肝细胞肝癌(HCC)中PDGF-A的表达及其临床意义

 目的    阐明血小板源性生长因子A(platelet-derived growth factor A,PDGF-A)在人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法  在手术切除的50例HCC组织中,应用定量RT-PCR的方法检测PDGF-A mRNA水平,并分析其与临床病理分期之间的关系。采用Western blot检测正常肝细胞株L02和7株肝癌细胞株中PDGF-A蛋白质水平。运用免疫组化方法在43例HCC石蜡组织中检测PDGF-A蛋白质水平。再利用免疫荧光双染色方法检测HCC组织中间质区域炎症细胞中PDGF-A与炎症细胞标志物(CD4、CD8、CD19和CD68)共表达情况。结果    与相应癌旁肝组织相比,HCC癌组织PDGF-A mRNA水平升高,约50%(24/50例)癌组织PDGF-A mRNA水平是癌旁肝组织的2倍及以上,这种差异在BCLC 0期和C期的HCC病例中更为显著。PDGF-A蛋白质见于L02、SMMC-7721、HCCLM3和MHCC97-H细胞株,而HepG2、Hep3B、Huh7和BEL-7402细胞株未检测到该蛋白质。近60%的HCC病例中,肝癌细胞表达PDGF-A,阳性染色有两种分布方式:弥漫于胞质内及在细胞质/细胞膜局部聚集。PDGF-A也大量分布于肿瘤间质区域和紧邻癌组织间质区域的炎症细胞(CD4+、CD8+、CD19+和CD68+)中。结论    HCC癌组织PDGF-A基因表达高于癌旁肝组织,在早期和进展期(BCLC 0和C期)病例更为明显;PDGF-A蛋白表达于HCC癌细胞和间质炎症细胞。     

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞酸性核糖体蛋白P0表达的影响

目的筛选转染人转化生长因子β1(TGFβ1)基因的大鼠系膜细胞相关反应性基因,并观察TGFβ1对其中之一的酸性核糖体蛋白P0的影响。方法筛选经SSHPCR和反向杂交法构建的大鼠系膜细胞TGFβ1相关反应性基因cDNA消减杂交库,并进行测序及与GenBank资料作同源性比较;分别用NorthernBlot、半定量RTPCR观察TGFβ1、酸性核糖体蛋白P0基因在培养的大鼠系膜细胞和动物模型体内表达的变化。结果经筛选获得的28个反应性基因cDNA片段,长度为59～535bp,其中7个片段均和已知酸性核糖体蛋白P0基因同源性一致。在转染TGFβ1的大鼠系膜细胞中P0基因mRNA表达增强;在大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎模型的病变肾组织中,P0基因mRNA和TGFβ1基因mRNA的上调表达趋势一致。结论酸性核糖体蛋白P0是一个与TGFβ1基因表达密切相关的基因,可能参与TGFβ1介导的肾小球肾炎和肾小球硬化的发生机制。     

声脉冲辐射力成像评价大鼠肝纤维化的实验研究

目的 探讨声脉冲辐射力成像技术无创评价大鼠肝纤维化的价值.方法 应用二甲基亚硝胺对70只Wistar大鼠以50mg/kg的剂量一次性腹膜腔注射,复制大鼠肝纤维化模型作为实验组,10只Wistar大鼠腹膜腔一次性注射同等量生理盐水作为对照组.造模后于第5、7、10、14、21和28 d分别随机从实验组中取9～10只、对照组中取1～2只大鼠进行声脉冲辐射力成像检查,记录反映肝剪切波速度的声触诊组织量化值(shear wave velocity,Vs).随后处死大鼠,取其肝行病理分析.分析声触诊组织量化值与病理之间的关系.结果 58只大鼠造模成功,肝纤维化分级S1、S2、S3和S4者分别有9、13、14和12只,10只大鼠肝严重炎症坏死而无纤维化.声触诊组织量化值随着纤维化程度的增加而增大,各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05);Vs与肝纤维化病理分级间具有显著相关性(r =0.947,P=0.000);应用Vs诊断S≥S1、S≥S2、S≥S3和S=S4对应的ROC曲线下面积分别为0.983、0.995、0.999和0.964,对应的Vs临界值分别为1.59 m/s、2.13 m/s、2.33 m/s和2.51 m/s,敏感性分别为95.8％、92.3％、100％和84.6％,特异性分别为100％、100％、96.9％和95.6％.10只无纤维化但有严重炎症坏死的大鼠的Vs明显较无纤维化且无炎症坏死大鼠高(P=0.000).结论 声脉冲辐射力成像技术评价大鼠肝纤维化具有较高的价值,但严重的炎症坏死会影响其准确性.     

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞基质表达的影响

目的通过对大鼠系膜细胞(MsC)转染人TGF-β1基因，观察该基因对MsC表达细胞外基质成分的影响。方法采用脂质体介导法转染人TGF-β1基因至大鼠MsC，Western blot法鉴定；细胞爬片ABC免疫酶标法观察纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原、Ⅰ型胶原、层黏蛋白(LM)的表达，并对结果定量分析。结果重组质粒pcDNA3．0-TGF-β1成功转染至大鼠MsC，Western blot及免疫组化检测均证实TGF-β1蛋白表达增强；与正常的MsC相比，TGF-β1转染的MsC表达FN、Ⅳ型胶原增强，其差异有显著性意义；而Ⅰ型胶原、LM表达改变不明显。结论TGF-β1可通过对大鼠MsC ECM成分表达的影响，而在肾小球硬化的发生发展过程起着重要作用。     

中等分化肝细胞肝癌病理形态特征、PCNA和DNA指数与预后的关系

肝细胞肝癌 (ＨＣＣ)术后转移和复发率高 ,肿瘤细胞的分化是影响预后的重要原因 ,但即使同为中等分化的ＨＣＣ ,患者的生存期差异亦很大。我们收集 5 1例具随访资料的中等分化的ＨＣＣ病例 ,对其病理形态特征、ＰＣＮＡ指数、ＤＮＡ指数进行综合分析。1　材料与方法1 1　材料　上海中山医院 1989～ 1990年间病理诊断为中等分化ＨＣＣ的 5 1例手术切除标本 ,其中男性 48例 ,平均年龄 5 1 4± 11 1岁。收集其临床记录、标本的肉眼检验记录和随访资料 (包括半年 1次Ｂ超检查 ,随访截止至 1999年12月 )。用无瘤生存时间 (ｄｉｓｅａｓｅ ｆｒｅ…     

实时组织弹性成像定量评价大鼠肝纤维化

目的 分析应用实时组织弹性成像技术定量评价大鼠肝纤维化的可行性.方法 应用二甲基亚硝胺对70只Wistar大鼠以50mg/kg的剂量一次性腹膜腔注射,复制大鼠肝纤维化模型作为实验组,10只大鼠腹膜腔一次性注射同等量等渗盐水作为对照组.造模后于第5、7、10、14、21、28天分别随机从实验组中取9～10只、对照组中取1～2只大鼠进行超声弹性检查,记录蓝色区域百分比(％AREA)和肝纤维化指数(LF index).随后处死大鼠,取其肝脏行病理纤维化分期及炎症坏死程度分级.分析弹性特征参数与病理纤维化分期及炎症坏死程度的关系.计量资料(偏态)用中位数(四分位间距)表示;采用Spearman相关分析检验LF index、％AREA与肝纤维化病理分级间的相关性,采用多组间秩和检验检测不同肝纤维化组间的LF index、％AREA的差别并用最小显著差异法进一步行两两比较,对LF index和％AREA的诊断效率行受试者工作特征(ROC)曲线分析.结果 58只大鼠造模成功,其中肝纤维化分级为S1、S2、S3、S4的各有9、13、14、12只,伴或不伴有轻度炎症坏死,其余10只大鼠肝脏发生严重炎症坏死而无纤维化.LF index值和％AREA值均随着肝纤维化程度的增加而增大,各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05);Lfindex值、％AREA值与肝纤维化病理分期均具有一定相关性(r=0.643,P=0.000和r=0.662,P=0.000).应用LF index和％AREA诊断肝纤维化S1或更高分级纤维化,其ROC曲线下面积分别为0.943和0.948;用于诊断S2或更高分级纤维化,ROC曲线下面积分别为0.890和0.883;用于诊断S3或更高分级纤维化,ROC曲线下面积分别为0.743和0.772;用于诊断S4,ROC曲线下面积分别为0.821和0.842.10只S0伴严重炎症坏死的大鼠与S0无炎症坏死大鼠的Lfindex及％AREA差异均有统计学意义(p=0.005和P=0.017).结论 实时组织弹性成像技术可定量诊断大鼠肝纤维化,但严重的炎症坏死会影响其准确性.     

慢性病毒性肝炎肝组织病变的形态学特征

目的：探讨慢性病毒性肝炎肝组织炎症活动度,纤维化程度和肝细胞病变形态学特征的差异,方法：按1995年全国慢性肝炎诊断标准,对224例慢性肝炎患者的肝穿刺组织进行炎症活动度分级和纤维化分期;采用免疫组化法检测组织切片的乙型肝炎表面抗原（HBsAg),乙型肝炎核心抗原（HBcAg)及丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原（CP10）,并据此将患者分为乙型肝炎病毒（HBV）组,HCV组及HBV＋HCV组,比较各组患者炎症活动度分级,纤维化分期,肝细胞脂肪变性,细胞内胆,嗜酸小体及毛玻璃样肝细胞的差异。结果：HCV组患者的炎症活动度,纤维化程度及肝细胞内淤胆均较HBV组重,HBV＋HCV组患者的炎症活动度及纤维化程度介于HVB和HCV组之间,而肝细胞内淤胆比单独感染组轻,毛玻璃样肝细胞仅出现于HBV感染者中,脂肪变性及嗜酸小体在各组间无显著差异。结论：HCV引起的肝脏炎症活动度及纤维化程度较HBV重,合并感染的病变不比单独感染重;肝细胞内淤胆可能是肝损伤加重的重要因素之一。     

肝细胞肝癌颈后与病理特征、PCNA和DNA指数的关系

目的 研究肝细胞肝癌（HCC）患者预后与肿瘤的病理形态特征、PCNA指及DNA指数的关系。方法 分析51例中等分化HCC患者的临床、随访资料及病理形态特征;应用免疫组织化学方法检测其PCNA阳性指数;应用图像分析仪进行DNA指数测量。结果 癌灶单个,直径≤5cm,无癌栓、无肿瘤旁子灶及癌性坏死患者预相对较好;DNA整数倍体预后好于非整倍体,非整倍体中DI＜1.5者又好于＞1.5者;PCNA指数越高,患者预后越差;DI与PCNA指九有一定的相关,且两者与病理形态特征间也有关联。结论 进行病理形态学和PCNA、DNA指数的前瞻性综合分析是评估患者术后是否高危复发及其预后的有效方法。     

肝细胞肝癌预后与病理特征、PCNA和DNA指数的关系

目的　研究肝细胞肝癌 (HCC)患者预后与肿瘤的病理形态特征、PCNA指数及DNA指数的关系。方法　分析 5 1例中等分化HCC患者的临床、随访资料及病理形态特征 ;应用免疫组织化学方法检测其PCNA阳性指数 ;应用图像分析仪进行DNA指数测量。结果　癌灶单个 ,直径≤ 5cm ,无癌栓、无肿瘤旁子灶及癌性坏死患者预相对较好 ;DNA整数倍体预后好于非整倍体 ,非整倍体中DI<1.5者又好于 >1.5者 ;PCNA指数越高 ,患者预后越差 ;DI与PCNA指数有一定的相关 ,且两者与病理形态特征间也有关联。结论　进行病理形态学和PCNA、DNA指数的前瞻性综合分析是评估患者术后是否高危复发及其预后的有效方法     

200例慢性肝病患者肝穿刺活检组织病理学检查分析

目的 对肝穿刺活检组织病变程度进行正确的分级、分期,并比较肝病理分级和分期之间的关系以及肝组织原位病毒抗原与血清学病毒标志物检测的差异。方法 上海市肝纤维化协作组提供肝穿刺组织２００例,由我室３位病理医师按１９９５年全国标准分别进行病理分级、分期,其结果行统计学Ｋａｐｐａ检验。并分别采用ＰＡＰ和ＡＢＣ免疫酶标法对肝组织进行原位检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ及ＨＣＶＡｇ（ＣＰ１０）。结果 ３位病理医师分别进行的病理分级、分期的一致性极好,使其结果更具客观性和可信性;肝组织炎症活动性与肝纤维化程度密度在（Ｐ〈０．０１）;血清学ＨＢＶ标志物的检出率明显高于组织中的原位检出率,而血清学ＨＣＶ标志物的检出率却低于组织中ＨＣＶ抗原的阳性率。结论 肝组织病变程度的正确分级、分期为本课题组早期肝纤维同例建立非创伤性诊断指标提供了重