SHR和WKY大鼠主动脉hsp70mRNA水平的比较研究

本工作应用热激蛋白７０ＫＤ（ｈｓｐ７０）核酸分子杂交方法，检测了：（１）自发性高血压（ＳＨＲ）主动脉和离休培养的主动脉平滑肌细胞受热激后ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平的变化；（２）不同细胞培养时间（３个月与６周）的ＳＨＲ、ＷＫＹ主动脉ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平。结果提示ＳＨＲ主动脉ｈｓｐｍＲＮＡ水平增加，ＳＨＲ细胞培养受热激（４２℃，１５ｍｉｎ）后２ｈ，ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平明显高于ＷＫＹ鼠者，６周较３个月的ＳＨＲ细胞ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平高；６个月的ＳＨＲ细胞较同期和３个月的ＷＫＹ细胞ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ高。推论ＳＨＲ血管平滑肌细胞对热敏感，原癌基因ｃ－ｍｙｃ和抗癌基因Ｐ５３可能参与ｈｓｐ７０表达调控，并共同参与ＳＨＲ细胞增殖的调节。     

SHR和WKY大鼠主动脉hsp 70 mRNA水平的比较研究

本工作应用热激蛋白７０ＫＤ核酸分子杂交方法，检测了：（１）自发性高血压主动脉和离体培养的主动脉平滑肌细胞受热激后ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平的变化；（２）不同细胞培养时间的ＳＨＲ、ＷＫＹ主动脉ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平。结果提示ＳＨＲ主动脉ｈｓｐ ｍＲＮＡ水平增加，ＳＨＲ细胞培养受热激后２ｈ，ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平明显高于ＷＫＹ鼠者，６周较３个月的ＳＨＲ细胞ｈｓｐ ７０ｍＲＮＡ水平高；６个月的ＳＨＲ细     

自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统的关系

目的以２０周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压大鼠（ＷＫＹ）胸主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）为模型，探讨ＳＨＲＡＳＭＣ异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统（ＲＡＳ）的关系。方法用３Ｈ－ＴｄＲ参入量和倍增时间（ＤＴ）反映ＡＳＭＣ的增殖能力，放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）浓度，紫外分光光度法测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性。结果（１）ＳＨＲＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ，ＤＴ显著短于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。基础状态下，ＳＨＲＡＳＭＣ合成ＡｎｇⅡ、ＡＣＥ以及分泌ＡｎｇⅡ的量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。（２）在含２％ＦＣＳ的培养基中，１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲ、ＷＫＹ的３Ｈ－ＴｄＲ参入量分别提高到对照组的３．３倍、２．２倍（Ｐ＜０．０１），ＳＨＲＡＳＭＣ在不同浓度ＡｎｇⅡ刺激时的３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１），１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲＡＳＭＣ细胞数增加７２．５±２３．１％（Ｐ＜０．０１），ＷＫＹＡＳＭＣ细胞数无显著增加，１０倍浓度ＡｎｇⅡ的Ｓａｒａｌａｓｉｎ对ＳＨＲ、ＷＫＹ３Ｈ－ＴｄＲ参入的抑制率分别为６６．７±３．３％，４４．７±９．９％（Ｐ＜０．０１）     

^3H—TdR参入DNA技术在组织培养中的应用

探讨＾３Ｈ－ＴｄＲ参入ＤＮＡ技术在组织培养中的合理应用。测定１６周龄ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠培养的胸主动脉血管平滑肌细胞的自然增长曲线以及接种后６０ｈ期间，每隔４－６ｈ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入的变化。ＳＨＲ大鼠ＡＳＭＣ分裂增殖能力比ＷＫＹ强，在１５％ＦＢＳ－１６４０培养基作用下，１－６０ｈ期间，ＳＨＲ ＡＳＭＣ ＾３Ｈ－ＴｄＲ高峰参入率在２０－２４，５０－５５ｈ之间，ＷＫＹ的高峰参入率在４０－５０ｈ之间。     

开搏通对自发性高血压大鼠心肌肥厚和心肌血管紧张素II含量的 …

目的：观察开搏通（Ｃａｐ）对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）心肌肌厚和血浆、心肌血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量的影响。方法：２２只ＳＨＲ随机分为Ｃａｐ治疗组和ＳＨＲ对照组，并以ＷＫＹ大鼠作为正常血压对照组（ＷＫＹ组）。结果：①Ｃａｐ能显著降低ＳＨＲ收缩压（Ｐ〈０．００１）；②ＳＨＲ Ｃａｐ治疗组左心室重／体重比显著低于ＳＨＲ对照组（Ｐ〈０．０１），但显著高于ＷＫＹ组（Ｐ〈０．０５）；③ＳＨＲ对照组血浆和心     

高血压高胆固醇血症大鼠对血管收缩性刺激的反应

研究高血压合并高胆固醇血症大鼠血管对去甲肾上腺素（ＮＥ），ＫＣｌ和ＣａＣｌ２收缩性刺激的运动反应。１２周龄的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和京都种Ｗｉｓｔａｒ大鼠（ＷＫＹ）分成４组：胆固醇喂养的ＷＫＹ和ＳＨＲ组及其对照组。测定血压、心／体比和血脂。胆固醇喂养１２周后，ＷＫＹ和ＳＨＲ的血压没有明显变化；但血浆胆固醇和甘油三酯增加，ＨＤＬ降低。胆固醇组ＳＨＲ的心／体比降低。主动脉条未发现肉眼可见的动脉粥样硬化缺损。高胆固醇血症的ＷＫＹ和ＳＨＲ的主动脉条ＮＥ量效曲线显著左移，ＥＤ５０降低，ＳＨＲ较ＷＫＹ更显著。胆固醇组ＷＫＹ和ＳＨＲ的主动脉条ＫＣｌ和ＣａＣｌ２量效曲线右移，ＥＤ５０增高。高血压增强血管对ＮＥ的反应，特别是并发高胆固醇血症大鼠的血管。     

用mRNA差异显示法比较SHR和WKY大鼠肾脏组织的基因表达

目的用ｍＲＮＡ差异显示技术观察ＳＨＲ与ＷＫＹ大鼠肾脏组织在ｍＲＮＡ表达水平上的差异。方法取１２周龄的ＳＨＲ及ＷＫＹ大鼠，提取肾脏总ＲＮＡ，用含１２个寡聚核苷酸的Ｔ１１Ａ或Ｔ１１Ｇ引物进行逆转录，用Ｔ１１Ａ、ＡＰ１～３，Ｔ１１Ｇ、ＡＰ６，Ｔ１１Ｇ、ＡＰ７～８引物对逆转录产物进行多聚酶链式反应，反应产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影。结果每一种引物组合在单一电泳泳道上可显示７０～１００条基因表达条带，其中绝大多数代表肾脏基因表达的条带是相同的，但其中显示的４条ＳＨＲ大鼠肾脏基因表达的条带与相对应的ＷＫＹ大鼠肾脏基因表达的条带出现了差异。讨论ｍＲＮＡ差异显示技术对于快速筛选ＳＨＲ及ＷＫＹ大鼠肾脏组织的差异表达基因是适用的。     

不同年龄自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca~（2＋）转运功能障碍及某些相关因素的变化

应用不同年龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌原代与传代细胞（ＶＳＭＣ），观察Ｃａ２＋转运功能障碍及某些相关因素的变化。结果表明：（１）在血压未升高的ＶＳＭＣＣａ２＋内流已较同龄对照组ＷＫＹ大鼠明显增加，而Ｃａ２＋外流量较ＷＫＹ大鼠显著降低。表明ＳＨＲＶＳＭＣ膜Ｃａ２＋转运功能障碍在血压升高前就已发生，并随年龄及血压增高有加重趋势；（２）ＶＳＭＣｃＡＭＰ及钙调素（ＣａＭ）含量变化与细胞膜Ｃａ２＋转运功能障碍基本同步，提示二者异常与细胞膜Ｃａ２＋转运功能障碍有密切关系；（３）血压升高前ＳＨＲＶＳＭＣ内ＡＮＧⅡ含量与ＷＫＹ大鼠相比无明显差异，但１６周龄５ＨＲＶＳＭＣ内ＡＮＧⅡ含量明显高于其幼鼠（Ｐ＜０．００１），与血压呈正相关。提示ＶＳＭＣ内ＡＮＧⅡ在血压升高过程中可能具有一定作用。以上结果表明高血压时ＶＳＭＣ膜Ｃａ２＋转运功能障碍有明显遗传倾向，ＶＳＭＣ内ＣＡＭＰ、ＣａＭ及ＡＮＧⅡ含量异常与上述障碍密切相关。     

氟伐他汀对高血压大鼠血管结构和功能的影响及机制

目的　探讨内源性胆固醇合成途径的限速酶－ＨＭＧ－ＣｏＡ 还原酶的抑制剂一氟伐他汀对高血压血管肥厚、血管功能和高血压进程的影响,并揭示其可能的作用机制。　方法　（１）雄性ＳＨＲ（ｎ＝ ２６）,从８周龄起予氟伐他汀（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ,Ｆｌｕ）２０ ｍ ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１灌胃,分别治疗８ 周和１６周,年龄、性别配对的未治疗的ＳＨＲ（ｎ＝ ２０）和ＷＫＹ（ｎ＝ １８）作对照。分别测定收缩压（ＳＢＰ）,血脂（ＴＣ、ＴＧ 和 ＬＤＬ－Ｃ）（ＣＨＯＤ－ＰＡＰ和ＧＰＯ－ＰＡＰ法）;进行血管组织形态学观察,测定血管壁（中膜）／腔面积（Ｗ／Ｌ）比;应用离体动脉环试验观察血管的功能变化。（２）以培养８周龄的ＳＨＲ 和ＷＫＹ 大鼠胸主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣｓ）为模型,观察（ｌ）两种不同的有丝分裂原－血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ Ⅱ） 和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对ＡＳＭＣｓ 增殖（细胞计数）和ＤＮＡ 合成（３Ｈ－ＴｄＲ掺入率）的影响。（２）Ｆｌｕ 对２０％ ＦＣＳ、ＡｎｇⅡ和ＰＤＧＦ促ＡＳＭＣｓ 分裂增殖的抑制作用及（３）胆固醇合成代谢中间产物甲羟戊酸（ｍ ｅｖａｌｏｎｉｃ ａｃｉｄ,Ｍｅｖａ）对Ｆｌｕ 抑制ＡＳＭＣｓ增殖和ＤＮＡ 合成的逆转效果。     

自发性高血压大鼠不同脑区5—HT1A受体的结合特征

用放射性配基［＾３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ结合实验显示，自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）脑区的海马、延髓、下丘脑５－ＨＴ１Ａ受体的结合位点明显高于正常Ｗｉｓｔａｒ Ｋｙｏｔｏ（ＷＫＹ）大鼠，其中海马增加最多。在此基础上用抗高血压药普萘洛尔给ＳＨＲ灌胃，结果脑区不同部位受体结合参数、血压及心率都有不同程度的变化，更接近于ＷＫＹ大鼠。这说明ＳＨＲ与ＷＫＹ大鼠之间不同区５－Ｈ５１Ａ受体特异性差别可能与高血压的发     

问号赖型钩体内鞭毛基因重组质粒的构建及其在大肠杆菌的表达

为了获得重组表达的钩体内鞭毛亚单位蛋白抗原，以探讨制备新疫苗的途径，利用聚合酶链反应扩增其编码基因完整的开放阅读框架，扩增产物经ＳａｌⅠ、ＣｌａⅠ双酶切消化后定向克隆于ｐＴ７－７表达载体上。重组质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）中，经ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示此产物相对分子量为３４ｋｄ，产量占细菌总蛋白的１１．８％。用插入片段为探针，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交提示可能有两个相关的基因存在于钩体的基因组内。Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交证实该表达蛋白可与内鞭毛抗血清在３４ｋｄ处出现印迹，与钩体内鞭毛同类蛋白带位置一致，本实验克隆了钩体内鞭毛Ｂ类基因并表达了相应抗原。     

一种鉴别免疫筛选噬菌体克隆真、假阳性的方法

目的探讨及早鉴别用免疫学方法筛选cDNA文库得到的阳性克隆是否真实可靠的方法.方法将阳性噬菌体克隆与宿主菌按一定的比例诱导培养后,取沉淀做SDS-PAGE后行W estern b lot;同时取出一个阳性克隆进行亚克隆,直至3次亚克隆均为全部阳性.结果3次亚克隆均为全部阳性的噬菌体克隆,在W estern b lot鉴定中也呈阳性反应.结论可用W estern b lot方法来鉴别用免疫学方法筛选cDNA文库得到的阳性克隆是否真实可靠.     

多寡核苷酸探针同步标记在Northern blot多基因分析中的应用

目的：建立一种多探针同时标记同步杂交检测多基因的简化的Northern blot方法.方法：通过T4多聚核苷酸激酶5＇末端放射性磷酸化标记法对Northern blot中多寡核苷酸探针同时标记,实现对同一张转移印迹膜上的多基因同步杂交显影检测.结果：与常规mRNA逐一检测的效果进行比较,同步简化法的各目的基因同时得到较好的检测.结论：同步简化法简化了实验过程,缩减了实验时间,节省了实验试剂,并使各基因表达丰度之间的比较具有更高的准确性,提高了Northern blot的检测效率和成功率.     

肺癌细胞系内皮蛋白C受体的表达及其意义

目的 从细胞、蛋白和基因三个水平分析内皮蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肺癌细胞系的表达。方法 以EA．hy926内皮细胞作阳性对照，人胚肺W138细胞作阴性对照，通过流式细胞术、West-ern．blot及半定量逆转录-聚合酶链反应分析EPCR在6种肺癌细胞系的表达水平。结果 6株肺癌细胞系均有EPCR的表达。高转移肺癌95D细胞表达最高。结论 EPCR的表达是肺癌细胞的重要特征，可能与肺癌增殖及转移有关。     

人脑胶质瘤中环氧化酶-2的表达和作用研究

目的研究环氧化酶-2（COX-2）在人脑胶质瘤中的表达状况，探讨其作用。方法对62例脑胶质瘤患者和3例脑外伤患者（对照组）运用免疫组化及Western blot方法检测COX-2蛋白表达。结果在正常脑组织中，仅少数神经细胞COX-2染色阳性；在脑胶质瘤中，都发现有较多肿瘤细胞COX-2染色阳性。脑胶质瘤中COX-2染色的表达强度与胶质瘤的病理分级呈正相关（1=-0．874，P〈0．01）。正常脑组织与胶质母细胞瘤、间变性星形细胞瘤和星形细胞瘤之间，COX-2表达强度的差异均有统计学意义（均P〈0．01）。在坏死区域周围肿瘤细胞有COX-2的高表达。正常脑组织与肿瘤组织的新生血管内皮细胞发现有COX-2染色阳性，在血管周围有COX-2染色阳性的肿瘤细胞聚集。结论COX-2在各级别的脑胶质瘤细胞中有表达，和脑胶质瘤的发生和发展有关系；COX-2在肿瘤的坏死区周围有强表达，在肿瘤细胞的凋亡和死亡过程起作用；COX-2在肿瘤的新生血管内皮上有表达，在血管周围有COX-2阳性的肿瘤细胞积聚，可促进肿瘤组织新生血管的生成；COX-2可作为判断脑胶质瘤恶性程度的辅助生物学标志。     

骨桥蛋白在涎腺肿瘤中的表达及临床意义

目的:研究涎腺肿瘤中骨桥蛋(Osteopontin,OPN)mRNA和蛋白表达水平与临床病理特征之间的关系.方法:应用荧光实时定量RT-PCR和Westem blot检测OPN mRNA和蛋白在41例恶性涎腺肿瘤和21例良性涎腺肿瘤及10例正常涎腺组织中表达量,分析OPN mRNA和蛋白表达量与涎腺肿瘤临床病理特征的关系.结果:OPN mRNA和蛋白在恶性肿瘤中的表达量明显高于在良性肿瘤和正常组织中的表达量,差异具有统计学意义(P<0.05).OPN mRNA表达水平与恶性涎腺肿瘤TNM分期和淋巴结转移密切相关,蛋白表达水平与TNM分期有关(P<0.05),与发病部位、分化程度无明显相关性.结论:恶性涎腺肿瘤中OPN mRNA和蛋白表达量明显增高,并与临床病理特征密切相关.     

孕期边缘型维生素A缺乏对NMDA诱导的新生大鼠神经元Ca~(2+)内流的抑制作用

目的 了解孕期边缘型维生素A(vitamin A,VitA)缺乏对氮-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-Aspartate, NMDA)诱导的新生大鼠海马神经元Ca2+内流的影响.方法 将16只健康雌性Wistar大鼠采用随机数字表法分为边缘型VitA缺乏(MVAD)和VitA正常(VAN)组,每组8只.从交配前3周开始分别饲以VitA缺乏饲料(含VitA 400 IU/kg)和VitA充足饲料(含VitA 6 500 IU/kg).高效液相技术检测血清VitA浓度.取MVAD组及VAN组新生大鼠海马神经元进行原代培养,并运用钙影像测定仪检测原代培养的海马神经元在NMDA刺激后细胞内钙离子变化.Western blot半定量分析海马组织NMDA受体-1(NR1)的表达.结果 MVAD组母鼠血清VitA水平[(0.768±0.069)μmol/L]低于VAN组[(1.284±0.217)μmol/L],MVAD组仔鼠血清VitA水平[(0.806±0.092)μmol/L]低于VAN组[(1.270±0.098)μmol/L](P<0.01);神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolage,NSE)免疫荧光鉴定神经元纯度显示两组无显著差异(P>0.05);MVAD组与VAN组海马神经元在NMDA刺激后,MVAD组Ratio340/380增加值(0.136±0.012)低于VAN组(0.168± 0.022)(P<0.01);Western blot半定量分析结果显示NR1在MVAD组海马组织中的表达显著低于VAN组.结论 孕期开始的MVAD会抑制NMDA诱导的新生大鼠海马神经元钙离子内流,而降低NR1在神经元的表达可能是其损伤的机制之一.     

IL-1βmRNA在胎儿脑及U251细胞中的表达

目的探讨IL－1βmRNA在胎儿脑中的表达与某些疾病的关系。方法采用杂交法检测胎儿脑中IL－1βmRNA的水平,利用Nonhem杂交法检测人脑胶质瘤传代细胞U251中IL－1β的表达情况。结果显示了TPA可明显刺激U251中IL－1β的表达。结论孕2个月胎儿脑在未加任何刺激的自然情况下即有中IL－1β的表达。     

离体培养神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2B的表达

目的研究离体培养的大鼠神经干细胞（NSCs）中N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B的表达。方法从孕18～19天胎鼠海马中分离、培养、传代、鉴定NSCs，用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹检测传代1次NSCs中NMDA受体亚单位NR2B的表达。结果源自孕18～19天胎鼠海马的NSCs，即可以表达NMDA受体亚单位NR2B。结论体外培养的NSCs能表达NMDA受体亚单位NR2B。     

DMD模型小鼠基因突变及肌肉亚型表达特点研究

目的研究C57BL／10ScSn—Dmd^mdx／J模型小鼠子代基因突变情况及肌肉亚型的表达差异。方法选取2、3和4周龄C57BL／10ScSn—Dmd^mdx／J模型小鼠及C57BL／6J小鼠各3只，分别采集膈肌、背阔肌和腓肠肌的肌肉组织，利用RT-PCR方法扩增分析Dmd基因的结构特点；采用Western bolt方法分析β—dystroglycan的表达差异。结果模型小鼠基因编码抗肌萎缩蛋白基因（Dmd）的第3202位点出现C→T的自发突变，模型小鼠β—dystroglycan的表达比正常鼠有显著性升高。结论C57BL／10ScSn-Dmd^mdx／J模型小鼠的肌纤维在发育中出现断裂或是缺失，β-dystroglycan表达大幅度上调。