临床基因扩增检验实验室过程记录电子文档的建立及应用

临床基因扩增检验实验室的准入制度标志着我国临床实验室管理工作日臻完善和规范。其完整的文件管理和过程记录作为临床基因扩增检验实验室的重要组成部分，也日益受到广大同行的关注。客观、全面的质量管理体系，有赖于高效、便捷、准确的管理系统。为此，我们应用Excel工作表的强大功能，建立和开发了临床基因扩增检验实验室过程记录电子文档管理系统，并应用于临床基因扩增检验实验室的日常管理，结果满意，现介绍如下。[第一段]     

受体酪氨酸激酶基因及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义

目的 探讨RON mRNA及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达与临床意义。方法选择63例膀胱移行上皮癌(TCCB)、7例膀胱内翻性乳头状瘤(IPB)、9例膀胱低度恶性潜能尿路上皮瘤(PUNLMP)患者和12例外伤性膀胱破裂且经病理证实无肿瘤细胞的正常膀胱黏膜组织患者。其中,病理Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级患者分别为30、15和18例,临床Tis+ T1和T2 +T3 +T4期患者分别为44例和15例;用实时荧光定量RT-PCR检测其RON mRNA相对表达量,以GAPDH mRNA为内标物,用RONmRNA/GAPDH mRNA比值表示RON mRNA相对表达量;用RT-PCR检测RON mRNA选择性剪切形成的变异体;用测序检测PCR产物中可能存在的变异体,并分析变异体在不同组织间及TCCB中不同病理分级及临床分期间阳性表达率的差异。结果RON mRNA在TCCB、IPB、PUNLMP及正常膀胱黏膜组织中均见阳性表达,其RON mRNA/GAPDH mRNA比值分别为4.9×10-3(1.8×10-3 ～1.0× 10-2)、3.8×10-3（2.4×10-3～1.7×10-2）、4.9×10-3（1.7×10-3～1.1 ×10-2）、1.0×10-3(4.5×10-4 ～2.8×10-3),且不同组织间的表达差异均有统计学意义(x2K-W= 17.278,P＜0.05);RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3.7×10-3(1.3×10-3 ～7.5×10-3)、4.9×10-3（1.9X10-3～1.1 ×10-2）、8.9×10-3(2.7×10-3～8.0×10-2),且差异有统计学意义(x2K-W=7.341,P＜0.05);RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB临床Tis+ T1、T2 +T3 +T4期分别为3.5×10-3（1.2×10-3 ～7.7×10-3）、9.7× 10-3（2.9×10-3～5.3 ×10-2）,差异也有统计学意义（Z= -2.306,P＜0.05）。但正常膀胱黏膜组未发现RON mRNA变异体,而在膀胱肿瘤组织中外显子11剪切缺失(E11△)的阳性表达率为70％( 55/79)。在TCCB、IPB、PUNLMP中E11△阳性表达率分别为71％ (45/63)、57％ (4/7)、67％ (6/9),而不同病理组织中的E11△阳性表达率差异无统计学意义(x2=0.620,P＞0.05);在不同TCCB病理分级和临床分期中其阳性率差异亦无统计学意义（Z值分别为0.221、0.538,P均＞0.05）。发现1种正常黏膜组织中没有的新变异体,即RON基因外显子的3 476～3 539 bp剪切缺失形成的变异体(E3 476 ～3 539△)。膀胱肿瘤组织中E3 476～3 539△的阳性表达率为56％ (44/79),在TCCB、IPB、PUNLMP中E 3 476 ～3 539△的阳性表达率分别为57％( 36/63)、43％ (3/7)、56％ (5/9),但各病理组织间的阳性率差异无统计学意义(x2=0.517,P＞0.05);在TCCB不同病理分级和临床分期中其阳性率分别为40％ (12/30)、67％ (10/15)、78％ (14/18)、48％(21/44)、80％ (12/15),差异有统计学意义（Z值分别为7.285、5.041,P均＜0.05）。结论 RONmRNA的表达与TCCB病理分级及临床分期相关,RON可能在TCCB发生发展的过程中发挥重要作用;在正常膀胱黏膜中未见RON mRNA剪切形成的变异体,而在膀胱肿瘤组织中都有不同程度的表达;E 3 476～3 539△的表达与TCCB病理分级及临床分期相关,RON mRNA变异体可能参与了膀胱肿瘤的发生。     

储存式自体输血在Rh(D)阴性血型孕妇中的应用与评价

目的探讨储存式自体输血在Rh(D)阴性孕妇中的应用。方法对温州医学院附属第一医院2009年1月至7月17例符合储存式自体输血的Rh(D)阴性孕妇在预产期前7～10d实施储存式自体输血的血液采集,采血前均严格履行知情告知制度,并让患者鉴署知情同意书,由输血科负责采血200mL置4℃贮血冰箱内保存备用。并测定孕妇采血前后血常规及胎心音等指标。结果采血前后孕妇的红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞比积(Hct)、血小板(PTL)、白细胞(WBC)值及胎心音改变比较差异无统计学意义,17例产妇献自体储存血,均无发生采血不良反应,出生的新生儿Apgar评分都在8～10分。结论储存式自体输血能解决Rh(D)阴性血稀缺问题,使剖宫产或产后大出血产妇能尽快得到输血,且对孕妇及胎儿无明显不良影响,值得临床推广应用。     

尿液中PCA3mRNA和融合基因TMPRSS2：ERGmRNA的检测在前列腺癌早期临床诊断中的应用

目的研究前列腺按摩后尿液中PCA3mRNA联合融合基因TMPRSS2：ERG亚型T1E4mRNA的定量检测在早期前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法收集前列腺癌（PCa）患者53例和前列腺增生（BPH）患者37例,收集前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,用实时荧光定量RT—PCR的方法检测PSAmRNA、PCA3mRNA和T1E4mRNA的含量,以PSAmRNA来校正尿液中的前列腺癌细胞。以PCA3mRNA／PSAmRNA表示PCA3mRNA的含量,以T1E4mRNA／PSAmRNA表示融合基因T1E4mRNA的含量。用ROC曲线对T1E4mRNA及PCA3mRNA诊断PCa的性能进行分析。结果尿T1E4mR．NA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．802（95％CI：0．709～0．895）,以0．007为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度分别为56．6％和94．6％。尿PCA3mRNA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．646（95％CI：0．533—0．758）,以0．001为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度为47．2％和73．0％。PCa组PCA3mRNA（P=0．009）及T1E4mRNA（P=0．000）的含量均高于BPH组,T1E4mRNA联合PCA3mRNA定量检测的敏感度为81．1％,比单独应用PCA3mRNA和T1E4mRNA检测的敏感度分别提高了33．9％和24．5％。结论前列腺癌按摩后尿沉渣中可以检测到TMPRSS2：ERG亚型T1E4mRNA,联合PCA3mRNA和T1E4mRNA两个指标定量检测,可以显著提高检出前列腺癌的敏感度。此联合检测方法可以用于早期的前列腺癌诊断。     

大龄女,缘何走不出“女大难嫁”的心理误区

大龄女,指的是早已过了国家法定婚龄而仍未成家的人。今天谈婚论嫁,早已走出了封闭的环境,在电视上公开谈情说爱也已不是什么稀罕事。然而,在我们身边,孑然一身,独来独往的大龄女却日趋递增。女大     

偷心计划之做个爱情智者

1无字情书那种暗示的方法曾经风行于80年代,可我当时偏偏不懂。一天,我收到了一封莫名其妙的来信,邮票倒着贴在上面。我认出了信封上他的字迹,可是信封里却是空空如也。也许是因为未收到回音,他终于忍不住来找我,捧来一摞厚厚的白纸,“这回你就不必借口没有稿纸而不回信了”。     

烧伤患者静脉留置针检出金黄色葡萄球菌及耐药性分析

目的分析烧伤患者静脉留置针金黄色葡萄球菌检出率及耐药谱,为临床治疗及合理使用抗菌药物提供参考。方法收集175例烧伤患者静脉留置针标本,经培养分离后,采用法国生物梅里埃公司的细菌鉴定、药敏条进行鉴定及药敏分析。结果烧伤患者静脉留置针致病菌以金黄色葡萄球菌为主,占60.3%;所有菌株均为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),对青霉素、苯唑西林、庆大霉素的耐药率为100.0%,对克林霉素、四环素、利福平等的耐药率均>50.0%,对米诺环素、替考拉宁耐药率为2.3%,未发现万古霉素、夫西地酸、喹奴普汀/达福普汀耐药株。结论金黄色葡萄球菌为烧伤患者静脉留置针感染的主要致病菌,且耐药性严重,及时对烧伤患者静脉留置针进行细菌培养及药敏检测,对于临床合理应用抗菌药物、减少耐药菌株产生有重要意义。     

前列腺癌患者抑癌基因PTEN上游序列的突变分析

目的查找前列腺癌患者抑癌基因(phosphataseand tensin homologue deleted chromatosome,PTEN)上游序列是否存在改变,以及该改变与前列腺癌发生发展是否存在关联。方法提取50例前列腺癌(prostate cancer,PCa)及30例正常对照组的外周血DNA,扩增PTEN外显子1上游1200bp左右DNA片段,纯化目的产物后进行测序,观察PCa患者与对照组的差异。结果 PCa患者在PTEN基因外显子1上游-510bp处存在G/A变异,形成3种基因型GG、GA、AA。前列腺癌与对照组相比,3种基因型频率存在差异(χ2=7.78,P<0.05)。结论作为抑癌基因的上游序列,基因的突变有可能导致了PTEN基因转录能力的下降,进而降低了抑癌基因对前列腺癌变进展的抑制作用。     

参加肌酸激酶参考方法国际室间比对计划结果分析

目的 对2006-2008年3年来参加IFCC组织的参考实验室RELA的CK的测定结果 进行比较和分析,为我国CK参考方法 的建立和应用提供借鉴.方法 按照IFCC公布的酶学活性测定(37℃)参考方法 的标准操作程序(SOP)测定CK国际样本,不精密度评价按美国CLSI的EP5-A2进行,准确度评价采用国际有证参考物质(ERM).结果 2006年测定结果 ,样本A CK值为(9.896±0.112)μkat/L,样本B为(4.953±0.120)μkat/L;2007年测定结果 ,样本A为(2.684 ±0.054)μkat/L,样本B为(8.798 ±0.101)μkat/L;2008年测定结果 ,样本A为(10.523±0.149)μkat/L,样本B为(10.551±0.141)μkat/L.2006-2008年CK参考方法 的不精密度分别为0.92%、0.86%、0.88%,均＜1%,ERM测定均值在"靶值±不确定度[(1.68±0.07)μkat/L]"范围内,初步验证了参考方法 的不精密度和准确度.结论 连续3年的CK国际样本测定结果 均在IFCC公布的置信区间(limit of equivalence)±5%范围内,CK的IFCC参考方法 已经建立并且日趋成熟.