亚低温减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CAl区Bax表达变化的关系

目的研究亚低温（33℃,4h）减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CA1区Bax表达变化的关系,探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血／再灌注损伤模型,随机分为假手术组（SH）、常温再灌注组（IR）、低温假手术组（HSH）、低温再灌注组（HIR）,每组根据再灌注的不同时间点（2h、4h、1d、3d、5d）又分为5个对应的亚组（／Z=6）。在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞,苏木精-伊红染色检测海马存活细胞,免疫组化检测Bax在海马CA1区的动态变化。结果4h亚低温可显著减少缺血沙土鼠1d、3d、5d的探索活动及CA1区的凋亡细胞,增加存活细胞,抑制脑缺血后海马CA1区Bax的早期表达（2h、4h、1d）。结论4h亚低温对沙土鼠5min前脑缺血有确切的保护作用,抑制海马CA1区缺血／再灌注早期Bax的表达可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一。     

离体培养人神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达

目的:研究早期离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达。方法:取胎龄8～12周人胚脑海马,进行NSCs分离、培养、传代和鉴定。通过免疫细胞化学和RT-PCR等方法检测传代1次和2次的人胚胎海马NSCs中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达。结果:自孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs,NMDA受体亚单位NR2A和NR2B免疫细胞化学反应呈阳性,这两种受体亚单位的mRNA均被检测到。结论:体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR2A和NR2B。     

亚低温减轻沙土鼠海马前脑缺血再灌注损伤和对Hsp70表达的影响

目的观察亚低温(维持沙土鼠鼓膜温度在33℃,持续4h)对前脑缺血再灌注后沙土鼠海马CA1区细胞损伤和热休克蛋白70(Hsp70)表达的影响,研究亚低温减轻脑损伤可能的机制。方法采用沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型:双侧颈总动脉阻断5min。随机分为假手术组(SH组),假手术低温组(HSH组),再灌注常温组(IR组),再灌注低温组(HIR组),根据再灌注的不同时间点(2h、4h、1d、3d、5d)每组又分为5个对应的亚组(每亚组n=6)。在预定时间点行行为学检查,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测海马CA1区的凋亡细胞,免疫组化检测Hsp70在海马CA1区的动态变化。结果亚低温处理4h可减轻缺血沙土鼠的行为学异常,减少海马CA1区的凋亡细胞,促进Hsp70蛋白1d后的表达。结论 4h亚低温增加沙土鼠5min前脑缺血再灌注后海马CA1区Hsp70的表达,可能是其减少凋亡细胞产生脑保护作用的机制之一。     

N-甲基-D-天门冬氨酸对离体培养人海马神经干细胞增殖的影响

目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）对离体培养的人胚胎海马神经干细胞（NSCs）增殖的影响。方法取胎龄8～12周人胚脑海马,分离、培养、传代、鉴定NSCs,取传代培养的NSCs随机分为以下5组：对照组、1μmol/L NMDA组、10μmol/L NMDA组、30μmol/L NMDA组、100μmol/L NMDA组。每组取8孔,对照组使用正常培养基培养,各NMDA组加入不同剂量的NMDA,放在培养箱中继续培养。各组细胞分别在3 d、7 d和12 d后采用MTT法测定吸光度（A）值。结果在NMDA作用3 d和7 d时,100μmol/L NMDA组的A值显著高于对照组（均P〈0.05）;其他各组与对照组相比,以及不同浓度NMDA组间相比,差异均无统计学意义（均P〉0.05）。NMDA作用12 d时,30μmol/L和100μmol/L NMDA组的A值显著高于对照组（均P〈0.05）;其他各组与对照组相比以及不同浓度NMDA组间相比,差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论一定条件下NMDA可以促进离体培养人胚胎海马NSCs增殖。     

NMDA受体亚单位在离体大鼠海马神经干细胞中的表达

为了研究早期离体培养的胎鼠海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达,分离、培养、传代孕18～19d胎鼠海马NSCs,对NSCs进行nestin和分化鉴定。通过免疫荧光反应和RT-PCR法检测原代培养、传代1次、传代2次的NSCs中NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达。结果显示,从孕18～19d的胎鼠大脑海马分离培养出的NSCs,NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的免疫荧光反应均呈阳性,这三种受体亚单位的mRNA在海马NSCs上均被检测到。上述结果提示,离体培养的胎鼠早期海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B。     

NMDA受体亚单位NR1在离体人神经干细胞中的表达

目的研究离体培养的人海马神经干细胞（NSCs）中NMDA受体亚单位NR1的表达。方法分离培养胎龄8-12周人胚脑海马神经干细胞,对NSCs进行Nestin和分化鉴定。用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹和RT—PCR等方法检测原代、传代1次、传代2次的人胚胎海马NSCs中NR1蛋白和mRNA的表达。结果在孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs中,NMDA受体亚单位NRI免疫细胞化学反应呈阳性,该受体亚单位的蛋白和mRNA均被检测钊。结论体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1。     

Ro25—6981对成年脑缺血／再灌注大鼠海马CA1区神经发生的影响

目的探讨NMDA受体亚单位2B选择性拮抗剂Ro25—6981对成年大鼠短暂性全脑缺血再灌注后海马CA1区神经发生的影响。方法将成年雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组。制作四动脉阻断（4AO）大鼠全脑缺血15min再灌注模型。实验组和对照组大鼠分别于术前30min腹腔注射不同剂量Ro25—6981（0．3mg／kg、0．6mg／kg）、生理盐水。免疫组织化学技术显示再灌注第1、3、7天各组大鼠海马CA1区BrdU阳性细胞数。结果对照组大鼠BrdU阳性细胞在再灌注3d增殖达高峰,随后下降。再灌注1、3、7天,实验组与对照组相比BrdU阳性细胞数均明显减少（P〈0．01）。结论一定条件下,Ro25—6981可抑制缺血再灌注诱导的海马CA1区的短暂性神经发生。     

NMDA对离体培养人海马神经干细胞凋亡的影响

目的研究N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）对离体培养的人胚胎海马神经干细胞（NSCs）凋亡的影响。方法从胎龄8～12周人胚脑中分离、传代培养并鉴定海马NSCs,取传代培养的海马NSCs随机分组：①正常组;②μmol／LNMDA组;③10μmol／LNMDA组;④30μmol／LNMDA组;⑤100μmol／LNMDA组。每组设4个复孔,分别在3、7、12天取各组细胞,用Hoechst33258进行荧光染色,计算海马NSCs的凋亡率。结果在3、7、12天时,各实验组的人胚胎海马NSCs凋亡率与正常组相比均无明显差异。结论-定条件下,早期离体培养人胚胎海马NSCs对浓度为100μmol／L及其以下的NMDA有较好的耐受性。     

离体培养神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2B的表达

目的研究离体培养的大鼠神经干细胞（NSCs）中N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B的表达。方法从孕18～19天胎鼠海马中分离、培养、传代、鉴定NSCs，用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹检测传代1次NSCs中NMDA受体亚单位NR2B的表达。结果源自孕18～19天胎鼠海马的NSCs，即可以表达NMDA受体亚单位NR2B。结论体外培养的NSCs能表达NMDA受体亚单位NR2B。