再狭窄的细胞和分子生物学(三)

癌基因与抗癌基因癌基因是一类能编码生长因子、生长因子受体、细胞内生长信息传递分子以及转录调节因子的基因，亦称原癌基因，现有100多种，它们是一类编码关键性调控蛋白质的正常细胞基因，其主要功能是调节细胞的增殖与分化。1．几类常见的癌基因1．1src癌基因族：c－src由17个外显子组成，人的c－src分布于第20号染色体，其转录产物全长3．9-4．0kb。大多数正常细胞或组织中c－src表达水平很低，但细胞增殖时表达增高。src编码分子量为60kDa的蛋白质，称PP60src，具有酪氨酸蛋白激酶（tyrosineproteinkinase，TPK）活性。除src外，…     

高糖刺激血管平滑肌细胞血管内皮生长因子的表达

平滑肌细胞可分泌血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ) 〔1〕,在糖尿病视网膜组织中ＶＥＧＦ表达明显增高〔2〕。ＶＥＧＦ的主要功能是增加血管通透性、促进内皮细胞增生和促进新血管增殖。推测ＶＥＧＦ与糖尿病视网膜血管病的病理变化直接相关。本研究探讨Ｄ 葡萄糖浓度、作用时间以及波动糖浓度刺激对ＶＥＧＦ表达的影响。一、材料和方法1.血管平滑肌细胞培养 :无菌条件下取大鼠胸主动脉段 ,按Ｈｏｆｍａｎ的贴片法原代培养血管平滑肌细胞。本实验选用 5～ 10代细胞进行实验。2 .细胞总ＲＮＡ的提取 ,ＲＮＡ变性电泳 ,转膜 :采用异硫氰酸胍一步法…     

重组腺病毒相关病毒携带人血管内皮生长因子165诱导家兔缺血心肌血管生成的研究

目的　将携带人血管内皮生长因子 16 5 (hVEGF 16 5 )cDNA的重组腺病毒相关病毒 (rAAV)载体注入家兔缺血心肌 ,观察血管内皮生长因子 (VEGF)的血管生成效应。方法　制作家兔急性心肌梗死模型 ,将rAAV hVEGF 16 5注入缺血心肌。 4周后取注射部位心肌 ,用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)和免疫组织化学、Westernblot方法检测目的基因的表达 ,并计数注射部位心肌毛细血管数目 ,评价外源VEGF的生物学活性。结果　注射rAAV VEGF部位心肌VEGFmRNA及其蛋白的表达可持续 8周 ,而且比对照组增加。远隔脏器未见外源VEGF的播散和表达。注射rAAV VEGF部位毛细血管密度比对照组增加。结论　rAAV hVEGF 16 5可以有效地转染成年家兔心肌组织 ,外源基因稳定长期表达 ,同时能够刺激新血管生成 ,并具有良好的安全性。     

血管内皮生长因子基因治疗小型猪冠状动脉闭塞的实验研究

目的探讨应用血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗动物实验性冠状动脉闭塞的疗效.方法中国实验用小型猪19只,结扎左冠状动脉前降支中远段,心肌内多点注射自行构建的pcD2/hVEGF121真核表达质粒.应用逆转录聚合酶链反应、VEGF免疫组化染色、Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色等方法检测VEGF基因在心肌中的表达及其生物学作用,用常规冠状动脉造影观察VEGF基因治疗对闭塞冠脉侧支循环建立的作用.结果转移VEGF基因后,小型猪心肌内VEGF mRNA高表达,VEGF免疫组化染色提示VEGF蛋白表达水平升高;Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色显示心肌毛细血管增加;冠状动脉造影证明VEGF基因治疗能够促进闭塞冠脉侧支循环的建立.结论心肌内注射pcD2/hVEGF121真核表达质粒能够获得VEGF mRNA和蛋白的有效表达,促进心肌毛细血管增生,促进侧支循环建立.     

对比两种分析微卫星多态性的电泳方法

目的　对比变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Spreadex凝胶电泳两种方法分析微卫星多态性。方法　取 1 1 8例冠心病患者的外周血 ,以高盐沉淀法提取基因组 DNA,经 PCR扩增 HO- 1基因启动子微卫星序列后 ,分别采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Spreadex凝胶电泳两种方法进行基因型分析 ,并选择部分样本以 Sanger末端终止法测定 DNA序列。结果　长度相差 8bp的两条 DNA marker在变性聚丙烯酰胺凝胶上相隔 1 mm;而在 Spreadex凝胶上相隔 8mm,图像清晰且条带分明。同一批样本分别采用两种方法电泳 ,1 1 8个样本中 1 1 0个结果一致 ,两种电泳方法一致性为 93%;对电泳结果不一致的样本重新进行电泳 ,均为变性聚丙烯酰胺电泳结果改变而 Spreadex凝胶电泳结果不变 ,最后两种电泳方法一致性达1 0 0 %。Spreadex凝胶电泳结果与测序结果完全符合。结论　与变性聚丙烯酰胺凝胶电泳相比 ,Spreadex凝胶电泳分辨率较高 ,重复性较好 ,更适用于分析微卫星多态性。     

同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制

同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制杨立华△田清萍唐朝枢周爱儒汤健刘乃奎（北京医科大学心血管研究所，北京１０００８３）同型半胱氨酸（ＨＣＹ）是甲硫氨酸代谢过程中产生的一种含硫氨基酸。大量流行病学资料和临床观察表明，ＨＣＹ与动脉粥样硬化形成密切相关。然而，...     

自发性高血压大鼠心钠素基因结构改变的研究

自发性高血压大鼠心钠素基因结构改变的研究北京医科大学心血管基础研究所杨鸿，姚阿卿，高旭光，汤健，周爱儒我们以往实验发现自发性高血压大鼠（Ｓｐｏｎｔａｎｅ－ｏｕｓｌｙＨｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＲａｔＳＨＲ）的心房和血浆心钠素（ＡＮＰ）水平均明显升高，而且...     

制备性SDS—PAGE纯化大肠杆菌表达的重组人VEGF

在以基因工程方法实现大肠杆菌表达外源重组人ＶＥＧＦ的基础上，应用制备性ＳＤＳ—ＰＡＧＥ从包含体中分离纯化了这一因子。纯化蛋白在含有氧化型与还原型谷胱甘肽和肝素的缓冲液中复性，复性后的ＶＥＧＦ蛋白成为同源双体，经Ｍｉｌｅｓ方法检测，证明可提高血管通透性，具有生物活性。这一研究为制备具有生理与病理意义的研究奠定了基础。