基于数字切片的组织学实验教学改革探讨

组织学是医学教育中的一门基础课程,研究机体的微细结构及功能,包括理论教学和实验教学两部分。学生通过实验课验证理论知识,加深对理论知识的理解和记忆,实验课教学效果直接影响学生对该门课程的掌握程度。传统的组织学实验课以观察玻片标本为主,"讲授-示教-答疑"的教学模式有诸多的弊端,急需改进。信息与网络技术的发展为组织学实验教学改革提供了有力支撑。数字切片的应用,不仅解决了教学资源不足的难题,也显著提高了教学效果。以数字切片为基础,我校全面改革了组织学实验课的教学方式和考核形式,文章简要做一总结,为信息化时代组织学教学模式改革提供参考。     

siRNA沉默HLA-A2表达的hMSCs对人异体T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2功能的影响

目的探讨应用siRNA技术下调HLA-A2表达的人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stemcells,hMSCs)对人异体T淋巴细胞分泌功能的调节作用。方法从成人骨髓中分离和培养hMSCs,并且通过免疫细胞化学检测其表面标志;利用人工合成HLA-A2靶向小分子干扰RNA转染至第3代hMSCs,然后将转染前后的hMSCs,与经植物血凝素(PHA)刺激的人异体T淋巴细胞共同培养。用ELISA分别检测各培养上清液中T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平。结果原代培养3d后,约70%hMSCs贴壁生长,7d后细胞迅速增殖,进入对数生长期,14d左右进入平台期,第3代细胞多呈梭形生长,形态比较均一,hMSCs表面抗原CD44、CD166阳性。HLA-A2靶向小分子干扰RNA转染3天后,可见少量细胞死亡,免疫荧光染色可见细胞核和部分胞浆呈阳性表达。转染HLA-A2靶向小分子干扰RNA的和未转染的hMSCs均能抑制人T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2,转染后的hMSCs抑制作用强于未转染的hMSCs(<0.05)。结论体外沉默HLA-A2基因表达可增强hMSCs抑制PHA刺激人T淋巴细胞分泌因子。     

胚胎小鼠肾脏发育过程中eNOS表达与细胞凋亡的关系

目的观察胚胎小鼠不同发育阶段肾组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达和细胞凋亡的特征，探讨eNOS与细胞凋亡的关系。方法应用原位末端标记（TUNEL）法检测胚胎小鼠肾组织中的细胞凋亡，免疫组织化学方法和体视学方法检测eNOS的表达。结果不同发育阶段的肾组织中均可见到TUNEL染色阳性的细胞，凋亡指数从E14d开始增高，E18d达到高峰。eNOS表达于皮质生肾区、近端小管和远端小管，表达量随着发育逐渐增加。结论细胞凋亡和eNOS的表达在小鼠肾脏胚胎发育过程中具有重要的作用，细胞凋亡与eNOS的表达有一定的相关性。     

人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织c-Fos蛋白表达的影响

目的:探讨人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织c-Fos表达的影响。方法:分别给大鼠注射人参皂甙Rg1 10、20、40 mg.kg-1,然后采用大脑中动脉闭塞方法建立脑缺血再灌注模型,应用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注24h后c-Fos的表达。结果:与单纯缺血再灌注组相比,人参皂甙Rg1各组c-Fos表达明显降低(P<0.05)。结论:人参皂甙Rg1防治大鼠脑缺血再灌注损伤机制可能与抑制脑组织c-Fos表达有关,且以高剂量效果较好。     

大鼠双侧肾切除后肝细胞的损伤方式

目的：观察大鼠双侧肾切除[非缺血性急性肾损伤（non ischemic acute kidney injury,NIAKI）]引起肝细胞损伤方式。方法：应用Western blot、免疫组织化学染色方法和光学、电子显微镜技术对双侧肾切除24 h后的大鼠肝脏进行了观察。结果：双侧肾切除24 h后的大鼠发生了急性肝功能受损,肝脏出现了大小不等坏死灶以及大面积区域性肝细胞的空泡样改变。光、电镜观察结果证明前者以细胞坏死为主,后者以细胞内出现大量空泡为主要表现。此外尚可见少许肝细胞凋亡的表现。Western blot的结果说明双侧肾切除后肝脏内多聚ADP核糖聚合酶（polyADP-ribose polymerase,PARP）-1过度激活,肿瘤坏死因子受体１和caspase-3蛋白表达均增强。免疫组化染色结果可见双侧肾切除后肝脏内出现了PARP-1阳性和 caspase-3阳性的肝细胞。结论：形态学上NIAKI可引起肝细胞坏死,肝细胞空泡化与细胞凋亡,以前2种损伤为明显。从生物化学角度可以看出 PARP-1介导的细胞死亡与caspase依赖的细胞死亡参与了NIAKI引起的急性肝损伤。     

同种异体BMSCs、ADSCs移植后的抗原性差异

目的　探讨骨髓来源间充质干细胞（MSCs from bone marrow, BMSCs）与脂肪来源间充质干细胞(Adipose tissue-derived MSCs,ADSCs)体内移植后的抗原性差异。 方法 体外培养WKY大鼠BMSCs、ADSCs,经成骨诱导后植入wistar大鼠桡骨缺损区,分别于植入后1、2、4、8周进行缺损区HE染色,于1、2、4、8周免疫组化检测缺损区IL-2、TGF-β、TNF-α、CD4、CD8,采用ELISA法检测脾细胞培养液上清IL-2、TGF-β、TNF-α的含量。 结果 BMSCs、ADSCs移植术后1～2周有少量淋巴细胞、白细胞浸润,IL-2、TGF-β、TNF-α、CD4、CD8蛋白少量表达;二者比较差异无显著性。 结论 BMSCs、ADSCs体内移植后所致的抗原性无显著性差异。     

贝那普利下调TGF-β1及Bax表达对糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的 探讨贝那普利(BZ)对糖尿病(DM)大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)和Bax的表达及心肌肥厚指标的影响.方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备DM模型.实验分为正常对照组(CON)、DM组和BZ治疗组(BZ).治疗组每日灌胃给予贝那普利(10 mg·kg-1·d-1).8 w后测定心脏质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVMI),并取左心室心肌免疫组化法检测TGF-β1和 Bax在心肌组织中的表达,透射电镜观察心肌组织超微结构变化.结果 与CON组相比,DM组大鼠HMI、LVMI明显升高;心肌TGF-β1和 Bax蛋白表达显著增强(P＜0.05,P＜0.01);电镜发现DM心肌细胞肿胀、肌丝稀疏,线粒体变性肿胀,间质胶原增生及微血管基底膜增厚.与DM组相比,BZ干预后,HMI、LVMI明显降低(P＜0.01);心肌TGF-β1和 Bax蛋白表达减弱(P＜0.01);心肌超微结构改变减轻.结论 TGF-β1 可能通过刺激促凋亡因子Bax表达诱导心肌细胞凋亡,促进DM心肌肥厚.BZ能在一定程度上抑制TGF-β1和Bax的表达从而延缓DM心肌病理进程.     

地塞米松诱导的危重病性肌病中PKB/Akt、PKC及NF-κB p65的表达

目的探讨地塞米松诱导的危重病性肌病中PKB/Akt、PKC及NF-κB p65的表达情况。方法健康大鼠随机分为对照组和实验组,实验组再被分为7、9、11 d亚组(n=10)。实验组采用地塞米松(5 mg/kg)连续腹腔注射,1次/d,对照组注射等量的生理盐水。动物处死后采用免疫组化法检测比目鱼肌中PKB/Akt、PKC及NF-κB p65的表达情况。结果对照组可见少量PKB/Akt、PKC及NF-κB p65阳性表达细胞。与对照组比较,PKC、PKB/Akt于实验7 d显著升高,随时间延长,表达量逐渐降低,至11 d接近正常水平;NF-κB p65于9 d表达升高,11 d亚组略有降低。结论地塞米松诱导的危重病性肌病中PKC、PKB/Akt及NF-κB p65的表达增强。     

FAK、FAKpY397和Src在肝细胞癌中的表达和意义

目的：探讨黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）、磷酸化黏着斑激酶（phospho-FAK Y397,FAKpY397）和类固醇激素受体共活化因子（sceroid recptor coactivator,Src）在不同分化程度肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况以及三者的相关性。方法：通过免疫组织化学法和人工计数法检测44例HCC组织及8例癌旁正常肝脏组织中FAK、FAKpY397和Src的表达。结果：FAK、FAKpY397和Src在HCC组织中表达均高于正常肝脏组织（P=0.027、P=0.041、P=0.030）且三者均与HCC分化程度有关（P=0.026、P=0.045、P=0.005）,FAK和Src低分化组阳性率高于高分化组（P=0.015、P=0.002）。HCC组织中三者表达两两之间呈正相关（P=0.000、P=0.000、P=0.000）。结论：HCC组织中FAK、FAKpY397和Src表达与HCC分化程度有关;FAK和Src低分化组阳性率高于高分化组且三者相互之间存在一定相关性。