丙酮酸乙酯对小鼠缺血再灌注肾脏细胞凋亡的影响

目的研究丙酮酸乙酯（EP）对小鼠缺血再灌注（I／R）肾脏组织凋亡相关基因表达及细胞凋亡的影响。方法8周龄雄性BABL／c小鼠52只,随机分为假手术组（n=10）、I／R组（建立I／R模型,n=10）、EP处理组（n=32）;EP处理组再分为EP预处理组（建模前30min给药）和I／R后4、6、12hEP处理组（分别于建模后4、6、12h给药）,每组8只动物。TUNEL染色分析和比较各组凋亡细胞数量的变化;Real—timePCR检测肾脏组织凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspas-3mRNA表达。结果TUNEL染色分析显示,与假手术组比较,I／R组凋亡细胞数量明显增多（P〈0．05）;EP预处理组凋亡细胞数量明显少于I／R组（P〈0．05）。Real-timePCR检测结果显示,与假手术组相比,I／R组Bax和Caspase-3mRNA表达显著升高,Bcl-2mRNA表达明显降低（P〈0．05）;与I／R组比较,EP预处理组和I／R后6hEP处理组的Bcl-2mRNA表达显著升高（P〈0．05）,EP预处理组和I／R后各时间点EP处理组的Bax和Caspase-3mRNA表达明显降低（P〈0．05）。结论EP能有效抑制BABL／c小鼠肾脏I／R过程中的细胞凋亡,可能与其调控肾脏组织凋亡相关基因的表达有关。     

Klotho在急性缺血再灌注性肾损伤中的变化及其与凋亡的关系

目的 观察Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,探讨其在肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 10只BALB/c小鼠随机分为肾脏缺血再灌注组（I/R组, n=5）和假手术组（Sham组, n=5）,采用双侧肾蒂夹闭术建立肾缺血再灌注模型,于造模后24 h留取小鼠的血清及肾组织。应用酶法分别测定血清尿素氮和肌酐,ELISA法检测血清Klotho蛋白水平,TUNEL染色法检测肾脏细胞凋亡水平,Real-Time PCR及Western blotting技术分别检测肾组织Klotho、Bax、Bcl-2和Caspase-3的基因及蛋白表达,应用Pearson直线相关法分析急性肾损伤时小鼠全身及局部的Klotho水平和肾脏凋亡的关系。结果 与Sham组相比,I/R组小鼠术后24 h肾小管上皮细胞明显变性、坏死,肾脏凋亡细胞明显增加,肾组织cleaved Caspase-3蛋白水平、Bax/Bcl-2 mRNA及蛋白表达比值均显著升高。I/R组小鼠血清Klotho蛋白水平较Sham组小鼠显著降低[（669.89±136.51） pg/mL vs. （2 107.92±549.22） pg/mL,P〈0.01],肾组织Klotho mRNA及蛋白表达分别较Sham组下调约9/10 （P〈0.001）及1/5 （P〈0.05）。相关性分析显示肾组织bax/bcl-2 mRNA比值与血清Klotho蛋白及肾组织klotho mRNA均呈显著负相关（r=-0.833,P〈0.01;r=-0.916,P〈0.001）,肾组织Bax/Bcl-2蛋白比值和肾组织Klotho蛋白也呈显著负相关（r=-0.637,P〈0.05）。结论 缺血再灌注急性肾损伤后小鼠全身及肾组织局部Klotho表达均显著下调,Klotho水平的下降可能与凋亡诱导的肾损害密切相关。     

蛋白尿发生机制的研究进展

肾小球的滤过膜是肾小球选择性滤过功能的结构基础,在保持体内的水、电解质和酸碱平衡中发挥重要的作用.滤过膜从内向外由肾小球内皮细胞(EC)、基膜(GBM)和脏层上皮细胞(足细胞)三层结构组成.这三层物质构成肾小球滤过的机械和电荷屏障,使相对分子质量较大或相对分子质量虽较小但带有负电荷的物质(如白蛋白)不能滤出至肾小囊,使滤过膜具有分子和电荷的选择性.一旦肾小球滤过膜结构受损,蛋白等大分子物质将透过滤过膜,形成蛋白尿.滤过膜结构的损伤破坏是各种以蛋白尿为主要表现的肾小球疾病的共同机制.因此,研究滤过膜的生理功能与损伤机制,对更深地了解肾脏疾病的发生、发展及判断预后尤为重要.滤过膜的三层物质是共同发挥作用的,任何一部分损伤都会导致滤过屏障的完整性受到破坏,产生蛋白尿.本文将探讨足细胞和内皮细胞在蛋白尿形成中的作用.     

腹透液中人腹膜间皮细胞的原代培养

人腹膜间皮细胞 (ＨＰＭＣ)是腹膜表层主要的细胞群体 ,间皮细胞在腹膜透析 (ＰＤ)时对腹膜具有重要的保护功能。长期ＰＤ的患者 ,其腹膜间皮层微绒毛减少、脱落乃至间皮层消失[1] ,最终促进了腹膜纤维化的进展及腹膜失超滤的发生。建立间皮细胞的体外培养体系 ,对于开展ＰＤ领域的基础及临床研究 ,具有非常重要的意义。基于以上的认识 ,本研究建立ＰＤ流出液中原代培养ＨＰＭＣ的培养方法 ,并设法应用扫描电镜动态观察来自不同透龄培养的间皮细胞其形态学上的差异 ,以利用这种无创性的体外培养方法间接地判断ＰＤ患者体内腹膜间皮层的实际…     

联合应用标志物在心脏手术后急性肾损伤的早期诊断

目的 探讨血清胱抑素C（CyC）、尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、白细胞介素18（IL-18）、视黄醇结合蛋白（RBP）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）在成人心脏手术后急性肾损伤（AKI）早期预测和诊断中的价值及其联合应用的价值。 方法 前瞻性收集心脏手术患者手术前后不同时相的血尿标本,选取其中AKI患者14例,分别测定血清CyC、Scr及尿NGAL、IL-18、RBP、NAG、Cr（Ucr）水平;并选择临床资料相匹配的非AKI患者15例作为对照。观察两组患者围手术期上述5种生物学标志与Scr的动态变化。用受试者工作特征（ROC）曲线及曲线下面积（AUC）评价标志物的单独或联合应用时诊断AKI的精确性。AKI定义为Scr水平较基础值增加≥50%。 结果 29例患者平均年龄（62.9±13.7）岁,基础Scr （73.2±11.9） μmol/L。除AKI组患者术中升主动脉阻断时间较非AKI组较长外[（60.63±13.92） min比（43.00±9.20） min,P=0.047],两组其余临床指标差异均无统计学意义。AKI组患者的血尿生物学标志分别在术后早期的不同时间点显著升高。术后10 h血CyC取1.31 mg/L作为诊断截点时,其在AKI诊断中的敏感性（ST）和特异性（SP）分别为0.71和0.92,AUC=0.83（0.67~1.00）;术后0 h 尿NGAL取49.15 μg/g Ucr时,ST=0.84,SP=0.80,AUC=0.85（0.70~1.00）。术后2 h尿IL-18取285.65 ng/g Ucr时,ST=0.85,SP=0.73,AUC=0.81（0.64~0.97）。术后0 h尿RBP取2934.65 μg/g Ucr时,ST=0.75,SP=0.67,AUC=0.77（0.60~0.95）。术后4 h尿NAG取37.05 U/mg Ucr时,ST=0.86,SP=0.67,AUC=0.72（0.53~0.92）。利用Logistic回归方程,联合以上5种标志物的最佳诊断时间点,得到AUC为0.98（0.93~1.02）（P<0.01）。 结论 心脏手术后AKI患者血尿生物学标志在术后不同时间点显著升高,诊断AKI的时间早于Scr,具有较高的准确性,可作为成人心脏手术后AKI的早期诊断标志物。尿NGAL的ROC曲线下面积最大,尿RBP也显示了较好的诊断价值。联合应用生物学标志可更好地预测临床上AKI的发生。     

急性肾损伤是影响心脏手术后患者长期生存的危险因素

目的 了解心脏术后急性肾损害（AKI）患者的长期预后情况及探讨有关危险因素。 方法 选择2004年1月1日至2007年6月30日本院所有行心脏手术,且存活出院的患者,门诊或电话随访患者的生存情况至2010年2月28日。回顾性收集患者术前、术中、术后的临床及实验室资料,观察患者术后长期生存率及肾功能情况。应用Cox回归方程分析与患者长期生存相关的危险因素。 结果 共941例心脏手术患者,术后发生过AKI患者275例（29.2%）,非AKI患者666例（70.8%）。在总共46.5个月（34.5,59.2）的随访过程中,术后发生过AKI的患者生存率显著低于非AKI患者（67.8%比85.6%,P < 0.01）,且随着AKI严重程度的增加,生存率逐渐下降（AKIN 1、2和3期患者的生存率分别为70.7%、62.3%和58.6%, P < 0.01）。AKI组中90.5%的患者出院时肾功能完全恢复至基线水平,但随访期间生存率仍显著低于非AKI组患者（69.6%比85.6%,P < 0.01）。Cox回归分析显示年龄增加（年龄每增加20 岁,HR=2.238）、术前贫血（HR=1.625）、手术时间延长（每增加1 h,HR=1.153）、AKI的发生及分期增加（每增加1期,HR=1.473）是患者长期预后不良的独立危险因素。随访结束时,AKI组患者的Scr显著高于非AKI组（107.6 μmol/L比83.0 μmol/L,P = 0.014）;AKI组中34.0%患者进入了CKD 3~5期。出院后5年34.8%的AKI患者发生Scr翻倍。 结论 心脏手术后AKI是影响患者长期生存的独立危险因素,即使AKI后Scr值恢复到基线水平,长期的患者预后和肾脏预后仍然较差。     

维持性血液透析患者心脏结构功能的危险因素分析

目的探讨影响维持性血液透析（MHD）患者心脏结构功能的危险因素。方法选择MHD患者153例,超声心动图测定心脏各项指标,并计算左心室心肌重量指数（LVMI）。生存函数乘积限（Kaplan-Meier）分析观察LVMI对患者预后的影响,分析影响LVMI的危险因素关系。结果153例MHD患者中,84例（占55．2％）患者存在左心室肥厚。多元回归结果显示超滤量（UF）和血红蛋白是影响左心室肥厚的独立危险因素。每周3次透析与每周2次透析的患者左心室肥厚的发生率分别为59．3％和52．1％。Kaplan-Meier生存分析显示左心室肥厚患者的5、10和15年生存率分为78．3％、54．3％和36．2％。结论MHD患者存在较高的左心室肥厚发生率,UF、血红蛋白与左心室肥厚相关,预防患者左心室肥厚可能有助于提高患者生存率。     

腹膜转运特性明显影响艾考糊精腹透液的超滤量

目的 观察不同腹膜转运特性的患者使用7.5%艾考糊精腹透液长时间留腹后的超滤量。 方法 采用前瞻性、多中心、随机、双盲和平行对照临床研究的亚组分析。连续非卧床腹膜透析（CAPD）患者根据腹透液肌酐与血肌酐比值（D/Pcr）和Twardoski的评判标准,分为高转运、高平均转运、低平均转运和低转运4组。患者分别使用7.5%艾考糊精透析液或2.5%葡萄糖 Dianeal?誖 PD-2、PD-4透析液,疗程4周。比较各组超滤量。 结果 共201例CAPD患者入选,其中艾考糊精组98例,葡萄糖组103例;男96例,女105例;年龄（56.1±13.7）岁（18～81岁）。198例进行了腹膜平衡试验,其中高转运患者24例（12.1%）,高平均转运72例（36.2%）,低平均转运81例（40.7%）,低转运21例（11.0%）。治疗第4周,高转运、高平均转运和低平均转运患者中,艾考糊精组超滤量显著升高,无论与基线值还是与葡萄糖组比较,差异都有统计学意义;而低转运患者中,艾考糊精组超滤量高于葡萄糖组,但差异无统计学意义。相关分析显示,艾考糊精腹透液产生的超滤量与D/Pcr呈正相关（R2 = 0.1681,P < 0.01）,而葡萄糖透析液产生的超滤量与D/Pcr呈负相关（R2 = 0.0949,P < 0.01）。 结论 7.5%艾考糊精腹透液可显著改善CAPD患者的超滤量和腹膜肌酐清除率,尤其在腹膜高转运、高平均转运和低平均转运患者,其作用显著优于葡萄糖腹透液。     

进展性IgA肾病患者血清IL-18水平及来氟米特对其的影响

目的：观察进展性IgAN患者的血清白细胞介素-18（IL-18）水平,及来氟米特（LEF）治疗前后对其的影响。方法：将进展性IgAN患者随机分为来氟米特（LEF）组和激素组,使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测其治疗前后的血清IL-18水平。结果：共36例患者完成为期12个月的随访,来氟米特联合激素治疗后可使蛋白尿水平显著降低,肾功能维持稳定。患者治疗前血清IL-18水平较对照组显著升高[（360.3±25.2）vs（51.2±8.9）ng/L,P〈0.01],治疗显效者其水平显著降低。Logistic回归显示治疗前血清IL-18水平是预测进展性IgAN患者疗效的独立危险因素（β=-0.582,P=0.001）。结论：来氟米特可作为进展性IgA肾病的有效治疗方案,治疗前IL-18可能成为IgAN发病预测、疗效预判的一个无创指标。     

EPA对KKAy/Ta小鼠代谢异常和肾组织病变的影响

目的 研究二十碳五烯酸(EPA)对早期2型糖尿病肾病模型小鼠(KKAy/Ta小鼠)代谢异常及肾组织病变的影响.方法 16只7周龄KKAy/Ta小鼠随机分为两组.12周龄时,EPA组(n=8)给予EPA 1 g·kg-1·d-1腹腔注射×8周,对照组则同步给予生理盐水注射;20周龄时,采用气相色谱法对两组小鼠血清脂肪酸进行检测和成分分析.分别于12、16和20周龄时检测小鼠表型变化,治疗结束后取肾组织进行组织病理学检查.结果 20周龄时,EPA组和对照组血清EPA水平分别为(125.8±15.5)μg/mL和(69.2±7.8)μg/mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).16和20周龄时,EPA组尿白蛋白/肌酐比值(ACR)均明显低于对照组,分别为(161.3±34.4)mg/g vs (587.4±31.6)mg/g和(188.3±34.6)mg/g vs (610.4±79.8) mg/g(P<0.01);20周龄时,EPA组血清甘油三酯水平及腹腔内葡萄糖耐受试验后血糖和血清胰岛素水平均显著低于对照组(P<0.05).组织病理学检查显示,EPA组小鼠肾小球细胞外基质积聚和小管间质纤维化的程度均轻于对照组.结论 EPA对早期糖尿病肾病KKAy/Ta小鼠肾组织病变具有改善作用,其机制可能与EPA纠正代谢异常有关.