紫杉醇影响TGF⁃β1诱导的原代人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的：研究紫杉醇（paclitaxel，PTX）对重组人转化生长因子?β1（recombinant human transform growth factor?β1，rhTGF?β1）诱导人肺成纤维细胞（human lung fibroblasts，HLFs）向肌成纤维细胞转化的影响及其相关机制。方法：培养HLFs，药物处理分为对照组、TGF?β1组（5 ng/mL）、TGF?β1+PTX（0.01 nmol/L）组、TGF?β1+ PTX（0.1 nmol/L）组、TGF?β1+ PTX（1 nmol/L）组、PTX组（1 nmol/L）。采用CCK8法测定细胞活性；显微镜下观察并分析细胞形态学变化；Transwell实验检测细胞迁移能力；免疫荧光观察细胞内α?平滑肌肌动蛋白（α?SMA）表达及分布情况；real?time PCR和Western blot检测各组α?SMA、纤连蛋白（fibronectin）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（collagen Ⅲ）mRNA水平及蛋白含量；Western blot检测各组细胞内p?Smad3、Smad3、p?p38和p38蛋白含量。结果：CCK8结果显示，1 nmol/L PTX对细胞无毒性作用，0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs活性增加，0.1和1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs活性增加；细胞形态学结果显示，0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs胞体宽度增加，0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs胞体宽度增加；Transwell实验结果显示，0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs迁移，0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs迁移；免疫荧光结果显示，0.01 nmol/L PTX不能降低TGF?β1诱导的HLFs内α?SMA荧光强度，0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF?β1诱导的HLFs内α?SMA荧光强度；real?time PCR和Western blot结果显示，0.01 nmol/L PTX不能降低TGF?β1诱导的HLFs表型转化标志物α?SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagenⅢ含量及p38的磷酸化水平，0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF?β1诱导的HLFs表型转化标志物α?SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagen Ⅲ含量以及Smad3和p38的磷酸化水平。结论：紫杉醇可以抑制TGF?β1诱导原代HLFs向肌成纤维细胞表型转化，这种作用可能与抑制TGF?β/Smad/MAPK信号通路激活有关。