紫杉醇影响TGF⁃β1诱导的原代人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的：研究紫杉醇（paclitaxel,PTX）对重组人转化生长因子?β1（recombinant human transform growth factor?β1,rhTGF?β1）诱导人肺成纤维细胞（human lung fibroblasts,HLFs）向肌成纤维细胞转化的影响及其相关机制。方法：培养HLFs,药物处理分为对照组、TGF?β1组（5 ng/mL）、TGF?β1+PTX（0.01 nmol/L）组、TGF?β1+ PTX（0.1 nmol/L）组、TGF?β1+ PTX（1 nmol/L）组、PTX组（1 nmol/L）。采用CCK8法测定细胞活性;显微镜下观察并分析细胞形态学变化;Transwell实验检测细胞迁移能力;免疫荧光观察细胞内α?平滑肌肌动蛋白（α?SMA）表达及分布情况;real?time PCR和Western blot检测各组α?SMA、纤连蛋白（fibronectin）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（collagen Ⅲ）mRNA水平及蛋白含量;Western blot检测各组细胞内p?Smad3、Smad3、p?p38和p38蛋白含量。结果：CCK8结果显示,1 nmol/L PTX对细胞无毒性作用,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs活性增加,0.1和1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs活性增加;细胞形态学结果显示,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs胞体宽度增加,0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs胞体宽度增加;Transwell实验结果显示,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs迁移,0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs迁移;免疫荧光结果显示,0.01 nmol/L PTX不能降低TGF?β1诱导的HLFs内α?SMA荧光强度,0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF?β1诱导的HLFs内α?SMA荧光强度;real?time PCR和Western blot结果显示,0.01 nmol/L PTX不能降低TGF?β1诱导的HLFs表型转化标志物α?SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagenⅢ含量及p38的磷酸化水平,0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF?β1诱导的HLFs表型转化标志物α?SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagen Ⅲ含量以及Smad3和p38的磷酸化水平。结论：紫杉醇可以抑制TGF?β1诱导原代HLFs向肌成纤维细胞表型转化,这种作用可能与抑制TGF?β/Smad/MAPK信号通路激活有关。     

TGF—β1对大鼠系膜细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响

目的：通过对大鼠系膜细胞转染TGF－β1基因和反义TGF－β1基因,观察该细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响。方法：采用MTT、细胞计数和流式细胞仪检测检测细胞增殖;Northernblot和Western blot法检测其纤溶酶原激活性物质抑制－1（PAI－1）的表达,酶谱分析法检测其纤溶酶原激活物（tPA)活性。结果：过表达TGF－β1的系膜细胞生长受抑制,其PAI－1mRNA和蛋白表达增强,而tPA酶活性则降低;而低表达TGF－β1的系膜细胞增殖加速,其PAI－1mRNA和蛋白表达降低,tPA酶活性增强。结论TGF－β1可通过对大鼠系膜细胞增、纤拳激活性及其抑制因子表达的影响,而促进肾小球纤维化的发性。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6 mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

结缔组织生长因子通过活化Erk-1/2信号通路促成肌纤维细胞生成

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)协同转化生长因子β1(TGFβ1)促进成肌纤维细胞生成分子机制。方法用TGFβ1预处理大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F),使部分细胞转化为成肌纤维细胞,然后将预处理后的细胞分为对照组,CTGF刺激组,TGFβ1刺激组和PD98059干预组。通过免疫细胞化学双染技术分别检测成肌纤维细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和掺入的细胞增殖标志物5溴2'脱氧尿嘧啶(BrdU);并以Western免疫印迹法检测αSMA水平。结果TGFβ1预处理的各组细胞都有胞浆内αSMA染色阳性,CTGF刺激组αSMA蛋白表达均明显高于对照组(P<0.05);但CTGF组部分αSMA阳性细胞核内BrdU阳性率明显高于对照组和TGFβ1组。进一步实验显示CTGF刺激细胞30min能明显诱导细胞内Erk1/2磷酸化,TGFβ1组无此反应。用PD98059阻断Erk1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的细胞核内BrdU阳性表达和αSMA蛋白表达(P<0.05)。结论CTGF通过Erk1/2信号通路促进TGFβ1诱导的成肌纤维细胞增殖。     

过表达Sirt1对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响?方法:体外培养人肾小球系膜细胞(HMC),利用Sirt1重组慢病毒载体感染细胞获得过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞并分为4组:①NG+LV-CTL组:正常葡萄糖(5.5 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;②HG+ LV-CTL组:高糖(30 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;③NG+LV-Sirt1组:正常葡萄糖+Sirt1慢病毒感染;④HG+LV-Sirt1组:高糖+Sirt1慢病毒感染;再设立3组未感染细胞作为对照,分别为:①NG组(正常葡萄糖);②NM组(正常糖+甘露醇组24.5 mmol/L);③ HG组(高糖处理),培养不同时间后以CCK-8法检测细胞增殖情况;实时定PCR 和Western blot 法检测各组细胞TGF-β1 mRNA 和蛋白表达水平?结果:①通过重组慢病毒感染,嘌呤霉素筛选,获取稳定过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞系;②与NG组相比较,各时间点HG?HG+LV-CTL?HG+LV-Sirt1组CCK8的吸光值均明显升高(P均 < 0.01)?处理24?48 h后,HG+ LV-Sirt1组的吸光值明显低于HG?HG+ LV-CTL组?③与NG组相比较,HG?HG+ LV-CTL?HG+ LV-Sirt1组TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显上调,差异均有显著性(P均 < 0.01);HG+LV-Sirt1组的TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显低于HG?HG+ LV-CTL组(P均 < 0.01);而NG?NM?NG+LV-CTL及NG+LV Sirt1组间相比较,无统计学差异(P > 0.05)?结论:过表达Sirt1能够抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达,Sirt1可能成为防治糖尿病肾病的作用靶点?     

沉默乏氧诱导因子-1α基因对乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因对CoCl2诱导的乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响及其机制。方法利用分子生物学技术构建靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF,脂质体介导转染SMMC-7721细胞后进行乏氧培养,分别采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,克隆存活实验检测细胞放射敏感性的变化。结果酶切鉴定和测序证实重组质粒pGenesil-HIF构建正确,转染质粒后乏氧培养24 h,SMMC-7721细胞HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组和阴性干扰组（P〈0.05或P〈0.01）;乏氧培养24 h、48 h和72 h后,HIF-1α干扰组细胞增殖活性明显低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.01）;乏氧培养48 h和72 h后HIF-1α干扰组细胞凋亡百分率明显高于对照组（P〈0.01）;乏氧培养72 h后HIF-1α干扰组SMMC-7721细胞放射增敏比为1.45。结论 RNA干扰HIF-1α基因可增强乏氧人肝癌细胞SMMC-7721的放射敏感性,其机制可能与RNA干扰HIF-1α基因抑制乏氧细胞增殖和诱导凋亡有关。     

转化生长因子-β1反义寡核苷酸对人横纹肌肉瘤细胞RD增殖的影响

目的 研究转化生长因子（TGF）-β1反义寡核苷酸（ASON）对人胚胎性横纹肌肉瘤细胞系RD增殖的影响。方法 采用反义寡核苷酸技术，以阳离子脂质体为载体，将人工合成的TGF-β1 ASON转染RD细胞，阻碍内源性TGF-β1／Smad信号的转导，以未转染的RD细胞组作对照。免疫荧光技术检测RD细胞TGF-β1蛋白表达水平；四甲基偶氮唑盐实验（MTT）检测RD细胞的增殖情况；流式细胞术（FCM）检测细胞周期。结果 转染4d后RD细胞TGF—β1蛋白表达量较转入2d时明显减少，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；RD细胞活力明显降低，合成期（S期）细胞减少。结论TGF-β1 ASON可有效阻碍TGF—β1／Smad信号通路，在一定程度上可促进RD细胞退出细胞周期，并抑制RD细胞增殖。     

Akt1/p27kip1途径介导脂氧素A4抑制TNF-α所致的系膜细胞增殖

目的：研究脂氧素A4(LXA4)是否抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所致的肾小球系膜细胞增殖，并探讨LXA4作用的信号转导机制。方法：用不同浓度的脂氧素A4预外理培养的大鼠肾小球系膜细胞，再加入TNF-α(10ng／m1)共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；用RT-PCR法检测细胞周期素E与mRNA表达；用Westemblot检测308位苏氨酸(Thr308)磷酸化的蛋白激酶Aktl及细胞周期负调控蛋白P27^kipl表达量。结果：LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的系膜细胞增殖。在系膜细胞增殖同时TNF-α引起的细胞周期素E的蛋白表达也被LXA4下调。LXA4减少TNF-α诱导的肾小球系膜细胞中308位苏氨酸磷酸化的Akt1蛋白。LXA4呈剂量依赖性地阻止TNF-α所致的P27^kipl表达下调。结论：LXA4能够抑制TNF-α所致的大鼠系膜细胞的增殖，其机制依赖于Akt1／P27^kipl信号转导途径。     

白藜三醇通过调控AUF1抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原分泌

目的：研究白藜三醇（resveratrol,Res）对乳鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）增殖和胶原分泌的影响,并探讨其可能的机制。方法：采用胰酶、Ⅰ型胶原酶双酶消化法、差速贴壁法和免疫荧光法分离培养及鉴定乳鼠CFs;将2~3代CFs随机分为Con组（正常对照组）、DMSO组（溶剂对照组）、AngⅡ组（模型组）、AngⅡ+Res组（药物干预组）。通过CCK?8及EdU染色法检测细胞增殖;羟脯氨酸法检测细胞胶原分泌水平;qRT?PCR检测AU碱基富集区RNA结合蛋白1（AU?rich element RNA?binding factor 1,AUF1）、转化生长因子β1（transforming growth factor?β1,TGF?β1）mRNA的表达;Western blot检测AUF1和TGF?β1蛋白表达。结果：成功提取新生大鼠原代CFs且波形蛋白（Vimentin）显著阳性;与Con组比,AngⅡ组细胞增殖和胶原分泌增加,AUF1、TGF?β1 mRNA及蛋白表达水平升高;经Res干预后,AngⅡ+ Res组细胞增殖和胶原分泌水平较AngⅡ组降低,AUF1、TGF?β1 mRNA及蛋白表达减少;而DMSO组上述指标与Con组相比差异无统计学意义。结论：白藜三醇对AngⅡ诱导的乳鼠CFs的增殖和胶原分泌具有抑制作用,其机制可能与抑制了AUF1和TGF?β1的表达有关。     

萝卜硫素调控TGF-β1/Smad信号通路抑制结肠癌HT-29细胞增殖的机制研究

目的研究萝卜硫素对结肠癌HT-29细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK8分析萝卜硫素对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞术检测HT-29细胞凋亡,ELISA检测细胞培养液中转化生长因子β1（TGF-β1）的水平,Western blotting检测细胞中p-Smad3、Smad4、Cyclin D1及c-Myc蛋白表达。结果CCK8结果显示,随着药物浓度和作用时间的增加,萝卜硫素对HT-29细胞的增殖抑制作用增强（P < 0.05~P < 0.01）。10、20、40 μmol/L萝卜硫素干预HT-29细胞24 h,细胞凋亡率均高于对照组（P < 0.05~P < 0.01）。ELISA结果表明,药物处理HT-29细胞24 h,10、20、40 μmol/L萝卜硫素组细胞培养液中TGF β1水平均低于对照组（P < 0.05~P < 0.01）。与对照组相比,10、20、40 μmol/L萝卜硫素均能抑制p-Smad3、Smad4、Cyclin D1及c-Myc蛋白表达（P < 0.05~P < 0.01）。结论萝卜硫素可抑制结肠癌HT-29细胞的增殖,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

糖肾汤对ox-LDL诱导的大鼠系膜细胞增殖及TGFβ1表达的影响

[目的]观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的大鼠系膜细胞增殖及TGFβ1mRNA表达的作用。[方法]培养大鼠系膜细胞,分为空白对照组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,采用MTT法检测细胞增殖,用RT-PCR技术检测系膜细胞TGFβ1mRNA表达情况。[结果]50μg/ml的ox-LDL可促进细胞增殖和TGFβ1mRNA表达;糖肾汤和罗格列酮具有明显抑制ox-LDL诱导的MC增殖和TGFβ1mRNA表达增加的作用。[结论]糖肾汤可抑制ox-LDL诱导的MC增殖和TGFβ1表达的增加,从而在糖尿病肾病的治疗中起作用。     

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞酸性核糖体蛋白P0表达的影响

目的筛选转染人转化生长因子β1(TGFβ1)基因的大鼠系膜细胞相关反应性基因,并观察TGFβ1对其中之一的酸性核糖体蛋白P0的影响。方法筛选经SSHPCR和反向杂交法构建的大鼠系膜细胞TGFβ1相关反应性基因cDNA消减杂交库,并进行测序及与GenBank资料作同源性比较;分别用NorthernBlot、半定量RTPCR观察TGFβ1、酸性核糖体蛋白P0基因在培养的大鼠系膜细胞和动物模型体内表达的变化。结果经筛选获得的28个反应性基因cDNA片段,长度为59～535bp,其中7个片段均和已知酸性核糖体蛋白P0基因同源性一致。在转染TGFβ1的大鼠系膜细胞中P0基因mRNA表达增强;在大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎模型的病变肾组织中,P0基因mRNA和TGFβ1基因mRNA的上调表达趋势一致。结论酸性核糖体蛋白P0是一个与TGFβ1基因表达密切相关的基因,可能参与TGFβ1介导的肾小球肾炎和肾小球硬化的发生机制。     

丙泊酚对高糖诱导的肾小球系膜细胞转化生长因子－β和核转录因子－κB 表达的影响

目的：观察丙泊酚对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子－β（TGF －β）和核转录因－κB （NF －κB）表达的影响。方法在体外培养的系膜细胞上进行研究。设立正常葡萄糖对照组（糖浓度为5．6 mmol／L）、高糖组（30 mmol ／L）以及 PDTC 干预组（100μmol／L）和分别含丙泊酚12．5、50、100μmol／L 的干预组。用 ELISA法检测培养细胞上清中 TGF －β蛋白,以实时荧光定量 PCR 检测 TGF －βmRNA 的表达,Western blot 方法检测系膜细胞内磷酸化 NF －κBp65（p －NF －κBp65）蛋白的表达。结果高糖诱导系膜细胞24 h 后,TGF －β蛋白分泌明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚（12．5、50、100μmol ／L）对高糖诱导的系膜细胞分泌的 TGF －β的抑制作用随浓度的变化而变化;系膜细胞在低浓度葡萄糖水平下可低水平表达 TGF －βmRNA,高糖作用24 h 后,TGF －βmRNA 表达明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚可明显下调高糖诱导的 TGF －βmRNA 的表达（P ＜0．01）;在高糖作用1 h 后,系膜细胞内的 p －NF －κBp65蛋白表达增强（P ＜0．05）,丙泊酚能够部分抑制高糖诱导的系膜细胞 p －NF －κBp65蛋白增多（P ＜0．05）。结论在体外含高糖培养条件下,丙泊酚可以抑制 TGF －βmRNA 及蛋白在系膜细胞的表达,部分逆转高糖诱导的系膜细胞 NF －κB 的活化,提示丙泊酚对糖尿病肾病可能有抗炎、抗纤维化作用。     

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的：探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2（Frat2）通过Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法：选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应（Real-Time RT-qPCR）法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4 μmol·L^-1Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3（pGSK-3β）蛋白表达水平。结果：与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

过表达羧肽酶E对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的：探究羧肽酶E（carboxypeptidase E,CPE）对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、周期及凋亡的影响。方法：PCR法扩增CPE基因片段,将其插入表达载体 pcDNA3.1质粒中以构建重组质粒pcDNA3.1?CPE。将质粒转染GMC细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测CPE标签蛋白、增殖标志物细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）以及凋亡标记物Cleaved?caspase?3的表达;采用平板克隆、Cell Counting Kit?8（CCK?8）法以及流式分析法检测过表达CPE对高糖培养的GMC细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。结果：成功构建CPE过表达的GMC细胞。平板克隆以及CCK?8实验表明,过表达CPE可以抑制GMC细胞的增殖能力。流式细胞学检测表明,与对照组相比,CPE过表达明显促进了细胞凋亡;细胞周期中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义（P < 0.01）。结论：过表达CPE可以抑制高糖培养的小鼠GMC细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

TGF-β1在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用

目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1（TGF—β1）在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法（用血小板内皮细胞粘附分子1做免疫分选标记）纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧（含21％O2、5％CO2、74％N2）和低氧（含1％O2、5％CO2、94％N2）条件下培养1、4、7d，用核酸干扰法（RNAi）阻断TGF—β1的表达，用逆转录-聚合酶链式反应法（RT—PCR）和Western blot分别检测各组细胞TGF—β1 mRNA和蛋白的表达，并用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α—SM—actin）的表达，结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果低氧可增加肺动脉内皮细胞TGF—β1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．05），RNAi沉默TGF—β1基因表达后可明显降低其mRNA和蛋白含量（P〈0．05），随着低氧培养时间的延长，肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加（P〈0．05）；阻断TGF—β1表达后，平滑肌样细胞的转化率明显降低（P〈0．05）。结论肺动脉内皮中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞；低氧可明显促进转分化，TGF-β1在此转分化过程中起重要作用。     

TGF—β1参与全反式维甲酸对大鼠肾脏系膜细胞MMP—2表达的调节

目的 研究全反式维甲酸（ATRA）对于大鼠肾脏系膜细胞表达MMP－2的影响以及转化生长因子－β1在这一过程中的作用。方法 采用Northern blot、Western blot和Zymography法检测ATRA对培养大鼠肾脏系膜细胞MMP－2mRNA、蛋白分泌及酶活性表达变化;ATRA对系膜细胞表达TGF－β1的作用,以及TGF－β1至ATRA调节MMP－2表达的影响。结果 证实ATRA可增加培养大鼠肾脏系膜细胞的MMP－2mRNA表达、MMP－2蛋白分泌和增强MMP－2酶活性。ATRA也可引起TGF－β1多肽呈剂量依赖型增加。反义TGF－β1几乎可以完全阻断活性TGF－β1的分泌。经反义TGF－β1转染的系膜细胞在10^-6mol/L ATRA作用下,其表达MMP－2mRNA的水平不发生变化,但是加入抗TGF－β1抗体时,在10^-6mol/L ATRA作用下系膜细胞表达MMP－2呈剂量依赖型下降。结论 ATRA可上调培养大鼠系膜细胞的MMP－2mRNA、蛋白分泌和MMP－2酶活性的表达;TGF－β1参与ATRA对MMP－2表达的调节,并为ATRA调节MMP－2作用所必需。     

醛固酮及其受体拮抗剂对肾小球系膜细胞转化生长因子β1基因表达的影响

目的研究醛固酮（aldosteroen，ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（spironolactone，SPI）对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1（TGF-β1）基因表达的影响。方法以不同浓度的ALD（10^-11、10^～9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激系膜细胞24h后，应用半定量RT—PCR方法检测细胞TGF—β1 mRNA的表达；以10^-9mol／L浓度的ALD刺激系膜细胞不同时间（12h、24h、48h）后，应用半定量RT—PCR方法检测细胞TGF—β1 mRNA的表达。结果半定量RT—PCR结果显示，ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF—β1 mRNA的表达，且具有浓度依赖性和时间依赖性的特点，SPI能够拮抗ALD的作用。结论ALD促进肾小球系膜细胞TGF—β1的基因表达，进而导致肾小球硬化。SPI能够拮抗ALD的作用，从而可能有益于延缓肾小球硬化的进展。     

CCK对胆管癌细胞增殖及P21WAF1、P27KIP1基因表达的影响

目的：探讨胆囊收缩素（Cholecystokinin,CCK)促进胆管癌细胞增殖的可能机制。方法：采用细胞增殖计数法及流式细胞仪分析CCK对胆管癌细胞生长，增殖及细胞周期的影响，RT－PCR，Western印这法检测CCK对P21^WAF1,P27^KIP1基因表达的影响。结果：CCK具有显著促进无血清培养的胆管癌细胞的生长和增殖，加速细胞周期的进程，P21^WAF1,P27^KIP` mRNA和蛋白水平表达明显降低。结论：CCK促进胆管癌细胞增殖可能与下调细胞周期相关蛋白P21^WAF1,P27^KIP1的表达有关。