逆转录病毒载体介导shRNA对人胚胎肾细胞中p53基因的沉默作用

目的：检测逆转录病毒载体介导的小发夹环RNA（small hairpin RNA,shRNA）对人胚胎肾细胞（HEK293）中p53基因的干扰作用。方法：将人H₁启动子由XholⅠ和EcoRⅠ酶切位点插入CMV启动子上游,人CD₄基因替代匀霉素抗性基因,作为检测标志。针对人野生型p53基因设计的shRNA被连接在H₁启动子的下游,构建含有shRNA的逆转录病毒载体LTRH₁-p53,即RNAi表达载体;利用流式细胞术检测逆转录病毒感染HEK293细胞72 h后细胞内P53蛋白水平的变化。结果：成功构建LTRH₁-p53载体,该载体感染HEK293细胞后72 h,与感染空病毒载体LTRH₁组相比,P53蛋白表达降至空病毒载体LTRH₁组的69％（P<0.01）。结论：LTRH₁-p53表达载体成功使p53基因沉默,shRNA表达载体的使用为基因功能研究提供有力工具。     

干细胞培养物表面滴注对豚鼠皮肤重度缺损的修复作用

背景：干细胞是动物和人的一种特殊功能的细胞，存在于多种组织之中，其大部分分化成各种特定组织器官，一部分保持干细胞状态，以备组织修复之用。有研究将间充质干细胞移植于烧伤创面，用以诱导皮肤干细胞的增生和活化，以达到治疗烧伤的目的。目的：观察采用体外培养干细胞培养液滴注于豚鼠皮肤重度缺损局部对创面愈合时间及愈合情况的影响。设计：随机分组，空白对照实验。单位：吉林大学公共卫生学院毒理学教研室。材料：成年健康豚鼠14只，体质量300～350g，雌雄不限。方法：实验于2003-03／09在吉林大学公共卫生学院毒理学教研室实验室完成。取10豚鼠，经颈部放血处死，提取骨髓，经过培养制成单细胞悬液备用。将14只豚鼠制成两侧重度皮肤损伤模型。随机选取10只豚鼠，其中一侧滴加干细胞培养物（干细胞组），而另一侧滴加培养液（培养液组）；剩余4只动物不做任何治疗，作为空白对照组。3d后，每两天用透明有机玻璃置创面上方，描画其形状，观察创面情况，并将其图形复制到透明玻璃纸上，在直角坐标纸上精确查出创面面积，计算创面愈合速度。主要观察指标：大体观察各组豚鼠创面愈合情况及平均愈合时间和速度。结果：14只豚鼠均进入结果分析。①各组豚鼠创面愈合情况：3d时，干细胞组创面干燥，无明显渗出，在创面底部有一层膜状物质，与纱布粘贴比较牢固，敷料不易脱离；培养液组创面情况与干细胞组基本一致，但无膜状物质形成，敷料易脱离；空白对照组动物创面炎症明显。②各组豚鼠创面愈合时间：干细胞组明显少于培养液组和空白对照组[（12．45&;#177;2．18）d比（26．29&;#177;1．38）d和〉30d，P〈0．05]。③各组豚鼠创面愈合速度：干细胞组明显快于培养液组和空白对照组[（40．42&;#177;2．14）mm^2／d比（15．53&;#177;5．22）mm^2／d和（10．27&;#177;4．57）mm^2／d．P〈0．051。结论：利用同种异体动物干细胞培养物进行皮肤表面滴注修复其损伤创面，干细胞能够在创面上生长，并向皮肤细胞转化，促进创面皮肤修复，用于皮肤重度缺损治疗是可行的。     

胞二磷胆碱对帕金森病模型中多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨胞二磷胆碱（citicoline,CC）对6-OHDA诱导的帕金森病体外细胞模型的神经保护作用机制.方法 MTT法检测细胞活力;采用Fluo3/AM通过流式细胞仪检测细胞内[Ca^2＋]i,采用罗丹明123检测线粒体膜电位（△ψm）.结果 2、1和0.1 mmol/L浓度的胞二磷胆碱,细胞活力与对照组比较明显增高（P＜0.01）,0.1 mmol/L组（P＜0.05）;1、0.1、0.01和0.001 mmol/L胞二磷胆碱能对抗由6-OHDA引起的多巴胺能神经元的损害,细胞活力高于6-OHDA组（P＜0.01）;胞二磷胆碱能对抗6-OHDA造成的细胞内[Ca^2＋]i增高及△ψm的下降（P＜0.01）;1 mmol/L胞二磷胆碱＋6-OHDA组△ψm高于对照组（P＜0.01）.结论 胞二磷胆碱通过保护神经元细胞膜,降低细胞内[Ca^2＋]i,提高线粒体膜电位,增强细胞活力,发挥其对多巴胺能神经元的保护作用.     

Taurolidine联合X射线对小鼠恶性黑色素瘤细胞周期进程的影响

目的:观察taurolidine联合X射线照射对小鼠恶性黑色素瘤(B16-4A5和B16-F10)细胞周期进程的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的发生机制.方法:选择B16-4A5和B16-F10细胞系按给药浓度随机分为4组,taurolidine剂量分别为0、25、50和100 μmol·L-1,同时进行1、2和4 Gy...     

辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的:研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用.方法:体外通过脂质体转染SMMC7721细胞.转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10 Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为...     

手术完整切除的浸润型胸腺瘤术后三种放疗技术的剂量学比较

目的探讨手术完整切除的浸润型胸腺瘤术后预防放疗中分别采取三维适形放疗(3D-CRT)、调强放疗(IMRT)与快速旋转调强放疗(RapidArc)技术的剂量学差异。方法选取2011年5月至2014年3月收治的15例手术完整切除的浸润型胸腺瘤辅助放疗的患者,分别针对术后瘤床应用eclipse10.0计划系统制定三维适形、调强及旋转调强计划,均给予50 Gy/2 Gy处方剂量,在保证计划满足临床要求的前提下,比较三种计划方案的靶区剂量分布及危及器官受照剂量。结果 RapidArc及IMRT计划靶区适形度及靶区均匀性显著高于3D-CRT(P<0.01),RapidArc计划靶区适形度及均匀性稍高于IMRT(P<0.05);其肺V5明显高于3D-CRT(P<0.01),而肺V10及肺V20低于3D-CRT(P<0.05),RapidArc计划肺V5高于IMRT(P<0.05);前两种计划心脏V30及V40明显低于3D-CRT(P<0.05),RapidArc计划心脏V30低于IMRT(P<0.05);前两种计划食管及脊髓的平均受照剂量低于3D-CRT(P<0.05);其余数据两两比较无统计学差异。结论对于完整切除的浸润型胸腺瘤的术后辅助放疗,无论是IMRT技术还是RapidArc技术,其靶区剂量分布均优于3D-CRT技术,同时可以减低大部分危及器官的受照射剂量,值得临床推广。RapidArc技术和IMRT技术相比,后者在肺组织的保护上更具优势,前者在靶区适形性及心脏的保护上更具优势。     

小鼠分泌型γ干扰素原核表达载体pFLAG—IFN-γ的构建

目的构建小鼠分泌型γ干扰素（IFN-γ）原核表达载体pFLAG-IFN-γ。方法利用分子生物学方法，从peD—NA3．1-Egr1-IFN-γ质粒上将IFN-γ切下，然后连接到原核表达载体pFLAG-shift12^TM上，构建成pFLAG-IFN-γ表达载体，进行PCR、酶切鉴定。结果经鉴定，所构建的质粒pFLAG-IFN-γ的鉴定结果与预期的一致。结论成功地构建了带有分泌信号的原核表达载体pFLAG-IFN-γ。     

药食同源谷物粉治疗糖尿病性周围神经病变的效果

目的观察药食同源谷物粉治疗糖尿病性周围神经病变(DPN)患者的效果。方法筛选吉林大学第二医院收治的66例DPN患者,年龄60~72岁,其中男34例,女32例,已排除其他疾病导致的周围神经病变。随机分为对照组和观察组,每组33例,两组病人均给予糖尿病饮食、运动、降糖药物和健康教育等常规治疗,对照组口服甲钴胺片,每次0.5 mg,每日3次;观察组服用药食同源谷物粉,每日2次,4 w 1个疗程。2个疗程后对比两组的临床疗效。结果两组患者临床症状及体征均有改善,观察组和对照组总有效率分别为87.9%和54.6%,观察组有效率明显优于对照组(P<0.05)。结论药食同源谷物粉能有效改善DPN患者的临床症状及体征,提高神经传导速度。     

抗抑郁药万拉法新和氟西汀对大鼠神经的保护作用

目的: 探讨抗抑郁药万拉法新和氟西汀对谷氨酸损伤的海马神经元的神经保护作用。方法: 采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制谷氨酸损伤模型以模拟抑郁症时的病理改变;实验分为正常对照组、谷氨酸损伤组、谷氨酸损伤+万拉法新及+氟西汀各给药组(50、100、200及　500 μmol•L^-1或10、100及　500 μmol•L^-1);应用MTT法分别检测万拉法新和氟西汀对谷氨酸损伤大鼠海马神经元存活率的影响,并用分光光度法测定乳酸脱氢酶（LDH）的释放情况以及SOD活性的改变。结果: 谷氨酸使大鼠海马神经元存活率降至正常的50% (P<0.05);谷氨酸损伤+万拉法新组(100和200 μmol•L^-1)神经元存活率均高于谷氨酸损伤组 (P<0.05或P<0.01),而谷氨酸损伤+氟西汀各组神经元存活率无升高。谷氨酸损伤组LDH的释放急剧升高,约是正常对照组的7.4倍;两药物均能不同程度地减少LDH 的释放。谷氨酸损伤组与正常对照组比较,SOD活性明显下降（P<0.01）;与谷氨酸损伤组比较,万拉法新组(10和100 μmol•L^-1)SOD活性均明显升高（P<0.001）,谷氨酸损伤+氟西汀组(100和500 μmol•L^-1)SOD活性均降低（P<0.05）。结论: 抗抑郁药万拉法新和氟西汀都具有一定的神经保护作用, 且万拉法新神经保护作用强于氟西汀。     

含金属硫蛋白蛋奶粉对H-22小鼠肝癌的预防作用

目的：观察含金属硫蛋白（MT）蛋奶粉对BALB/c小鼠H-22肝癌的预防作用。方法：雌性BALB/c纯系小鼠70只随机分为正常对照组(10只)、荷瘤鼠对照组(20只)、含MT蛋奶粉预防肿瘤低剂量及高剂量组(各20只)。将MT低和高剂量蛋奶粉给小鼠灌胃2周后,皮下接种H-22细胞,建立小鼠移植肿瘤模型,观察MT蛋奶粉对肿瘤出现时间及肿瘤大小和生长的影响;观察1个月后处死小鼠,MTT法检测脾脏淋巴细胞转化功能,流式细胞术检测脾脏CD4⁺、CD8⁺和CD25⁺ T细胞百分率以及细胞周期进程和凋亡的变化,³H-TdR掺入法检测CTL和NK细胞杀伤活性。结果：与荷瘤对照组相比,含MT蛋奶粉组小鼠其肿瘤生长速率显著降低（P<0.05）,淋巴细胞增殖率显著增加 （P<0.01）,脾脏CD4⁺和CD8⁺ T细胞百分率及CD4⁺/CD8⁺比值显著升高（P<0.05或P<0.01）, CD25⁺ T细胞百分率和淋巴细胞凋亡百分率均显著降低（P<0.05或P<0.01）, NK细胞毒性显著提高 （P<0.05或P<0.01）,CTL细胞毒性亦显著增高（P<0.01）。结论：含MT蛋奶粉可明显增强荷瘤小鼠的免疫功能,对小鼠移植性肿瘤的生长起到一定程度的抑制作用。