Klotho蛋白在肾脏疾病中研究进展

肾脏疾病已成为威胁人类健康的公共卫生问题之一,其发病机制尚不非常清楚,治疗手段有限.Klotho蛋白是体内Klotho基因编码的一种单向跨膜蛋白,主要在肾小管上皮细胞中表达,可在血液和尿液中检测到.Klotho蛋白具有多种生物学效应,包括调节矿物质代谢、抗凋亡和抗衰老等[1].近年的研究提示Klotho蛋白水平降低可能在急性肾损伤（acute kidney injury, AKI）的发生发展中起着重要作用,并有可能作为AKI诊断和判断预后的一个新的标志物[1].同时Klotho蛋白对钙磷代谢的调节作用也为慢性肾脏病（chronic kidney disease, CKD）的治疗提供了新的方向.本文就近年来Klotho蛋白在肾脏疾病发病机制、诊断和治疗等方面的研究现状作一综述.     

医院科研伦理价值观培育平台的构建

科研伦理价值观是指导科研人员科研动机和科研行为的价值意识,对科研诚信起到重要的作用。在三级医院应当根据不同的科研人员群体,搭建不同的科研伦理价值观培育平台,并最终成为一套立体的培育体系,引导科研人员树立正确的科研伦理价值观。     

尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在成人心脏手术后急性肾损伤早期诊断中的价值

目的 探讨尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）在心脏手术后急性肾损伤（AKI）早期预测和诊断中的价值。 方法 前瞻性收集我院心脏手术患者手术前后不同时相的血、尿标本,选取其中14例AKI患者,分别测定尿NGAL和Scr水平;并选择临床资料相匹配的非AKI患者15例作为对照。观察两组患者围手术期尿NGAL和Scr的动态变化,运用接受者操作特性曲线（ROC）评价尿NGAL诊断AKI的精确性。AKI定义为Scr水平较基础值增加≥50%。 结果 Scr诊断AKI的中位时间为入ICU后24 h（10 h,48 h）。AKI患者术后入ICU即刻的尿NGAL水平显著高于术前基础水平并达峰值[20.51（13.42,50.02） μg/L比3.42（1.60,9.92） μg/L,P = 0.006];也显著高于非AKI患者 [2.91（0.72,8.61） μg/L,P = 0.002]。入ICU即刻尿NGAL 的ROC曲线下面积为0.824,95%的可信区间（CI）为0.667~0.980,P = 0.003。当以10.95 μg/L作为诊断截点时,此刻的尿NGAL在AKI诊断中的敏感性和特异性分别为85.7%和80.0%。入ICU即刻的尿NGAL与入ICU 24 h的Scr（r = 0.545,P = 0.002）及eGFR（r = －0.546,P = 0.002)呈正及负相关。 结论 心脏手术后AKI患者术后入ICU即刻的尿NGAL水平显著升高,对诊断AKI具有较高的准确性,其诊断AKI的时间早于Scr。尿NGAL可作为成人心脏术后AKI的早期诊断标志物。     

白细胞介素6对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样转化、钙化的影响

目的 研究白细胞介素6（IL-6）对体外培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）成骨样转化、钙化的作用及可能的信号通路。 方法 组织植块法原代培养HUASMC。培养基加入不同浓度重组人IL-6（rhIL-6）孵育细胞,设空白对照组。茜素红S钙沉积染色及甲氧-酚酞络合酮法检测细胞层钙盐含量。实时定量PCR、荧光定量法以及Western印迹法分别检测骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）、骨形成蛋白2（BMP２）和骨保护素（OPG）基因以及蛋白表达。凝胶迁移滞后实验（EMSA）检测核心结合因子α1亚基（Cbfα1）的结合活力,以及分别应用p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580和蛋白激酶C二氢神经鞘氨醇（DHC）后Cbfα1的结合活力。 结果 rhIL-6 50 μg/L诱导12 d,细胞基质层茜素红S染色阳性。与对照组相比,细胞层钙盐含量在rhIL-6 10 μg/L组刺激9 d[（0.76±0.02） mmol/g蛋白]和12 d[（1.54±0.11） mmol/g蛋白]升高,50 μg/L组刺激6 d[（1.81±0.03） mmol/g蛋白]、9 d[（2.08±0.10） mmol/g蛋白]和12 d[（3.22±0.18） mmol/g蛋白]升高,并呈时间、剂量依赖地增加。rhIL-6 10 μg/L刺激12 h,BMP2 mRNA（3.04±0.07）和蛋白（8.14±0.41）及BAP mRNA（2.51±0.11）和蛋白（3.96±0.54）表达上调;刺激72 h,OPN mRNA（3.14±0.32）和蛋白（2.57±0.43）水平及OPG mRNA（4.06±0.24）和蛋白（3.46±0.34）水平上调。rhIL-6刺激6 h,Cbfα1结合活力增加;DHC能够部分抑制rhIL-6诱导的Cbfα1结合活力增加,SB203580没有明显作用。 结论 IL-6体外能够诱导HUASMC发生钙化和成骨样转分化,这可能是临床观察到IL-6与血管钙化相关的机制之一。IL-6的这一作用可能与细胞内蛋白激酶C通路的活化有关。     

AKI网络定义的急性肾损伤在心脏手术后患者中的发生情况及其危险因素和预后分析

目的 了解心脏手术后急性肾损伤（AKI）的发生情况,危险因素及预后。 方法 回顾性分析2004年1月1日至2007年6月30日期间所有在本院行心脏手术的住院患者的临床资料。采用AKI 网络（AKI Network, AKIN）推荐的AKI定义评估心脏手术后AKI的患病率及住院病死率,对术前、术中、术后与AKI发生可能相关的危险因素进行分析。 结果 总共1056例患者中,术后发生AKI者328例,患病率为31.06%。AKI患者的住院病死率显著高于非AKI患者（11.59% 比 0.69%,P < 0.01）。多因素Logistic逐步回归分析显示,高龄（每增加10岁,发生AKI的风险上升1.40倍）、术前高尿酸血症（OR = 1.97）、术前左心功能不全（OR = 2.53）、冠脉旁路移植术（CABG）联合瓣膜手术（OR = 2.79）、手术时间延长（每增加1 h,发生AKI的风险上升1.43倍）、术后循环血容量不足（OR = 11.08）是心脏手术后AKI发生的独立危险因素。 结论 AKI是心脏手术后常见的并发症,AKI患者预后较差。高龄、术前高尿酸血症、术前左心功能不全、CABG联合瓣膜手术、手术时间延长、术后循环血容量不足是心脏手术后AKI发生的独立危险因素。     

Klotho在急性缺血再灌注性肾损伤中的变化及其与凋亡的关系

目的 观察Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,探讨其在肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 10只BALB/c小鼠随机分为肾脏缺血再灌注组（I/R组, n=5）和假手术组（Sham组, n=5）,采用双侧肾蒂夹闭术建立肾缺血再灌注模型,于造模后24 h留取小鼠的血清及肾组织。应用酶法分别测定血清尿素氮和肌酐,ELISA法检测血清Klotho蛋白水平,TUNEL染色法检测肾脏细胞凋亡水平,Real-Time PCR及Western blotting技术分别检测肾组织Klotho、Bax、Bcl-2和Caspase-3的基因及蛋白表达,应用Pearson直线相关法分析急性肾损伤时小鼠全身及局部的Klotho水平和肾脏凋亡的关系。结果 与Sham组相比,I/R组小鼠术后24 h肾小管上皮细胞明显变性、坏死,肾脏凋亡细胞明显增加,肾组织cleaved Caspase-3蛋白水平、Bax/Bcl-2 mRNA及蛋白表达比值均显著升高。I/R组小鼠血清Klotho蛋白水平较Sham组小鼠显著降低[（669.89±136.51） pg/mL vs. （2 107.92±549.22） pg/mL,P〈0.01],肾组织Klotho mRNA及蛋白表达分别较Sham组下调约9/10 （P〈0.001）及1/5 （P〈0.05）。相关性分析显示肾组织bax/bcl-2 mRNA比值与血清Klotho蛋白及肾组织klotho mRNA均呈显著负相关（r=-0.833,P〈0.01;r=-0.916,P〈0.001）,肾组织Bax/Bcl-2蛋白比值和肾组织Klotho蛋白也呈显著负相关（r=-0.637,P〈0.05）。结论 缺血再灌注急性肾损伤后小鼠全身及肾组织局部Klotho表达均显著下调,Klotho水平的下降可能与凋亡诱导的肾损害密切相关。     

联合应用标志物在心脏手术后急性肾损伤的早期诊断

目的 探讨血清胱抑素C（CyC）、尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、白细胞介素18（IL-18）、视黄醇结合蛋白（RBP）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）在成人心脏手术后急性肾损伤（AKI）早期预测和诊断中的价值及其联合应用的价值。 方法 前瞻性收集心脏手术患者手术前后不同时相的血尿标本,选取其中AKI患者14例,分别测定血清CyC、Scr及尿NGAL、IL-18、RBP、NAG、Cr（Ucr）水平;并选择临床资料相匹配的非AKI患者15例作为对照。观察两组患者围手术期上述5种生物学标志与Scr的动态变化。用受试者工作特征（ROC）曲线及曲线下面积（AUC）评价标志物的单独或联合应用时诊断AKI的精确性。AKI定义为Scr水平较基础值增加≥50%。 结果 29例患者平均年龄（62.9±13.7）岁,基础Scr （73.2±11.9） μmol/L。除AKI组患者术中升主动脉阻断时间较非AKI组较长外[（60.63±13.92） min比（43.00±9.20） min,P=0.047],两组其余临床指标差异均无统计学意义。AKI组患者的血尿生物学标志分别在术后早期的不同时间点显著升高。术后10 h血CyC取1.31 mg/L作为诊断截点时,其在AKI诊断中的敏感性（ST）和特异性（SP）分别为0.71和0.92,AUC=0.83（0.67~1.00）;术后0 h 尿NGAL取49.15 μg/g Ucr时,ST=0.84,SP=0.80,AUC=0.85（0.70~1.00）。术后2 h尿IL-18取285.65 ng/g Ucr时,ST=0.85,SP=0.73,AUC=0.81（0.64~0.97）。术后0 h尿RBP取2934.65 μg/g Ucr时,ST=0.75,SP=0.67,AUC=0.77（0.60~0.95）。术后4 h尿NAG取37.05 U/mg Ucr时,ST=0.86,SP=0.67,AUC=0.72（0.53~0.92）。利用Logistic回归方程,联合以上5种标志物的最佳诊断时间点,得到AUC为0.98（0.93~1.02）（P<0.01）。 结论 心脏手术后AKI患者血尿生物学标志在术后不同时间点显著升高,诊断AKI的时间早于Scr,具有较高的准确性,可作为成人心脏手术后AKI的早期诊断标志物。尿NGAL的ROC曲线下面积最大,尿RBP也显示了较好的诊断价值。联合应用生物学标志可更好地预测临床上AKI的发生。     

高糖和甲基乙二醛对血管周细胞增殖及Ang-1表达的影响

目的 研究高糖和葡萄糖降解产物甲基乙二醛(MGO)对血管周细胞增殖及血管生成素-1(Ang-1)表达的影响.方法 选用体外培养的第3代人脑血管周细胞作为实验细胞,在细胞培养液中分别加入1.5%、2.5%和4.25%葡萄糖(设立相应浓度的甘露醇对照组)及400μmol/L和800μmol/L MGO进行分组干预,以不含血清DMEM培养的细胞作为正常对照组.于处理后12、24、48和72 h,应用MTT法检测细胞增殖(D490 nm).于处理后6h和12h,Real-time PCR法检测细胞Ang-1 mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清中Ang-1蛋白表达.结果 4.25%葡萄糖组和甘露醇对照组、800μmol/L MGO组各时间点D490 nm均明显低于正常对照组(P<0.05).除1.5%葡萄糖和甘露醇对照组外,其余各干预组Ang-1 mRNA表达均显著低于正常对照组(P<0.05).各干预组相应时间点Ang-1蛋白表达均低于正常对照组;干预后6h均低于干预后12h;葡萄糖各浓度组均低于甘露醇对照组;800μmol/L MGO组低于400μmol/L MGO组;4.25%葡萄糖组低于1.5%和2.5%葡萄糖组;以上各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 高糖和MGO以浓度依赖方式抑制体外培养的血管周细胞增殖,并下调Ang-1表达.     

高糖和甲基乙二醛对人脐静脉内皮细胞Ang-Tie2信号链表达的影响

目的观察高浓度葡萄糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成素2(Ang2)和酪氨酸激酶2受体(Tie2)表达的影响,探讨腹膜透析患者腹膜血管新生的可能机制。方法分别以4.25%葡萄糖(高糖组)、4.25%甘露醇(甘露醇组)和800μmol/L葡萄糖降解产物甲基乙二醛(MGO)(MGO组)对体外培养的HUVECs进行干预,设立空白对照组。以MTT比色法测定的D(490 nm)比较各组HUVECs干预后12、24、48 h时点的细胞增殖情况;分别采用Real-Time PCR技术、ELISA法和Western blotting法检测各组HUVECs中Ang2和Tie2 mRNA表达、细胞培养上清液中Ang2分泌量及HUVECs中Tie2蛋白的表达。结果高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs干预后12 h时点的D(490 nm)均明显高于空白对照组(P<0.05),干预后24 h时点的D(490 nm)则显著低于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs中Ang2mRNA表达均明显上调,高糖组和甘露醇组细胞培养上清液中Ang2分泌量均显著增加(P<0.05),...     

慢性肾功能衰竭肾阴虚、肾阳虚证外周血T细胞亚群的观察

本文应用单克隆抗体方法测定慢性肾功能衰竭病人和正常人外周血的T淋巴细胞及其亚群(CD_3,CD_4,CD_8),并进行了比较研究,发现慢性肾功能衰竭病人肾阴虚和肾阳虚证T细胞总数(CD_3)明显下降,CD_4百分率显著下降(肾阳虚无显著性差异)和CD_8百分率显著增高,CD_4/CD_8比值亦显著下降(P<0.001)。而CD_3、CD_4、CD_4/CD_8与血肌酐呈负相关。由此说明慢性肾功能衰竭病人存在着细胞介导免疫功能的紊乱,且与肾功能减退程度密切相关。