 的极性状态，并通过调节 JAK-STAT 家族成员表达，调控 KCs 自分泌细胞因子的组成成分；KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以影响共培养初始 T 淋巴细胞的增殖分化、凋亡及相关细胞因子的分泌。     

褪黑素通过PPARγ-LXRα调控 THP-1巨噬细胞ABCA1表达

目的 研究褪黑素对巨噬细胞ABCA1受体表达的影响及作用机制。方法 使用THP-1细胞体外培养PMA诱导分化为巨噬细胞,给予不同浓度的褪黑素(0、50nmol/L、100nmol/L、500nmol/L和1μmol/L)干预细胞,RT-PCR和Western blot法分别检测巨噬细胞ABCA1和LXRα的mRNA和蛋白相对表达量的变化。分别应用LXRα抑制剂GSK2033、PPARγ抑制剂GW9662、非选择性MT1/MT2受体拮抗剂Luzindole、选择性MT2受体拮抗剂K185进一步验证褪黑素调控ABCA1表达的作用机制。结果 褪黑素显著上调THP-1来源巨噬细胞ABCA1和LXRα的mRNA和蛋白相对表达量,且呈剂量依赖性(P<0.05)。GW9662均可显著抑制褪黑素上调的ABCA1和LXRα蛋白表达水平(P=0.000),GSK2033可显著抑制褪黑素上调的ABCA1蛋白表达(P=0.000),但对LXRα蛋白表达水平无影响。而Luzindole和K185均未明显抑制褪黑素上调的ABCA1蛋白表达。结论 褪黑素显著上调巨噬细胞ABCA1的表达,PPARγ-LXRα通路参与了褪黑素对ABCA1表达的调节作用。     

应激性肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与SR-AI mRNA表达的影响

目的 探讨心理应激时肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与SR-AI mRNA表达的影响。方法 不同浓度肾上腺素（1pmol／L～1μmol／L）处理THP-1源性巨噬细胞24h，运用逆转录多聚酶链反应检测其TGF-β1与SR-AI mRNA表达。结果 1～10nmol／L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。而100nmol／L及1μmol／L的肾上腺素下调TGF-β1 mRNA水平和上调SR-AI mRNA水平，与各自对照组比较差异均有显著性意义（P〈0.05）。结论 一定浓度的肾上腺素可下调THP-1源性巨噬细胞TGF-β1 mRNA水平，上调其SR-AI mRNA水平。     

缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏中内质网应激及炎症反应的抑制作用

【摘要】 目的 探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）及相关炎症反应在糖尿病大鼠肾脏损害中的作用及血管紧张素II受体拮抗剂缬沙坦对其的影响。 方法 采用腹腔注射链脲佐菌素方法建立糖尿病肾病大鼠模型。将大鼠随机分为对照组（Con组）、糖尿病组（DM组）、缬沙坦组（DM V组）。缬沙坦组每日灌胃给予缬沙坦（10mg/kg）共6周。应用免疫组化法及Western blot方法检测ERS相关蛋白P-IRE1α、P-JNK及中性粒细胞趋化因子MCP-1的表达及定位，实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测IRE1α、JNK及MCP-1mRNA表达变化。同时观察各组大鼠尿蛋白、BUN、Scr等指标的变化。 结果 与Con组相比，DM组大鼠肾脏病理炎症细胞浸润加重，P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达上调，IRE1αmRNA、MCP-1mRNA表达水平上调;与DM组相比，DM V组肾脏病理炎症细胞浸润减轻，P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达下调，IRE1αmRNA、MCP-1mRNA表达水平下调。3组间JNKmRNA及蛋白表达无明显差异。 结论 糖尿病大鼠肾脏中存在内质网应激和炎症反应的激活，缬沙坦可能部分通过抑制内质网应激中的IRE1/JNK/MCP-1通路，减少炎症反应，从而发挥肾脏保护作用。     

伊马替尼抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症表型

【目的】探讨伊马替尼（Ima）在体外对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症表型的影响。【方法】RAW264.7细胞在LPS（0.1μg/mL）或/和Ima（1μmol/L,5μmol/L）处理后,通过Q-PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-10、CCL2、iNOS、TNF-α和Arg1的mRNA表达变化;采用Western Blot检测iNOS蛋白表达变化以及NF-κB和MAPK信号通路活化情况;利用ELISA法检测细胞上清IL-1β、CCL2、IL-10和TNFα的蛋白表达情况。【结果】与对照组相比较,LPS刺激8h后,RAW264.7细胞内的炎症指标IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA水平显著升高（P<0.001）以及抗炎指标IL-10的mRNA水平也明显升高（P<0.001）;LPS刺激24h后,细胞上清中IL-1β、IL-10、CCL2和TNF-α的蛋白水平显著上升（P<0.001）,细胞内iNOS蛋白表达以及p65,p38,ERK和AKT的磷酸化水平显著增加。和LPS组相比,Ima提前处理后,IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.01,P<0.001）而IL-10的mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.001）,这种抑制作用具有剂量依赖性。Ima的预处理抑制了LPS诱导的p65,p38,ERK和AKT磷酸化。单独用Ima处理RAW264.7细胞后,细胞的功能状态未见明显的改变。【结论】伊马替尼可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症表型,这种作用与抑制NF-κB和MAPK信号通路的过度激活有关。     

白介素25及其相关因子在非酒精性脂肪肝患者血清及肝内的表达及其意义

目的 分析白介素25(interleukin 25,IL-25)及其相关因子在非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者血清及肝内的表达并探讨其临床意义.方法 纳入2017年9月至2019年2月南昌大学第一附属医院符合NAFLD诊断标准的患者50例,并纳入行部分肝切除的肝血管瘤或肝囊肿患者20例作为对照组.采用ELISA检测患者血清IL-25等细胞因子水平.选取对照组6例和NAFLD患者12例分别通过实时荧光定量PCR法检测肝内IL-25等细胞因子的mRNA表达,采用免疫组化/免疫荧光检测患者肝内IL-25水平和巨噬细胞标记物CD68、M2型巨噬细胞标记物CD206、谷氨酰胺酶转氨酶(glutaminase transaminase,TGM)2蛋白表达.结果 ①与对照组相比,NAFLD组患者血清IL-25(P=0.003)、IL-13(P = 0.007)及IL-4(P = 0.001)水平明显降低;②与对照组相比,NAFLD患者肝内IL-13(P=0.007)及IL-4(P=0.003)mRNA表达明显降低,CD68 mRNA表达明显升高(P＜0.001);③与对照组相比,NAFLD患者肝内枯否细胞数量更多(P＜0.001),M2型巨噬细胞数量减少(P＜0.001),IL-25(P＜0.001)蛋白水平更低.随着肝脏脂肪变程度的加重,肝内枯否细胞数量逐渐增加(P＜0.001),M2型巨噬细胞数量逐渐减少(P＜0.001),IL-25蛋白表达逐渐减少(P＜0.001).结论 NAFLD患者血清和肝组织IL-25、Th2型细胞因子和肝内M2型巨噬细胞明显减少,且与肝脏脂肪变的严重程度呈负相关.     

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。     

人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响

目的: 探究人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响。方法: Dil标记神经干细胞微囊泡,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察THP-1巨噬细胞对微囊泡的内化;实时荧光定量PCR筛选微囊泡最适浓度;100 ng/mL 脂多糖刺激THP-1细胞6 h后,微囊泡处理12 h,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性因子IL-1β,肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)以及IL-6的mRNA表达水平;微囊泡处理24 h, 蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1, Arg-1)蛋白表达水平;流式细胞术检测THP-1巨噬细胞M1极化表面标志CD86表达。结果： THP-1巨噬细胞在12 h和24 h均能明显内化神经干细胞微囊泡;0.12 μg/mL微囊泡具有最适调控作用;与未处理细胞相比,脂多糖处理后明显增加THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白,Arg-1蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);经神经干细胞微囊泡处理后THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05);与未处理细胞相比,脂多糖和微囊泡处理后THP-1巨噬细胞CD86表达差异无统计学意义。结论： 人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡能够减少THP-1细胞炎性细胞因子和iNOS表达,抑制巨噬细胞M1极化。     

淋巴毒素β受体活化对膀胱癌细胞NF-κB信号通路及细胞增殖的影响

目的 研究淋巴毒素β受体(LTβR)的活化对膀胱癌细胞株5637核转录因子-κB(NF-κB)信号通路及细胞增殖的影响。 方法 以膀胱癌细胞株5637为研究对象,以配体淋巴毒素α1β2(LTα1β2)诱导LTβR信号活化。qRT-PCR检测NF-κB信号通路RelA、RelB mRNA,细胞因子LTα、LTβ、LIGHT、TNFα、IL-6、IL-1β mRNA和增殖相关基因细胞周期素D1(CyclinD1)、生存素(Survivin) mRNA的表达水平;WB法检测NF-κB经典信号通路活化状态;CCK-8法检测细胞增殖水平。 结果 LTβR活化后,RelA mRNA表达上调2.5倍(P=0.003),TNFα、IL-1β、CyclinD1、Survivin mRNA出现不同程度的上调(均P<0.05),随着LTβR表达下调,以上基因mRNA表达也下降(均P<0.05);WB结果显示活化标志蛋白p-p65表达出现升高趋势(P>0.05);与对照组相比,细胞增殖活性的差异未见统计学意义(P>0.05)。 结论 活化LTβR可促进NF-κB经典信号通路主要成员RelA的表达和活化,并有可能通过上调促炎细胞因子TNFα、IL-1β的表达参与膀胱癌炎性微环境的形成;有利促增殖相关基因CyclinD1、Survivin的表达,但在细胞增殖水平上并未见明显效应。      

IL-1β预处理脂肪间充质干细胞促进VEGF蛋白分泌和巨噬细胞M2型极化的研究

目的探讨白细胞介素（IL）-1β预处理脂肪间充质干细胞（ADMSCs）对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和巨噬细胞M₂型极化的影响及作用机制。方法IL-1β预处理ADMSCs 24 h,Western blot法检测ADMSCs中环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达,ELISA法测定ADMSCs培养基中前列腺素E₂(PGE₂)和VEGF蛋白质量浓度; IL-1β预处理的ADMSCs细胞培养基培养丙二醇甲醚醋酸酯（PMA）-U937巨噬细胞（M0巨噬细胞）72 h后,实时荧光定量PCR法检测PMA-U937细胞CD163（巨噬细胞M₂型极化标志物）和IL-10 mRNA表达。慢病毒干扰ADMSCs细胞中COX-2表达后,观察ADMSCs培养基中VEGF蛋白质量浓度（ELISA法）和PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA的表达（实时荧光定量PCR法）。结果IL-1β预处理ADMSCs细胞后上调其COX-2蛋白表达,增加PGE₂和VEGF蛋白分泌（P<0.05）;IL-1β预处理的ADMSCs细胞培养基可上调PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA表达水平（P<0.01）。干扰ADMSCs细胞中COX-2蛋白表达后,可抑制IL-1β预处理的ADMSCs细胞中VEGF蛋白分泌（P<0.05）,亦可抑制其对PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA表达的影响（P<0.05）。结论IL-1β预处理ADMSCs细胞可通过COX-2-PGE₂信号轴,增加VEGF蛋白分泌,以及诱导PMA-U937巨噬细胞M₂型极化,提示IL-1β预处理能够增强ADMSCs细胞抗炎活性。     

低剂量辐射诱导小鼠睾丸细胞中IRE1α和XBP1 mRNA及其蛋白的表达

目的：检测小鼠睾丸细胞中肌醇需求酶1α（IRE1α）和X盒结合蛋白1（XBP1）mRNA和蛋白的表达,探讨IRE1-XBP1通路激活在低剂量辐射（LDR）诱导小鼠睾丸细胞内质网应激中的作用。方法：50只健康雄性ICR小鼠,随机分为10组,经75 mGy X射线全身照射后不同时间（0、3、6、12和24h）及不同剂量（0、50、75、100和200 mGy）X射线照射后12 h处死,分别采用实时定量PCR法和Western blotting法检测小鼠睾丸细胞中IRE1α、Total-XBP1（T-XBP1）和Spliced-XBP1（S-XBP1）mRNA表达水平及蛋白表达强度。结果：75 mGy X射线照射后0~24 h,小鼠睾丸细胞中IRE1α、T-XBP1和S-XBP1 mRNA（除了3 h时T-XBP1和S-XBP1 mRNA）表达水平均随时间延长而升高,并在6 h时达到峰值,而后逐渐降低;与0 h组比较,6、12和24 h组IRE1α mRNA、6和12 h组T-XBP1 mRNA及S-XBP1 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）。与0 h组比较,不同时间组IRE1α和S-XBP1蛋白表达强度升高,6和12 h组IRE1α蛋白表达强度升高最明显,24 h组S-XBP1蛋白表达强度升高最明显,而T-XBP1蛋白表达强度稍有降低。0~200 mGy照射后12 h,小鼠睾丸细胞中IRE1α、T-XBP1和S-XBP1 mRNA表达水平升高,75 mGyX射线照射后升高达峰值后逐渐降低,甚至降至0 mGy以下;与0 mGy组比较,75和200 mGy组小鼠睾丸细胞中IRE1α、75 mGy组小鼠睾丸细胞中T-XBP1和S-XBP1mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。与0 mGy组比较,75 mGy组IRE1α和S-XBP1蛋白表达强度升高,75和200 mGy组小鼠睾丸细胞中S-XBP1蛋白表达强度升高最明显,而T-XBP1蛋白表达强度无明显变化。结论：LDR可诱导小鼠睾丸细胞中IRE1α和S-XBP1 mRNA表达水平和蛋白表达强度增加,从而激活内质网应激中的IRE1-XBP1信号通路。     

降钙素基因相关肽抑制铜绿假单胞菌外膜囊泡致炎作用

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对铜绿假单胞菌外膜囊泡（OMVs）诱导炎症反应的影响。方法培养铜绿假单胞菌并提取OMVs,取1、5、10μg·mL-1 OMVs刺激鼠巨噬细胞RAW264.7,采用ELISA法检测细胞中促炎性细胞因子[包括白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]含量,采用CCK-8法及流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用10μg·mL-1 OMVs与1、5、10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,并检测细胞中促炎细胞因子水平;采用20μg·mL-1 OMVs与10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,检测细胞增殖与凋亡;培养人中性粒细胞,采用脱颗粒实验检测CGRP对其分泌中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白（NGAL）及弹性蛋白酶活性的影响。结果不同浓度OMVs均能显著刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β（P<0.05）,而CGRP则能够抑制RAW264.7细胞分泌促炎细胞因子,且呈剂量依赖性（P<0.05）;20μg·mL-1 OMVs则能够显著降低细胞活性,并促进细胞凋亡（P<0.05）,10 nmol·L-1 CGRP与OMVs共同处理能显著增加RAW264.7细胞活性,抑制凋亡发生（P<0.05）;不同浓度OMVs均能提升NGAL表达水平以及弹性蛋白酶活性（P<0.05）,而10 nmol·L-1 CGRP则能够显著抑制OMVs引起的脱颗粒效应（P<0.05）。结论 CGRP可有效下调铜绿假单胞菌OMVs诱导的鼠巨噬细胞RAW264.7促炎因子分泌水平、减少凋亡率以及特异性中性粒细胞释放,进而抑制炎症反应。     

哮喘儿童巨噬细胞吞噬功能和肺功能的关系研究

目的探讨哮喘儿童巨噬细胞吞噬功能和肺功能的关系。方法收集2017年10月—2018年10月经检查确诊为哮喘的儿童25例为试验组,同期收集气道炎性反应但非哮喘的儿童25例作为对照组,通过肺功能仪测定2组儿童1秒用力呼气容积(FEV_1)、FEV_1占预计值百分率(FEV_1%)、FEV_1/用力肺活量(FVC)等指标;采集2组儿童的痰液标本,通过痰细胞学方法测定嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等数量;对2组儿童空腹外周静脉取血3 ml,分离血浆后通过流式细胞仪测定CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+等细胞免疫功能,分析IL-12β、iNOS、TNF-αmRNA的表达量并进行比较分析。结果试验组患儿肺功能指标FEV_1、FEV_1%、FVC均低于对照组,差异有统计学意义(t=7.003,P=0.001;t=6.125,P=0.006;t=5.998,P=0.006);试验组患儿气道痰液中的巨噬细胞和中性粒细胞高于对照组,差异有统计学意义(t=7.105,P=0.001;t=-6.852,P=0.001),痰液嗜酸性粒细胞低于对照组(t=-7.543,P=0.000);试验组血浆T淋巴细胞亚群CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+值明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=5.694,P=0.001;t=6.853,P=0.005;t=7.165,P=0.003);试验组患儿血浆炎性因子IL-12βmRNA和TNF-αmRNA表达高于对照组(t=8.203,P=0.000; t=7.415,P=0.001),iNOS mRNA表达低于对照组(t=5.496,P=0.001)。结论哮喘儿童巨噬细胞吞噬功能和肺功能之间存在相关性。     

重组人Elafin对慢性高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良中炎性因子及NF-κB信号通路的影响

目的：探讨重组人Elafin对慢性高氧致新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）中炎性因子和核因子-κB p65（nuclear factor-κB,NF-κB）蛋白的影响。方法：将30只C57BL/6J新生24 h内小鼠随机分成空气组、高氧+L/R组及高氧+Elafin组（n=10）。高氧+L/R 组、高氧+Elafin组暴露于85%氧气中。21 d时进行基础肺功能测定,采用HE染色观察小鼠肺组织形态学改变,RT-PCR检测肺组织炎症因子的表达,Western blot检测NF-κB p65蛋白表达情况。结果：与空气组[（7.85±0.24） g]比较,高氧+L/R组小鼠体质量[（5.33±0.63） g]显著下降（P=0.000）,肺发育受阻;TNF-α mRNA、IL-1β mRNA （P=0.000） 和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达增加,抗炎因子IL-4、IL-13 mRNA（P=0.000）表达降低。与高氧+L/R组比较,高氧+Elafin组小鼠体质量升高（P=0.014）,肺泡形态趋于正常;TNF-α（P=0.011）、IL-1β（P=0.000） mRNA和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达降低,IL-4（P=0.047）、IL-13（P=0.000） mRNA表达增加。结论：Elafin能有效减轻高氧诱导的小鼠肺损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB活化及炎症因子释放密切相关。