前列地尔对局灶性脑缺血大鼠脑组织核因子κB的影响

目的从脑组织核因子κB（NF-κB）的表达变化来探讨前列地尔对大鼠局灶性脑缺血的防治机制及其量效关系。方法随机将30只大鼠均分为假手术组、缺血对照组、前列地尔低剂量组（1．25μg／kg）、前列地尔中剂量组（2．50μg／kg）和前列地尔高剂量组（5．00μg／kg），采用MCA闭塞法建立局灶性脑缺血动物模型，24h后进行神经功能缺损评分，并观察各组大鼠脑组织的病理改变，采用免疫组化染色检测NF-κB于大鼠海马CAI区每高倍镜视野阳性细胞数。结果①神经功能缺损评分：与假手术组相比，缺血对照组神经功能缺损评分显著升高，前列地尔各组神经功能缺损评分均显著低于缺血对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），其中以高剂量组更为显著；②脑组织病理学改变：前列地尔各剂量组与缺血对照组相比，海马区神经细胞肿胀、坏死程度明显减轻。③前列地尔低、中、高剂量组大鼠脑组织NF-κB表达于核的阳性细胞数分别为（15．0±48）个／高倍镜视野、（12．4±1．9）个／高倍镜视野和（11．2±1．6）个／高倍镜视野，均低于缺血对照组的（19.3±1．3）个／高倍镜视野。结论前列地尔对局灶性脑缺血损伤具有保护作用，且以高剂量组效果较好，其机制可能与抑制脑组织NF-κB表达有关。     

前列地尔对局灶性脑缺血大鼠脑组织p53的影响

目的:从脑组织p53的表达变化的角度来探讨前列地尔对大鼠局灶性脑缺血的防治机制及其量效关系。方法:采用大脑中动脉闭塞方法建立局灶性脑缺血动物模型,观察低、中、高剂量前列地尔对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质p53表达的影响。结果:前列地尔各组大鼠脑组织p53表达平均灰度分别为115.75±11.38、140.13±11.38、156.21±10.05,均高于缺血对照组97.91±10.01。结论:前列地尔防治大鼠局灶性脑缺血损伤的机制可能与抑制脑组织p53表达有关,且以高剂量效果较好。     

自噬相关基因Atg12和LC3-Ⅱ在脑缺血再灌注大脑表达的实验研究

目的：探讨局灶性脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIR）时大脑皮质自噬相关蛋白-12（autophagy related protein-12,Atg12）和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ（autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ）的激活规律,在此基础上探讨其对脑组织自噬的影响。方法：实验分为假手术组（sham组）和缺血再灌注组（CIR组）,且CIR组下设CIR 0、6、12、24、48、72h共6个亚组。除sham组和CIR 24h组为每组20只外（其中10只用于模型鉴定）,其余为每组10只。采用大脑中动脉栓塞术制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后采用神经功能评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色、脑组织含水量来鉴定脑缺血模型是否成功。采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Atg12和LC3-Ⅱ的表达规律。结果：与sham组比较,CIR 24h组可见明显的神经功能缺损、脑梗死和明显的脑水肿。免疫组化结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[阳性率分别为（15.49±4.18）%、（18.54±3.62）%],在24~48 h达高峰[（33.63±3.26）%、（29.62±1.73）%],72 h之后逐渐减弱[（24.90±3.96）%、（20.36±3.51）%]。免疫印迹结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[表达量为（0.372 3±0.076 5）、（0.148 4±0.011 5）],在24~48 h达高峰[（0.741 7±0.071 8）、（0.451 3±0.019 0）],72 h之后逐渐减弱[（0.365 0±0.042 0）、（0.245 1±0.030 3）]。结论：脑缺血时Atg12和LC3-Ⅱ在调节脑缺血的脑组织自噬方式中具有重要的作用。     

前列地尔对局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮层基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的:探讨前列地尔对局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮层基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP-9表达的影响。方法:取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照(尼莫地平1 mg.kg-1)组和前列地尔低、中、高剂量(1.25、2.50、5.00μg.kg-1)组,每组5只,连续给予相应药物6 d,每日1次,末次给药后建立局灶性脑缺血模型,于大鼠清醒后进行神经功能缺损评分,缺血24 h后检测各组大鼠大脑皮层MMP-2、MMP-9的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分明显更高,MMP-2、MMP-9表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和前列地尔中、高剂量组神经功能缺损评分明显较低,MMP-2、MMP-9表达明显降低(P<0.05)。结论:前列地尔预处理对局灶性脑缺血模型大鼠具有神经保护作用,其机制可能与抑制大脑皮层MMP-2、MMP-9的表达有关。     

前列地尔对局灶性脑缺血大鼠脑组织Fas、caspase-3的影响

目的从脑组织膜蛋白酶(Fas)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)的表达变化的角度来探讨前列地尔对大鼠局灶性脑缺血的防治机制及其量效关系.方法采用大脑中动脉闭塞方法建立局灶性脑缺血动物模型,观察低、中、高剂量前列地尔对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质Fas、caspase-3表达的影响.结果前列地尔低、中、高剂量组大鼠脑组织Fas表达平均灰度分别为(110.39±8.44),(135.53±6.66)和(157.34±7.94),均弱于缺血对照组(88.46±11.08);前列地尔低、中、高剂量组大鼠脑组织caspase-3表达平均灰度分别为(137.86±6.99),(156.71±5.19)和(169.55±4.44),均弱于缺血对照组(106.76±12.51).结论前列地尔防治大鼠局灶性脑缺血损伤的机制可能与抑制脑组织Fas、caspase-3表达有关,且以高剂量效果较好.     

热抗原修复方法的比较

目的 研究免疫组化技术中3种抗原加热修复方法的效果。方法 用免疫组化SABC法检测五种单克隆抗体，分别使用水煮法、微波法、高压法修复抗原，从中选出最佳修复方法。结果 单克隆抗体BCL-2，BAY，P53，BDNF，VEGF、在2种修复液中显色结果相同或相似，而高压法明显优于微波法及水煮法；P53在Tris-EDTA(pH9．0)修复液中效果明显优于柠檬酸盐缓冲液(pH6．0)。结论 Tris-EDTA(pH9．0)高压法的实验重现性与染色强度均优于微波法及水煮法。     

细胞图像分析的几点技巧

图像分析方法的科学性与缜密性直接影响测量结果的准确性，必须高度重视测量过程的每一步骤和环节。本人结合多年的细胞图像分析系统（简称CIAS）使用经验，总结出几点技巧如下。     

奥拉西坦对癫痫模型大鼠的治疗效果及对大鼠Caspase-3 Hcy水平的影响

目的研究奥拉西坦对癫痫模型大鼠的治疗效果及对大鼠Caspase-3、同型半胖氨酸(Hcy)水平的影响。方法选取40只健康SD大鼠,分为正常组、模型组、低剂量组和高剂量组,对其中30只建立癫痫模型,正常组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水;奥拉西坦组大鼠腹腔注射不同浓度的奥拉西坦。使用Morris水迷宫对4组大鼠学习记忆能力进行测试,并对大鼠海马区结构形态进行观察,观察记录大鼠癫痫持续时间、发作频率以及惊厥潜伏期时长,采用高效液相色谱法,检测大鼠海马组织Caspase-3、Hcy水平。结果癫痫发作期间表现为阵发性肢体震颤、呼吸深且快,出现湿狗状抖动,站立不稳,并伴随阵发性抽搐、口吐白沫,兴奋性极高。模型组大鼠逃避潜伏期时长明显长于其他3组,奥拉西坦高剂量组大鼠逃避潜伏期时长短于奥拉西坦低剂量组(P0.05);模型组大鼠穿越平台次数明显少于其他3组,奥拉西坦高剂量组大鼠穿越平台次数多于奥拉西坦低剂量组(P0.05);模型组大鼠惊厥潜伏期明显短于其他2组,奥拉西坦高剂量组大鼠惊厥潜伏期明显长于奥拉西坦低剂量组(P0.05);模型组模型大鼠癫痫持续时间及发作频率均显著高于其他2组,奥拉西坦高剂量组大鼠癫痫持续时间及发作频率均低于奥拉西坦低剂量组(P0.05);正常组大鼠海马组织Caspase-3、Hcy水平显著低于其他3组,模型组Caspase-3、Hcy水平显著高于奥拉西坦2组(P0.05);奥拉西坦高剂量组Caspase-3、Hcy水平低于奥拉西坦低剂量组(P0.05)。结论奥拉西坦对癫痫模型大鼠的治疗效果显著,对大鼠Caspase-3、Hcy水平有改善作用,为奥拉西坦在临床医学上的应用提供理论依据。     

前列地尔对局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮层中iNOS和eNOS表达的影响

目的:探讨前列地尔对局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮层中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法:取大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照(尼莫地平1mg.kg-1)组和前列地尔低、中、高剂量(1.25、2.50、5.00μg.kg-1)组,每组10只,腹腔注射相应药物6d,每日1次,末次给药后建立局灶性脑缺血模型,大鼠清醒后进行神经功能缺损评分,采用免疫组化法和免疫印迹法检测各组大鼠建模2h后iNOS、eNOS的表达。结果:与假手术组比较,其余各组神经功能缺损评分均明显增加,iNOS阳性细胞数和表达量均明显增加,除模型组外其余各组eNOS阳性表达量均增加(P均<0.05);与模型组比较,阳性对照组和前列地尔中、高剂量组神经功能缺损评分均明显降低,阳性对照组和前列地尔3个剂量组iNOS阳性细胞数和表达量均明显降低、eNOS阳性细胞数和表达量均明显增加(P均<0.05)。结论:前列地尔预处理对局灶性脑缺血模型大鼠具有保护作用,其机制可能与下调大脑皮层iNOS、上调eNOS的表达有关。     

前列地尔对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的探讨前列地尔对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及其机制.方法选用健康SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血对照组和前列地尔低剂量组(1.25μg/kg)、前列地尔中剂量组(2.50μg/kg)和前列地尔高剂量组(5.00μg/kg),采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立局灶性脑缺血动物模型,24h后进行神经功能评分,并制备脑组织匀浆,检测内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CGBP)含量.结果与假手术组相比,缺血对照组神经功能评分显著升高,前列地尔各组神经功能评分均显著低于缺血对照组;前列地尔各组ET含量均低于缺血对照组,前列地尔各组CGRP含量均高于缺血对照组,差异显著(P＜0.05).结论前列地尔对局灶性缺血性脑损伤具有保护作用,其机制可能是通过调整脑缺血后ET和CGBP的平衡失调,对抗脑血管收缩和促进脑血管扩张,从而对脑缺血起到保护作用.