加味蒌石汤对肾阴虚型PCOS小鼠卵泡抑素及激活素的影响

摘要：目的 观察加味蒌石汤对肾阴虚多囊卵巢综合征（PCOS）模型卵泡抑素及激活素的影响,初步探究其作用机制。方法 将54只小鼠随机分为正常对照组,模型组,中药高、中、低剂量组,达英-35组6组,每组9只。采用“硫酸脱氢表雄酮（DHEA）联合甲状腺素及利血平”法制备肾阴虚型多囊卵巢综合征小鼠模型。除正常组外,其余各组予相应的药物浓度灌胃40天,观察小鼠一般情况、体重,酶联免疫吸附法（ELISA）测定小鼠血清性激素[血清睾酮（T）、雌二醇（E2）、促卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）]、FS、ACT、环磷酸腺苷（cAMP）及环磷酸鸟苷（cGMP）。结果 模型组小鼠较正常组与用药组出现不安定、多动、体毛稀疏、腹泻、消瘦等表现。实验前各组小鼠体重无统计学差异,实验后模型组小鼠体重低于正常对照组[（25.96±0.88）比（28.36±0.77）,P<0.05],中药高、中剂量组与达英-35组小鼠体重均高于模型组[（28.25±0.55）、（27.68±1.21）、（28.08±0.50）比（25.96±0.88）,P<0.05];模型组血清T、LH、FS、cAMP/cGMP高于正常对照组[（146.30±4.04）比（134.36±2.30）,（1772.66±122.37）比（1409.02±47.88）,（45.07±5.63）比（34.59±2.52）,（1.85±0.37）比（1.28±0.15）,P<0.01],ACT模型组低于正常对照组[（6.12±0.63）比（6.87±0.87）,P<0.05],血清FS水平中药高、中、低剂量组与达英-35组均低于模型组[（36.27±3.05）、（38.33±2.47）、（39.27±4.09）、（36.64±2.55）比（45.07±5.63）,P<0.01],ACT水中药高、中、低剂量组与达英-35组均高于模型组[（6.96±0.60）、（6.90±0.81）、（6.86±0.48）、（7.14±0.73）比（6.12±0.63）,P<0.01或P<0.05],cAMP/cGMP比值中药高、中、低剂量组与达英-35组均低于模型组[（1.36±0.10）、（1.48±0.11）、（1.67±0.08）、（1.42±0.11）比（1.85±0.37）,P<0.01]。结论 加味蒌石汤能有效调节肾阴虚PCOS模型小鼠性激素水平,改善肾阴虚状态,降低FS含量和cAMP/cGMP比值,提高ACT含量,促进卵泡发育。     

化瘀通络灸对VD大鼠体外干预HUVEC-12细胞VEGF、b FGF蛋白表达的影响

目的 观察化瘀通络灸对VD 大鼠血清体外干预HUVEC-12 细胞VEGF、bFGF 蛋白表达的影响。方法 采用四血管阻断法制造VD 大鼠模型,随机分为艾灸组、模型组、西药组,另设假模型组作为对照,艾灸组采用化瘀通络灸法,取百会、神庭、大椎艾灸,西药组茴拉西坦灌胃,每日一次,治疗2 个疗程,采用跳台实验检测各组神经行为学评分。取艾灸组、模型组、假模型组VD 大鼠的血清体外培养HUVEC-12 细胞,另设平行培养液组作为对照,采用Western blot 法检测各组VEGF、bFGF 的蛋白表达。结果 治疗结束后,与模型组潜伏期为（36.25±10.71）s、错误次数为（6.19±0.74）次、神经行为学评分为（3.00±0.53）分比较,艾灸组和西药组的潜伏期为（232.31±22.25）s 和（201.38±13.12）s,均延长（P＜0.01）;错误次数为（1.00±0.56）次和（2.53±0.84）次及神经行为学评分为（1.00±0.56）分和（1.74±0.47）分,均降低（P＜0.01）。艾灸组和西药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组、假模型组、平行液组比较,艾灸组的HUVEC-12 细胞VEGF、bFGF 的蛋白表达水平（0.84±0.09）和（0.87±0.05）较高,有显著差异（P＜0.01）。结论 化瘀通络灸法能够明显提高VD 大鼠学习记忆能力,增强HUVEC-12 的VEGF、bFGF 的蛋白表达,其治疗VD 可能与其促血管生成作用相关,为针灸治疗VD 提供理论依据。     

血管性痴呆小鼠海马CA1区CalpainⅠ表达的变化

目的探讨脑缺血—再灌注后不同时期血管性痴呆(VD)小鼠海马CA1区病理改变及CalpainⅠ表达的变化。方法243只雄性昆明小鼠随机分为假手术组(99只)和模型组(144只),VD动物模型采用双侧颈总动脉反复缺血—再灌注合并尾端放血的方法制备;分别于造模后第4周、6周和8周测试小鼠的学习和记忆成绩,HE染色观察小鼠海马CA1区正常神经元计数,免疫组化方法观察CalpainⅠ的表达。结果造模后4周、6周和8周时模型组小鼠的学习、记忆成绩均明显劣于假手术组小鼠(P<0.05)。假手术组海马CA1区单位面积正常神经元计数分别为(102±15)个、(108±11)个和(101±12)个;模型组分别为(65±19)个、(21±3)个和(50±11)个,较假手术组均显著降低(P<0.05),其中以造模后6周损害最严重,较模型组造模后4、8周时也显著减少(P<0.05)。假手术组造模后4周、6周和8周时小鼠海马CA1区CalpainⅠ的平均OD值分别是0.030±0.003、0.031±0.003和0.029±0.003;模型组CalpainⅠ的平均OD值分别是0.099±0.009、0.121±0.010和0.115±0.010,较假手术组均显著增高(P<0.05),尤以术后6周时增高明显。结论脑缺血—再灌注6周时海马CA1区神经元损害最严重,CalpainⅠ参与了脑缺血—再灌注后小鼠VD的发生。     

血管性痴呆小鼠海马神经元蛋白激酶C表达特征

目的观察血管性痴呆(VD)小鼠海马神经元蛋白激酶C(PKC)的变化特征。方法将3月龄雄性昆明小鼠60只随机分为假手术组、模型组。模型组采用双侧颈总动脉结扎、反复缺血再灌注法制备VD模型,假手术组仅暴露双侧颈总动脉但不结扎。术后第29天、30天,采用跳台实验和水迷宫实验测试2组小鼠行为学改变,并采用免疫组织化学法观察2组海马CA1区神经元PKC表达的变化。结果模型组小鼠在跳台实验和水迷宫实验中的学习、记忆成绩均低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组小鼠PKC免疫反应阳性神经元平均光密度值(0.27±0.07),显著低于假手术组(0.32±0.06),差异有统计学意义(P<0.05)。结论VD小鼠海马神经元PKC表达减少,推测此现象参与了VD发病过程。     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠认知功能及海马细胞凋亡、磷酸化p38MAPK表达的影响

目的 观察应用丁苯酞对血管性痴呆大鼠认知功能、海马细胞凋亡及p38MAPK磷酸化的影响,以探讨其机制.方法 用两血管法（2VO）建立血管性痴呆（VD）模型.将60只3月龄雄性Wistar大鼠随机分成VD模型组、假手术组和丁苯酞组.丁苯酞组给予120 mg·kg-1·d-1的丁苯酞溶液2 ml灌胃,VD组和假手术组给予等量的2 ml植物油灌胃,1月后应用Morris水迷宫实验分别测试各组大鼠的学习记忆能力,TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡,蛋白印迹（Westem blot）法观察大鼠海马区p38MAPK磷酸化变化.结果 前3d丁苯酞组隐蔽平台逃避潜伏期[分别为（48.72±7.01）s,（42.41 ±4.06）s,（40.34±2.46）s],明显小于模型组隐蔽平台逃避潜伏期[（82.71±8.27）s,（80.36±9.65）s,（77.74±6.33）s],差异有统计学意义（P＜0.01）;丁苯酞组原平台象限时间、穿越原平台次数[（26.45±4.66）s,（1.84±0.82）次],大于模型组原平台象限时间、穿越原平台次数[（18.67±5.39）s,（1.32±0.61）次],差异有统计学意义（P＜0.01）.大鼠海马区细胞凋亡、磷酸化p38MAPK的表达（p-p38MAPK/β-action光密度值）的比较：丁苯酞组分别为[（153.65±9.85）个,（0.42±0.04）],明显低于VD模型组[（209.46± 11.49）个,（0.88±0.10）],差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 丁苯酞能显著改善VD大鼠的学习记忆能力,可能是通过抑制p38MAPK通路,进一步抑制海马区细胞凋亡而实现的,这可能是丁苯酞治疗血管性痴呆的作用机制之一.     

针刺水沟穴对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑血管平滑肌的影响

摘要：目的：探讨电针水沟穴对脑梗死大鼠脑血管平滑肌钙样蛋白(Calponin)和钙调结合蛋白(Caldesmon)表达的影响。方法：78只雌性Wistar大鼠随机分为空白组6只、模型组(24只)、电针组(24只)、假手术组(24只)、后三组在造模后又分为0.5h、1h、3h、6h四个时相各6只。模型组、电针组以线栓法复制大脑中动脉栓塞模型，假手术组不插入线栓，空白组除抓取固定外不做任何处理。电针组在造模后即电针"水沟"穴20min，空白组、假手术组、模型组均同样抓取固定但不做其他处理。各组动物均按时相处死，采用免疫印迹法检测大鼠脑血管平滑肌Calponin和Caldesmon蛋白的表达。结果：与假手术组相比，模型组1h、3h、6h Calponin表达量下调[（0.68±0.17）比（0.89±0.12）、（0.40±0.17）比（0.89±0.08）、（0.32±0.01）比（0.97±0.06），P均＜0.05]，与模型组相比，电针组Calponin 3h、6h表达量均上调[（0.73±0.09）比（0.40±0.17）、（0.69±0.03）比（0.32±0.01），P均＜0.05]；与假手术组相比，模型组1h、3h、6h Caldesmonn表达量下调[（0.70±0.06）比（1.04±0.16）、（0.61±0.24）比（0.82±0.08）、（0.51±0.19）比（0.83±0.04），P均＜0.05]，与模型组相比，电针组1h、3h、6h Caldesmonn表达量均上调[（0.80±0.10）比（0.70±0.06）、（0.73±0.06）比（0.61±0.24）、（0.60±0.06）比（0.51±0.19），P均＜0.05]。结论：电针水沟穴可以抑制脑梗死大鼠脑血管平滑肌收缩关键蛋白Calponin和Caldesmon下降。     

[Gly14]-Humanin对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应及细胞凋亡的影响

目的探讨Humanin衍生物（[Gly14]-Humanin,HNG）预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应、细胞凋亡的影响及其机制。方法将96只健康雄性SD大鼠按随机数字法分为HNG组、生理盐水组、模型组及假手术组,每组24只。采用改良的Zea-longa线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,HNG组大鼠术前5d给予HNG（2滋l/kg）,生理盐水组与假手术组大鼠予0.9%氯化钠溶液（2ml/kg）,均为股静脉注射,1次/d;模型组不作处理。各组大鼠在再灌注24h后进行神经功能缺损评分（NDS）,采用ELISA法测定大鼠脑组织核因子-资Bp65（NF-资Bp65）及干扰素-酌（IFN-酌）水平,原位末端标记染色观察凋亡细胞数及尼氏染色检测健存神经细胞数。结果HNG组、生理盐水组、模型组及假手术组NDS分别为1.5（1.0,2.0）分、3.0（2.0,3.0）分、3.0（2.0,3.0）分和0.0（0.0,0.0）分,假手术组NDS低于另外3组,HNG组NDS低于模型组和生理盐水组（均P＜0.05）。与假手术组比较,HNG组、生理盐水组及模型组大鼠的NF-资Bp65水平[（13.48±0.85）、（22.15±0.96）、（22.62±0.64）pg/mg],IFN-酌水平[（5.17±0.67）、（10.83±0.34）、（10.81±0.19）pg/mg]及凋亡细胞的百分率[（48.09±7.62）%、(70.19±8.33）%、（69.02±9.07）%]均较高,不重叠高倍镜视野中尼氏小体的数量[（10.57±0.51）、（5.16±0.56）和（5.65±0.98）个]较少,差异有统计学意义（P＜0.05）;HNG组大鼠的NDS、NF-资Bp65和IFN-酌水平及细胞凋亡率均低于生理盐水组及模型组,尼氏小体数多于生理盐水组及模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）;HNG组大鼠IFN-酌与NF-资Bp65水平呈正相关（r=0.873,P＜0.01）。结论[Gly14]-Humanin可抑制脑缺血再灌注损伤过程中的局部炎症反应、减少细胞的凋亡,从而减轻临床神经功能的缺损。其机制可能与下调脑组织NF-κBp65的释放,进一步减少IFN-γ的表达有关。     

滋肾活血法联合低分子肝素改善小鼠复发性流产及对VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路的影响

目的 通过观察滋肾活血法联合低分子肝素对复发性流产小鼠流产率及蜕膜中血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体2/磷酸化的细胞外调节蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶（VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK）信号通路的影响,以探讨其作用机制。方法 68只未孕CBA/J雌鼠,26只DBA/2雄鼠,8只BALB/c雄鼠,按雌：雄=2：1,建立CBA/J×DBA/2习惯性流产小鼠模型50只,随机数字法分为模型组（蒸馏水）、LMWH组（1000U/kg）、滋肾活血方低剂量（3.9g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方中剂量（11.7g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方高剂量（35.1g/kg）+LMWH（1000U/kg）组,每组10只;建立CBA/J×BALB/c正常妊娠小鼠模型10只作为正常对照组（蒸馏水）。按照人鼠体表面积换算每日滋肾活血方灌胃药量和LMWH注射量,给药干预2周。计算各组小鼠胚胎丢失率;免疫组化法测定小鼠蜕膜中VEGF蛋白的表达;蛋白质印迹法（Western blot）测定小鼠蜕膜中VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK表达。结果 与正常对照组比较,模型组胚胎丢失率上升（38.38%比7.29%,P<0.05）,该组免疫组化VEGF蛋白平均光密度值降低[（0.22±0.07）比（0.23±0.01）,P<0.01],该组WB结果显示VEGF、VEGFR-2蛋白表达下降[VEGF：（2.01±0.08）比（2.90±0.06）;VEGFR-2：（2.62±0.01）比（3.15±0.08）,P均<0.05]。与模型组比较,LMWH组、滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组和滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率下降（23.76%、16.83%、12.75%、10.10%比38.38%,P均<0.05）,免疫组化结果显示上述4组的VEGF蛋白平均光密度值上升[（0.24±0.04）、（0.29±0.02）、（0.32±0.06）、（0.33±0.10）比（0.22±0.07）,P均<0.05],WB结果显示上述4组的VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升[VEGF：（3.13±0.09）、（2.93±0.73）、（3.31±0.18）、（3.38±0.15）比（2.01±0.08）;VEGFR-2：（3.19±0.02）、（3.53±0.10）、（3.77±0.12）、（3.83±0.09）比（2.62±0.01）;p-ERK：（1.57±0.35）、（1.79±0.06）、（1.73±0.07）、（1.75±0.06）比（1.39±0.04）;ERK：（3.82±0.08）、（4.22±0.09）、（4.24±0.04）、（4.19±0.27）比（3.42±0.14）,P均<0.05]。与LMWH组比较,滋肾活血方低剂量+LMWH组胚胎丢失率无明显差异（P＞0.05）,滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率降低更显著（P均<0.05）;免疫组化结果显示VEGF蛋白平均光密度值在滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组上升（P均<0.05）;WB结果显示上述3组的VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升（P均<0.05）,VEGF蛋白表达无明显差异（P均>0.05）。结论 滋肾活血法联合LMWH能够改善复发性流产小鼠妊娠结局,其机制可能与激活VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路有关。     

巴戟天醇提物通过MAPK/ERK信号通路对脑缺血再灌注大鼠的保护作用

目的 探究巴戟天醇提物（radix morindae officinalis ethanolic extracts,RMOEE）对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及分子机制。方法 将大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、RMOEE低、中、高（3、6、12 g/kg）剂量组,每组8只。采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型,RMOEE加药组按相应的剂量灌胃给药。给药21天后,采用Zea Longa法对各组大鼠进行神经功能评分,并检测脑含水量;酶联免疫法检测大鼠缺血侧脑组织中炎症因子表达;TTC染色法测定大鼠脑梗死体积百分比;HE染色法检测大鼠脑神经元病理学改变;TUNEL染色检测大鼠脑组织凋亡;Western blot检测相关蛋白表达情况。结果 与模型组相比,RMOEE各加药组能够减小Zea Longa评分[（2.2±0.3）分、（1.9±0.3）分、（1.5±0.3）分比（3.6±0.4）分,P均<0.05];并且与模型组相比,RMOEE中、高剂量组大鼠脑含水量明显减小[（80.2±4.3）%、（73.4±2.8）%比（88.5±1.9）%,P均<0.05],脑梗死体积百分比明显降低[（35.9±0.3）%、（18.5±0.3）%比（45.6±5.4）%,P均<0.05],脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1及VCAM-1的表达水平显著降低[TNF-α：（668.78±25.12）nmol/L、（488.02±40.28）nmol/L比（783.76±44.42）nmol/L;IL-1β：（540.92±22.98）nmol/L、（413.22±20.71）nmol/L比（680.61±39.74）nmol/L;ICAM-1：（255.40±14.25）pg/mL、（201.42±21.42）pg/mL比（292.26±16.32）pg/mL;VCAM-1：（42.20±3.83）pg/mL、（35.71±2.18）pg/mL比（54.90±5.56）pg/mL,P均<0.05];RMOEE各加药组脑神经元的病理学改变得到有效改善,脑组织细胞凋亡率明显降低[（40.80±1.90）%、（35.36±1.80）%、（29.60±1.53）%比（48.90±2.80）%,P均<0.05],MAPK/ERK信号通路相关蛋白表达降低[p-MAPK1/2：（1.99±0.13）、（0.66±0.09）比（2.62±0.21）;p-ERK1/2：（0.99±0.06）、（0.78±0.04）比（1.78±0.20）,P均<0.05]。结论 RMOEE通过调控MAPK/ERK信号通路,降低炎症因子表达以及抑制凋亡,进而对大鼠的脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。     

反复缺血再灌注制备小鼠血管性痴呆模型的评价

目的对应用反复缺血再灌注法制备的小鼠血管性痴呆(VD)模型进行评价,为VD的基础研究提供较为理想的动物模型。方法50只小鼠随机分为模型组(n=30)和假手术对照组,模型组采用双侧颈总动脉丝线结扎方法、经连续3次反复缺血再灌注,制备VD模型;对照组仅分离双侧颈总动脉,但不阻断血流。测试2组小鼠的学习记忆成绩;光学显微镜下观察海马CA1区神经细胞形态学变化,并采用免疫组化技术观测该区胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的变化。结果跳台试验中模型组小鼠术后第29d的反应时间(125.4±32.5)s较对照组(24.9±2.9)s明显延长(P<0.01),错误次数增多(P<0.01);术后第30d的潜伏时间(80±29)s较对照组(200±37)s明显缩短(P<0.01),错误次数增多(P<0.01)。水迷宫试验中模型组小鼠术后第29d、30d游完全程时间[(143±17)s,(162±11)s]较对照组[(68±8)s,(52±5)s]明显延长(P<0.01),错误次数增多(P<0.01)。海马CA1区ChAT免疫组化观察中模型组阳性神经元面密度值为0.086±0.009,较假手术组(0.123±0.015)明显降低(P<0.01)。结论反复缺血再灌注法制备的小鼠模型是研究血管性痴呆较为理想的动物模型。     

自噬相关基因Atg12和LC3-Ⅱ在脑缺血再灌注大脑表达的实验研究

目的：探讨局灶性脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIR）时大脑皮质自噬相关蛋白-12（autophagy related protein-12,Atg12）和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ（autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ）的激活规律,在此基础上探讨其对脑组织自噬的影响。方法：实验分为假手术组（sham组）和缺血再灌注组（CIR组）,且CIR组下设CIR 0、6、12、24、48、72h共6个亚组。除sham组和CIR 24h组为每组20只外（其中10只用于模型鉴定）,其余为每组10只。采用大脑中动脉栓塞术制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后采用神经功能评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色、脑组织含水量来鉴定脑缺血模型是否成功。采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Atg12和LC3-Ⅱ的表达规律。结果：与sham组比较,CIR 24h组可见明显的神经功能缺损、脑梗死和明显的脑水肿。免疫组化结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[阳性率分别为（15.49±4.18）%、（18.54±3.62）%],在24~48 h达高峰[（33.63±3.26）%、（29.62±1.73）%],72 h之后逐渐减弱[（24.90±3.96）%、（20.36±3.51）%]。免疫印迹结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[表达量为（0.372 3±0.076 5）、（0.148 4±0.011 5）],在24~48 h达高峰[（0.741 7±0.071 8）、（0.451 3±0.019 0）],72 h之后逐渐减弱[（0.365 0±0.042 0）、（0.245 1±0.030 3）]。结论：脑缺血时Atg12和LC3-Ⅱ在调节脑缺血的脑组织自噬方式中具有重要的作用。     

脊髓背角环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白在大鼠炎性痛中的作用

【摘要】 目的 探讨大鼠脊髓背角环磷酸腺苷（cAMP）直接激活的交换蛋白（Epac）在炎性痛调节过程中的作用。方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠84只,3月龄,体重230~250 g,其中非模型鼠20只,模型鼠64只;采用双侧后爪趾底皮下注射弗氏完全佐剂（CFA）100 μL建立炎性痛模型（以下称为建模）。采用Western blot法于建模前、建模后1、3、6、9、14天大鼠脊髓腰膨大检测Epacl、Epac2蛋白相对含量,每组4只;采用免疫荧光法检测脊髓背角Epacl阳性细胞数,每组4只。实验随机分为三组：对照组（C组）、生理盐水组（NS组）和Epac激动剂组（8p-CPT组）,每组12只,C组为非模型鼠,未做任何处理,NS组和8p-CPT组为模型鼠,分别于建模后6天,鞘内给予NS、Epac激动剂8p-CPT（8p-CPT-2′-O-Me-cAMP）10 μL（以下称为给药）。于建模前1 h、给药前1 h、给药后30 min、1 h、2 h和3 h测定热刺激缩足潜伏期（TWL）,观察大鼠痛行为学变化;于给药后1 h采用免疫荧光法检测三组大鼠脊髓背角即刻早期基因蛋白c-Fos阳性细胞数。结果 建模后3、6天脊髓腰膨大Epacl蛋白相对含量明显低于建模前和建模后1天（0.74±0.09和0.77±0.08分别比1.00±0.00和 0.99±0.07,P < 0.05）,Epac2蛋白相对含量各时点差异均无统计学意义。建模后3、6、9、14天脊髓背角Epac1阳性细胞数明显低于建模前[（34.25±4.99）个、（24.00±8.04）个、（31.50±3.51）个和（43.00±8.98）个分别比（61.75±4.99）个,P < 0.05],建模后3、6、9天脊髓背角Epac1阳性细胞数明显低于建模后1天[（34.25±4.99）个、（24.00±8.04）个和（31.50±3.51）个分别比（58.00±5.35）个,P < 0.05]。给药前1 h、给药后30 min、1 h、2 h和3 h NS组和8p-CPT组TWL均明显低于C组[（6.8±1.0）s和（7.1±0.8）s分别比（13.3±1.6）s,（7.3±0.9）s和（9.2±1.0）s分别比（13.2±1.5）s,（6.9±1.2）s和（9.9±1.3）s分别比（13.9±1.8）s,（7.0±0.7）s和（8.7±1.2）s分别比（13.2±1.2）s,（7.1±0.9）s和（7.0±0.9）s分别比（13.2±1.4）s,P < 0.05],给药后30 min、1 h和2 h 8p-CPT组TWL均明显高于NS组[（9.2±1.0）s比（7.3±0.9）s,（9.9±1.3）s比（6.9±1.2）s,（8.7±1.2）s比（7.0±0.7）s,P < 0.05]。给药后1 h NS组和8p-CPT组脊髓背角c-Fos阳性细胞数明显高于C组,8p-CPT组脊髓背角c-Fos阳性细胞数明显低于NS组[（75.25±8.42）个和（40.50±6.81）个分别比（25.25±5.25）个,（40.50±6.81）个比（75.25±8.42）个,P < 0.05]。结论 CFA诱导的慢性炎性痛可以降低脊髓背角Epac1蛋白含量、引起局部神经元异常激活、增强外周伤害性刺激应激反应。     

川芎嗪对脓毒症小鼠肝组织铁调素的表达调控及机制研究

目的探讨川芎嗪对脓毒症小鼠肝组织铁调素的表达调控及保护机制研究。方法将44只C57BL/6J雄性小鼠按随机数字表法分为假手术组、肠穿孔手术（CLP）组、CLP+铁调素抑制剂组和CLP+川芎嗪组,每组各11只。后3组小鼠开腹、结扎并穿刺盲肠制作CLP模型。术后12h取1只CLP组小鼠检测血液载菌量和腹腔液载菌量评估造模情况;观察4组小鼠术后4d生存率,采用ELISA法检测血清生化指标和炎症因子水平情况,采用Westernblot法检测肝组织中铁调素和磷酸化JAK/STAT（p-JAK/STAT）蛋白的表达。结果假手术组小鼠术后12h在血液和腹腔液中均未检测到细菌。CLP组小鼠模型建立评价结果显示,术后12h血液和腹腔液载菌量分别为（15.0±1.3）×103/ml和（8.6±1.0）×103CFU/ml。假手术组小鼠术后4d内无死亡,CLP+铁调素抑制剂组和CLP+川芎嗪组小鼠CLP术后4d生存率分别为75.0%（6/8）和87.5%（7/8）,高于CLP组0.0%（0/8）,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。CLP+铁调素抑制剂组与CLP+川芎嗪组小鼠术后48h血清ALT、AST、TNF-琢、IL-1、IL-6和铁调素水平均显著低于CLP组,且CLP+川芎嗪组小鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6水平显著低于CLP+铁调素抑制剂组,铁调素水平显著低于CLP+铁调素抑制剂组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。CLP+铁调素抑制剂组和CLP+川芎嗪组术后48h肝组织铁调素表达水平显著低于CLP组,高于假手术组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;而CLP+铁调素抑制剂组p-STAT和p-JAK蛋白表达水平与CLP组相比,差异均无统计学意义（均P＞0.05）;CLP+川芎嗪组p-STAT和p-JAK蛋白表达水平显著低于CLP+铁调素抑制剂组和CLP组,高于假手术组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论川芎嗪能够通过抑制JAK/STAT磷酸化而减少铁调素在小鼠肝组织中的表达,从而减轻肝脏损及全身炎性损伤。     

润燥活血法对干燥综合征小鼠血清及颌下腺M3R表达的影响

目的 通过观察干燥综合征(sjogren syndrome,SS)小鼠血清及颌下腺毒蕈碱样乙酰胆碱3型(M3R)的表达,探讨润燥活血法对其的影响及作用机理。方法 选用BALB/c小鼠47只,随机分为正常对照组（正常组,n=10）和造模组（n=37）。取5只BALB/c小鼠处死取颌下腺制备抗原进行造模。造模组采用背部皮内5个部位多点注射抗原的方法进行免疫,建立SS模型。在造模后第5周随机选取2只造模小鼠处死,通过病理形态学观察判定造模成功。造模成功后随机分为模型组（n=10）、中药组（n=10）和HCQ组（n=10）。分别灌胃给药：中药组按11.4g/kg/d剂量灌胃中药解毒通络生津汤,模型组灌胃等量生理盐水,HCQ组小鼠按0.06g/kg/d剂量灌胃HCQ混悬液（HCQ与生理盐水混合液）,均每日1次,正常组正常饲养。同时测定小鼠唾液量、饮水量。连续用药30天后处死,取各组小鼠颌下腺、脾及血清。采用苏木素-伊红（HE）染色评价颌下腺淋巴细胞浸润情况,采用ELISA法测定标本血清M3R水平,免疫组化法检测颌下腺M3R表达水平。结果 与正常组比较,模型组血清、颌下腺M3R表达增加,颌下腺淋巴细胞浸润明显[（12.23±10.10,2.23±0.11,2.42±0.22）比（2.72±1.21,1.21±0.11,0.18±0.05）,P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01];与模型组比较,中药组、HCQ组血清、颌下腺M3R表达减少,颌下腺淋巴细胞浸润减轻[（3.30±6.25,1.62±0.40,1.21±0.33）,（3.17±0.87,1.53±0.06,1.08±0.09）比（12.23±10.10,2.23±0.11,2.42±0.22）,均P＜0.05];中药组和HCQ组之间比较无差异[（3.30±6.25,1.62±0.40,1.21±0.33）比（3.17±0.87,1.53±0.06,1.08±0.09）,均P＞0.05]。与治疗前比较,中药组小鼠唾液量增加[（25.53±4.27mg）比（22.17±1.50mg）,P＜0.05]。结论 润燥活血法可能通过下调M3R表达,从而抑制颌下腺淋巴细胞浸润,改善腺体分泌能力,阻止SS进展。     

电针对血管性痴呆小鼠海马神经元c-fos表达的影响

目的观察电针对血管性痴呆(VD)小鼠海马神经元凋亡及相关基因cfos表达的影响。方法以反复脑缺血再灌注法复制VD小鼠模型,电针肾俞、膈俞和百会穴,对照组灌胃喜得镇,分别于治疗1d和7d后,以FCM法检测小鼠海马细胞凋亡率、cfos表达。结果术后1d,模型小鼠海马细胞凋亡率(6.86±1.10)较假手术组(3.59±0.70)明显增高(P<0.01),术后7d(13.49±1.72)较术后1d还高(P<0.01)。术后1d,模型小鼠海马细胞cfos表达(1.08±0.33)较假手术组(1.00±0.25)有升高趋势(P>0.05),7d时(2.65±0.29)则显著升高(与术后1d和假手术组比较,均P<0.01)。电针在两个时点均可上调小鼠海马细胞cfos的表达(2.26±0.31,3.76±0.41),降低细胞凋亡率(3.68±1.48,6.36±1.52),与模型组相比均差异有显著性(P<0.01)。结论电针具有抑制细胞凋亡、保护神经元的作用,这可能是电针改善VD小鼠智能的作用机理之一。     

硝普钠与尼莫地平治疗大鼠脑出血损伤的疗效及与凝血酶受体-1表达的相关研究

的探讨硝普钠与尼莫地平治疗大鼠脑出血（ICH）,降低大鼠脑血肿及脑出血后神经元损伤的疗效及与凝血酶受体-1（PAR1）表达的相关性。方法用30 只雄性Wista 大鼠（200～220 g）复制脑出血ICH 模型,并随机分为3 组（每组10 只）,分别是假手术组、脑出血组和联合治疗组。大鼠于ICH手术成功后48 h处死,收集大鼠脑组织备用。采用TUNEL法检测细胞凋亡的发生;干燥法检测大鼠脑组织水含量;采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法Western blot检测PAR1 蛋白的表达。结果与假手术组比较,脑出血组和联合治疗组中凋亡细胞数和脑组织水含量增多（均p=0.000）,而联合治疗组中凋亡细胞数和脑组织水含量低于脑出血组（均p=0.000）;与假手术组PAR1 蛋白含量（0.673±0.121）比较,脑出血组PAR1 蛋白含量（2.187±0.233）和联合治疗组PAR1 蛋白含量（1.434±0.168）上升,差异有统计学意义（p =0.000）,与脑出血组比较,联合治疗组PAR1 蛋白含量下降,差异有统计学意义（p =0.000）;Western blot结果与免疫组织化学结果一致。结论硝普钠与尼莫地平通过对PAR1 的调控治疗大鼠脑出血损伤,具有神经保护作用。     

醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的影响

目的 探讨中药醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的影响.方法 将120只昆明种小鼠随机分为假手术组、模型组、醒脑液高剂量组、醒脑液低剂量组、银杏叶液对照组、尼莫地平液对照组,每组20只,采用双侧颈总动脉结扎反复脑缺血再灌注的方法制备血管性痴呆小鼠模型.术后15 d进行行为学实验和脑组织的病理形态学观察,并用流式细胞术检测各组海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的含量.结果 （1）行为学实验显示,模型组小鼠学习成绩与记忆成绩下降,各治疗组小鼠的学习成绩与记忆成绩均有提高（P＜0.05）.（2）光镜下病理形态学显示,术后模型组小鼠脑组织海马区呈缺血性病理改变,各治疗组小鼠病变轻于模型组.（3）流式细胞术检测显示：模型组小鼠脑组织海马细胞Bcl-2和Bax蛋白含量高于假手术组（P＜0.01）,但二者的比值低于假手术组（P＜0.01）;各用药组与模型组比较,Bax蛋白降低（P＜0.01）,Bcl-2蛋白与Bcl-2/Bax的比值升高（P＜0.05）.结论 醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠有明显治疗作用,其作用机制之一是调节海马细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达.     

温阳消癥方对单侧输尿管梗阻小鼠I型与III型胶原表达的影响

目的：观察单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠的I型胶原（Col-I）及III型胶原（Col-III）的信使核糖核酸（Messenger RNA,mRNA）及蛋白的表达,探讨温阳消癥方对肾间质纤维化的影响。方法：32只C57小鼠随机分为四组：假手术组、模型组、缬沙坦组、温阳消癥组,后三组采用单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化模型。造模成功后缬沙坦组给予缬沙坦水悬液灌胃（浓度4.9g/mL,给药剂量16.5mg/kg）;温阳消癥组给予温阳消癥方水煎剂灌胃（浓度4.9 g/mL,给药剂量49g/kg）,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,治疗14天后处死各组小鼠并留取左侧肾组织标本,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（Real-time Quantitative PCR,Rt-qPCR）和蛋白免疫印迹法（Western Blot）法分别检测并分析Col-I、Col-III mRNA及蛋白表达的情况。结果：模型组Col-I、Col-III mRNA及蛋白表达均较假手术组显著上调［Col-I mRNA：（6.85±0.22）比（1.03±0.11）;Col-III mRNA：（6.21±0.19）比（1.09±0.14）;Col-I蛋白：（6.23±0.24）比（1.09±0.13）;Col-III蛋白：（16.99±0.13）比（1.01±0.07）;P<0.01］;温阳消癥组及缬沙坦组Col-I、Col-III mRNA及蛋白表达均较模型组显著下调［Col-I mRNA：（1.27±0.13）比（6.85±0.22）;（2.65±0.25）比（6.85±0.22）;Col-III mRNA:（1.17±0.08）比（6.21±0.19）;（4.11±0.14）比（6.21±0.19）;Col-I 蛋白: （3.14±0.15）比（6.23±0.24）;（5.18±0.22）比（6.23±0.24）;Col-III 蛋白: （2.68±0.12）比（16.99±0.13）;（14.14±0.19）比（16.99±0.13）;P<0.01］;温阳消癥组的Col-I、Col-III mRNA及蛋白表达与缬沙坦组相比均有显著下调［Col-I mRNA: （1.27±0.13）比（2.65±0.25）;Col-III mRNA：（1.17±0.08）比（4.11±0.14）;Col-I蛋白: （3.14±0.15）比（5.18±0.22）;Col-III蛋白：（2.68±0.12）比（14.14±0.19）;P<0.01］。结论：温阳消癥方可下调Col-I、Col-III mRNA及蛋白的表达,减少细胞外基质在肾间质的堆积,从而减轻UUO小鼠肾间质纤维化程度。     

右美托咪定对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质Wnt/β-catenin蛋白表达的影响

目的 观察右美托咪定对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质Wnt/β-catenin 蛋白表达的影响。方法 将48 只雄性SD 大鼠按随机区组的原则分为三组：对照组、模型组和右美托咪定组,每组各16 只。采用大脑中动脉阻塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）法制造大鼠脑缺血再灌注损伤模型。右美托咪定组于缺血1 h 即刻经尾静脉注射1 μg/kg 右美托咪定作为负荷剂量,持续10 min,随后以0.5 μg/（kg·h）的速率静脉输注至脑缺血2 h。对照组和模型组大鼠按相同方法给予生理盐水。再灌注24 h 时进行神经功能评分后处死大鼠取出脑组织,各组取8 只大鼠脑组织行TTC 染色法测定脑梗死体积,另8 只大鼠采用Western blot 法检测大脑皮质β-catenin 蛋白表达量。结果 与对照组相比,模型组大鼠神经行为学评分明显增加[（3.00±0.82） vs （0±0）,P＜0.05]、脑梗死体积明显增加[（64.23±6.72）% vs （0±0）%,P＜0.05],β-catenin 蛋白表达量明显减少（0.46±0.14 vs 1.12±0.23,P＜0.05）。与模型组相比,右美托咪定组大鼠神经行为学评分（1.69±0.71 vs 3.00±0.82,P＜0.05）、脑梗死体积明显减少[（45.13±8.29）% vs （64.23±6.72）%,P＜0.05],β-catenin 蛋白表达量明显增加[（0.82±0.23） vs （0.46±0.14）,P＜0.05]。结论 右美托咪定能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制可能与增加大脑皮质中β-catenin 蛋白表达量有关。     

慢性脑缺血痴呆大鼠额叶细胞凋亡的研究

目的探讨额叶细胞凋亡在慢性脑缺血所致大鼠痴呆中的作用。方法20只大鼠随机分为模型组和假手术组,模型组采用双侧颈总动脉(CCA)永久性阻断法(2-VO)建立血管性痴呆(VD)大鼠模型,假手术组仅分离暴露双侧CCA而不予结扎。采用暗回避反应法测定学习记忆能力,并应用免疫组织化学法、TUNEL法检测大鼠额叶Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡情况。结果模型组术后1周和3周大鼠的学习记忆能力减退,潜伏期分别为(232±13)s和(220±14)s,而假手术组均为(300±0)s,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。模型组大鼠额叶Bcl-2的表达及凋亡细胞分别为(28.5±2.1)个/视野和(65.2±9.7)个/视野,假手术组分别为(2.6±1.0)个/视野和(4.3±1.4)个/视野,模型组较假手术组明显增高(P<0.01)。结论额叶神经细胞凋亡参与了慢性脑缺血后痴呆的发生。