转化生长因子β1噬菌体模拟肽抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究

目的 从噬菌体随机12肽库中筛选获得转化生长因子(TGF)β1噬菌体模拟肽,评估其抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用.方法 以人TGF-β1单克隆抗体为靶,生物淘选噬菌体模拟肽.噻唑蓝(MTT)比色法定量测定活细胞的数量.Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测对成纤维细胞的凋亡作用.免疫荧光测定检测模拟肽与成纤维细胞的亲和力.实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞核因子κB(NF-κB),结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平.结果 共获得10种噬菌体模拟肽,具有与TGF-β1、TGF-β2、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)、TGF-β诱导因子、NF-κB或细胞分裂原素活化蛋白激酶(MAPK)相似的序列.MTT比色测定结果显示4种(第7～10组)噬菌体模拟肽组能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P＜0.05).免疫荧光测定显示是噬菌体上的模拟肽,而不是噬菌体本身,能够与瘢痕疙瘩成纤维细胞相结合;凋亡实验显示这4种噬菌体模拟肽能够轻度促使瘢痕疙瘩成纤维细胞发生轻度的晚期凋亡;实时定量PCR的结果显示这4种噬菌体模拟肽NF-κB的表达降低,表达量分别是阴性对照组的0.28、0.26、0.46、0.30倍,4种噬菌体模拟肽CTGF的表达降低,表达量分别是阴性对照组的0.26、0.60、0.34、0.17倍.结论 噬菌体模拟肽可能是通过调节NF-κB及CTGF的表达,调节瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

Survivin在NF-κB圈套寡核苷酸促进肝癌细胞HepG2凋亡中的作用

目的观察核转录因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究Survivin在其诱导肝癌细胞HepG2凋亡中的作用。方法将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NF-κB圈套寡核苷酸转染至HepG2细胞中,荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位观察,凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测转染前后NF-κB活性变化;流式细胞仪和TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡抑制蛋白Survivin的改变。结果NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降。与未处理组、转染错义组相比,转染NF-κB圈套寡核苷酸组的HepG2细胞凋亡率增加,Survivin蛋白表达下调[(39.8±1.9)、(42.7±2.5)vs(20.1±3.1)]。结论NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肝癌细胞HepG2凋亡的作用,其机制可能与下调Survivin的表达有关。     

内皮型一氧化氮合酶在TNF-α和AngⅡ致内皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨TNF-α和AngⅡ在导致内皮细胞凋亡过程中eNOS的表达变化以及NF-κB在这一过程中的作用．方法对NF-κB的抑制剂PDTC预处理和未预处理的原代培养脐静脉内皮细胞，用TNF-α和AngⅡ分别来进行干预，后用RT-PCR来检测eNOS的mRNA表达，Western blot来检测eNOS和IκBα的蛋白表达，EMSA来检测NF-κB的活性，TUNEL法来检测细胞的凋亡．结果 在TNF-α和AngⅡ的干预下，eNOS的mRNA和蛋白表达与对照组比较显著下降（P〈0．05），细胞凋亡发生显著增加（P〈0．05）；NF-κB的抑制剂PDTC能抑制TNF-α和AngⅡ引起的细胞凋亡的发生，但未能抑制住TNF-α和AngⅡ引起eNOS表达的下降．结论 在TNF-α和AngⅡ作用于内皮细胞时，eNOS和NF-κB对防止细胞凋亡都有保护作用，但NF-κB没有参与TNF-α和AngⅡ引起eNOS表达下降的过程．     

α干扰素对TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及NF-κB表达的研究

目的:探讨应用α干扰素与宫颈癌细胞核因子κB(NF-κB)表达的关系以及对肿瘤细胞凋亡的影响.方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot分析方法检测NF-κB表达.结果:100 U/ml的α干扰素与10 ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合作用24 h后,细胞凋亡率达到92%;与15 ng/ml TNF-α联合作用12 h后,凋亡率上升至92.6%.α干扰素不影响NF-κB的表达,TNF-α可显著增加NF-κB的表达(P＜0.01),α干扰素预先作用后加用TNF-α可以显著抑制NF-κB的表达(P＜0.01).结论:α干扰素能够显著抑制TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞NF-κB的表达,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用.     

核转录因子-κB圈套策略对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的:观察NF-κB圈套寡核苷酸(Decoy ODNs)对NF-κB活性的影响,进一步探讨其对人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法:设计NF-κB圈套寡核苷酸,将FITC标记的NF-κB Decoy ODNs转染HepG2,共聚焦显微镜观察其核内定位,描记生长曲线;凝胶阻滞法(EMSA)检测转染前后NF-κB活性;再分别用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。Western blot检测HepG2细胞中Bcl-2和Fas的含量。结果:NF-κB Decoy ODNs转染HepG2细胞后定位于胞核,NF-κB活性明显下降,其显著抑制细胞生长,促进HepG2细胞凋亡;低活性NF-κB可以下调Bcl-2、增加Fas的表达水平。结论:NF-κB圈套寡核苷酸促进肝癌细胞HepG2凋亡的机制可能与其下调NF-κB的活性,使促凋亡蛋白Fas表达增加和降低抑凋蛋白Bcl-2表达有关。     

丹参素对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影响

目的 观察丹参素对IL-1β刺激的肝星状细胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影响,探讨丹参素抗肝纤维化的分子机制.方法 用原位-密度梯度离心法提取肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs),以不同浓度的丹参素作用于IL-1β刺激的HSCs,MTT法、AO/EB免疫荧光和Annexin V-FITC/P1分别检测HSCs的增殖和凋亡;免疫细胞化学、ELISA法、Western blot分别检测Ⅲ型胶原的生成、NF-κB核转位及细胞质p-IκBet、细胞核NF-κB p65的表达.结果 与对照组相比,IL-1β刺激组HSCs增殖明显增加(P<0.01),凋亡率明显减低(P<0.05),Ⅲ型胶原的合成和分泌明显增加(P<0.01);不同浓度丹参素作用24 h后HSCs增殖明显减低(P<0.01),凋亡明显增加(P<0.01),以早期凋亡为主,Ⅲ型胶原的合成和分泌亦明显减少(P<0.05,P<0.01);Western blot结果显示IL-1β作用30 min时细胞质p-IκBα、细胞核NF-κB p65蛋白表达明显增加(P<0.01),出现核转位;免疫细胞化学显示细胞核内p65阳性染色细胞增多浓染,提示IL-1β可以诱导HSCs的NF-kB活性;丹参素组细胞质p-h相似文献   

Sparc对瘢痕疙瘩成纤维细胞以及正常人皮肤成纤维细胞增殖凋亡及Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌影响的研究

目的 探讨富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(Sparc蛋白)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)、正常人成纤维细胞(NFs)增殖与凋亡以及对于其细胞外基质中Ⅰ胶原与Ⅲ型胶原表达的影响.方法 分离培养HKF以及NFs,将2种细胞分为实验组与对照组,实验组加入Sparc蛋白孵育,对照组加入等量培养基进行处理.CCK-8细胞增殖实验检测Sparc蛋白对各组细胞增殖的影响;流式细胞实验检测Sparc蛋白对各组细胞凋亡的影响;Western blot与RT-PCR检测各组细胞Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原的表达.结果 Sparc蛋白可以显著促进各组细胞的增殖,抑制其凋亡,Sparc蛋白可以显著促进各组细胞Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原的表达.结论 Sparc蛋白是促进瘢痕疙瘩形成的重要蛋白,可靶向调控抑制瘢痕疙瘩的生成.     

β-arrestin-2靶向NF-κB通路抑制类风湿性关节炎中FLSs的炎性反应

目的 明确β-arrestin-2影响NF-κB通路调节FLS炎性反应的作用。方法 通过构建小鼠CIA模型,分离获取RA-FLSs细胞,qRT-PCR法检测IL-1β、IL-6的表达情况;Western blot法检测MMP3、MMP13、p-P65、p-IκBα的表达情况;使用NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082刺激RA-FLSs细胞,分析细胞炎性因子、软骨基因表达情况。结果 qRT-PCR结果显示IL-1β、IL-6的表达水平显著降低,过表达β-arrestin-2可以降低RA-FLSs细胞中炎性因子水平;Western blot法结果显示,β-arrestin-2能够降低软骨基因MMP3、MMP13、p-P65和p-IκBα的表达水平,抑制NF-κB的活性;BAY 11-7082与β-arrestin-2联合刺激RA-FLSs后,炎性因子与软骨基因的表达量进一步降低。结论 β-arrestin-2靶向NF-κB通路,降低炎性因子、软骨基因的表达,抑制NF-κB信号通路的活化,调节RA-FLSs的炎性反应。     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-кB活性的研究

目的　探讨丙型肝炎病毒核心蛋白 (HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子 κB(NF- κB)的调控作用。方法　利用稳定表达 HCV C蛋白的 QBC939细胞株 (QBC939HCV C+) ,通过 NF- κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析 (EMSA)检测 HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞 NF- κB的 DNA结合活性和反式激活活性。 RT-PCR、Western blot检测 HCV C蛋白对核转录因子 κB抑制蛋白 α(IκBα) m RNA及 P5 0、P6 5、IκBα蛋白表达及 IκBα蛋白磷酸化的影响。结果　 1EMSA结果显示 QBC939HCV C+细胞系中 NF- κB相对信号密度明显比 QBC939细胞高。 2将 p NF- κB- lun表达质粒转染稳定表达 HCV C蛋白胆管癌细胞系中 ,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性 ,结果显示 QBC939HCV C+细胞中活化 NF- κB为 12 .8倍 ,而 QBC939细胞中 NF- κB为 2 .6倍。 3RT- PCR显示IκB m RNA在 QBC939HCV C+细胞和 QBC939细胞中的表达无明显差异 ;Western blot结果显示稳定表达 HCV C蛋白的 QBC939HCV C+细胞株的胞核中的 P5 0、P6 5蛋白高水平表达 ,而未转染 HCV C蛋白的 QBC939细胞仅检测出极低水平的 P5 0、P6 5蛋白。在 QBC939HCV C+细胞胞浆中 IκBα蛋白低水平表达 ,QBC939细胞高水平表达 ,但 IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论　 HCV     

SIRT1通过抑制NF-κB信号通路而抑制oxLDL诱导的VSMC源性泡沫细胞形成

目的探讨激活去乙酰化酶1(SIRT1)是否可以抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs向泡沫细胞转化,并且探讨NF-κB炎性信号通路在其中的调节作用。方法利用小鼠主动脉组织贴块法培养原代VSMCs;免疫荧光双标染色鉴定原代VSMCs;油红O染色定性检测细胞内脂质沉积; Western blot检测VSMCs中SIRT1、p-IκBα和NF-κB p65蛋白的表达情况。结果氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox LDL)刺激原代培养的VSMCs 48小时后,细胞内油红O染色阳性脂滴显著增加,差异有统计学意义(P<0. 05); ox LDL刺激VSMCs不同时间(6、12、24、48、72小时)后p-IκBα和NF-κB p65蛋白的表达呈上升趋势(P<0. 05); SRT1720(SRT)激活SIRT1可以呈浓度梯度减少ox LDL诱导的VSMC中红色脂滴的数量; SRT呈浓度梯度地上调SIRT1蛋白的表达,以及呈浓度梯度地下调p-IκBα和NF-κB p65蛋白蛋白的表达; BAY 11-7082(BAY)抑制p-IκBα和核内NF-κB p65蛋白的表达,也显著降低了oxLDL诱导的VSMC中红色脂滴的数量。结论本研究证实激活SIRT1可以抑制ox LDL诱导的VSMC源性泡沫细胞形成,且与NF-κB信号通路的抑制有关。     

As2O3诱导人肾癌786-0细胞凋亡及其分子机制的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导786-0细胞凋亡的作用及其分子机制.方法 用FCM和TUNEL等方法观察As2O3诱导786-0细胞凋亡,以ICC、RT-PCR、ISH、Western blot和EMSA技术等检测凋亡相关基因p53、bcl-2、c-myc、c-fos、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达及NF-κB DNA结合活性的改变.结果 2 μmol/L以上浓度As2O3作用786-0细胞24 h后开始发生细胞凋亡,出现凋亡的形态学改变和特征性亚二倍体峰(凋亡峰),使786-0细胞内p53活性升高(P＜0.05),而bcl-2、c-myc、c-fos 和NF-κB p65基因表达降低(P＜0.05),NF-κB DNA结合活性也被显著抑制(P＜0.01).结论 As2O3可能通过降低NF-κB p65基因表达和NF-κB DNA结合活性,下调bcl-2、c-myc和c-fos基因表达,而增加p53基因的表达,诱导人肾癌786-0细胞凋亡.     

柳氮磺胺吡啶诱导HSC-T6肝星状细胞凋亡及其机制

目的 观察柳氮磺胺吡啶及其分解产物对肝星状细胞株HSC-T6增殖和凋亡的影响,并对其分子机制作初步探讨.方法 用CCK-8比色法检测细胞增殖;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染检测HSC-T6细胞凋亡率;AO/EB染色法观察细胞凋亡形态,Western blot检测NF-κB P65、P-IKK、P-IκB蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察P65核转位.结果 柳氮磺胺吡啶能剂量依赖性的抑制HSC-T6肝星状细胞的增殖;AO/EB染色法、AnnexinV/PI染色结果证明柳氮磺胺吡啶能诱导HSC-T6肝星状细胞的凋亡;而5-氨基水杨酸和磺胺吡啶对HSC-T6的增殖和凋亡无影响.Western blot结果表明柳氮磺胺吡啶不是5-氨基水杨酸和磺胺吡啶抑制IKK、IκB的磷酸化、细胞核NF-κB P65的表达(P＜0.05),激光共聚焦显微镜下观察到,柳氮磺胺吡啶组P65核转位被抑制.结论 柳氮磺胺吡啶可抑制HSC-T6的增殖并诱导凋亡,其机制可能与其抑制Rel/NF-κB/IκB/IKK信号通路有关.     

黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨黄芪总苷液对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响.方法 不同浓度黄芪总苷液(10、20、40ng/mL)干预瘢痕疙瘩成纤维细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;实时(real-time) PCR测定成纤维细胞凋亡抑制基因survivin及细胞凋亡因子p53及Bcl-2的表达;Western blot检测成纤维细胞survivin、p53及Bcl-2蛋白水平表达.结果 MTT法检测发现,与对照组(不加黄芪总苷液)比较,各黄芪总苷液各浓度组细胞490 nm处吸光度(A)值明显降低,瘢痕疙瘩细胞增殖均明显受抑制且呈剂量依赖性(P＜0.05).real-time PCR及Western blot检测结果显示,黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡相关因子survivin、Bcl-2有不同程度的抑制作用,对P53有不同程度的促进作用,且呈浓度依赖性.结论 黄芪总苷液能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,调控其凋亡,从而达到有效治疗瘢痕疙瘩的效果.     

微小RNA-138/NGAL对缺血再灌注诱导人肾小管上皮细胞的影响

目的 探究微小RNA-138（microRNA-138,miR-138）调控中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）对缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）诱导人肾小管上皮（HK-2）细胞损伤的影响。方法 HK-2细胞构建I/R模型,分别转染miR-138 模拟物、miR-138 抑制剂、NGAL、NGAL + miR-138 模拟质粒,qRT-PCR测定不同细胞miR-138或NGAL mRNA表达鉴定转染结果,细胞活力检测（cell counting kit-8,CCK-8)法和流式细胞术测定细胞活性和凋亡。ELISA、Western blot法分别测定miR-138模拟物、miR-138抑制剂对I/R细胞白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平,以及Toll样受体4（toll like receptor 4,TLR4）、核因子κB（nuclear factor kappa-B,NF-κB）、NF-κB抑制蛋白（inhibitor-NF-κB,IκBα）、磷酸IκBα（p-IκBα）、NGAL蛋白表达的影响。结果 I/R细胞miR-138 mRNA表达、细胞活力降低,凋亡增加（P<0.01）。质粒转染成功,miR-138模拟物促进IR细胞活力,降低凋亡和NGAL mRNA表达（P<0.01）;miR-138 抑制剂、NGAL 模拟降低IR细胞活力,增加凋亡和NGAL mRNA表达（P<0.01）;NGAL 模拟对IR细胞的损伤作用可被miR-138 模拟逆转。miR-138 抑制剂可增加I/R细胞IL-6、IL-1β、TNF-α水平和凋亡,上调TLR4、NF-κB、p-IκBα、NGAL蛋白表达,下调IκBα蛋白表达（P<0.05）;miR-138模拟物可降低I/R细胞IL-6、IL-1β、TNF-α水平和凋亡,下调TLR4、NF-κB、p-IκBα、NGAL蛋白表达,上调IκBα蛋白表达（P<0.05）。结论 miR-138通过调节NGAL和TLR4/NF-κB途径降低细胞凋亡和炎症因子水平,对I/R诱导的HK-2细胞发挥保护作用。     

缺氧对PC12细胞HIF-1/JAK2/NF-κB信号级联的影响

目的 研究缺氧对PC12细胞HIF-1/JAK2/NF-κB信号级联的影响.方法 制备缺氧细胞模型,采用EMSA、半定量RT-PCR技术和Western blot法检测JAK2、HIF-1α、HIF-1β基因mRNA和蛋白表达水平以及NF-κB活性.结果 PC12细胞JAK2、HIF-1α、HIF-1β mRNA和蛋白在缺氧后表达增强,6h达到高峰,显著高于正常对照组;PC12细胞核内NF-κB活性在缺氧后6h达到高峰,12h下降.加入JAK2抑制剂AG490后缺氧6h NF-κB活性明显降低.结论 缺氧能增强JAK2、HIF-1α、HIF-1β的表达.HIF-1能激活JAK2,对缺氧受损脑组织有保护作用.     

虫草多糖对大鼠肝星状细胞核因子-κB活性和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨虫草多糖对大鼠肝星状细胞的作用机制.方法分离大鼠肝星状细胞,采用不同浓度的虫草多糖处理后,分别应用MTT法、凝胶迁移率法、ELISA法和Northern blot检测大鼠肝星状细胞的增殖、核因子κB(NF-κB)活性和肿瘤坏死因子-α蛋白和mRNA的表达.结果虫草多糖对大鼠肝星状细胞生长具有较强的抑制作用.虫草多糖可明显抑制大鼠肝星状细胞核因子κB活性和下调肿瘤坏死因子-α蛋白和mRNA的表达,并且呈剂量依赖性.结论虫草多糖对大鼠HSC增殖具有很强的抑制作用,可能与抑制NF-κB活性和下调肿瘤坏死因子-α表达有关.     

干扰素α抑制NF-κB活化增强TNF-α诱导的Hela细胞凋亡

目的探讨干扰素α(IFN-α)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及TNF-α诱导核转录因子NF-κB活化的影响。方法细胞分为空白对照组(不加TNF-α),实验组(加TNF-α)、实验组终浓度分别为(5,10,15ng/ml),作用不同时间分为6,12,24 h,与干扰素α(终浓度100IU/ml)共培养2 h,再加入终度与上述相同的TNF-α继续培养3 h,应用免疫组化,免疫印迹方法检测NF-κB活性的变化,采用Tunel法检测细胞凋亡。结果TNF-α诱导Hela细胞凋亡与其诱导NF-κB活化明显相关,100 IU/ml的IFN-α能显著增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡和抑制TNF-α诱导的Hela中NF-κB的活化。细胞凋亡增加率为69.2%(P<0.05),NF-κB活化抑制率为48.0%(P<0.05)。结论TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时激活NF-κB;IFN-α可通过抑制NF-κB活化,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

肾癌组织中NF-κB信号分子的表达及As2O3对人肾癌786-0细胞中NF-kB信号通路影响的研究

目的:探讨NF-κB信号通路与肾癌发生和发展的关系以及三氧化二砷(As2O3)对人肾癌细胞系786-0的NF-κB信号转导的影响.方法:采用ICC、ISH、Western blot和EMSA技术检测15例肾癌组织和10例正常肾组织中NF-κB信号分子IKKα/β、IkBα、p65和ICAM-1的表达和NF-κB DNA结合活性;As2O3处理肾癌786-0细胞后NF-κB信号分子蛋白表达、p65mRNA表达和NF-κB DNA结合活性的改变.结果:肾癌组织中NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白表达量升高(P＜0.01),但IκBα蛋白明显降低(P＜0.01);经2μmol/L浓度As2O3处理786-0细胞72h后,p65mRNA含量、NF-k B DNA结合活性及p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白的表达量均降低(P＜0.01).结论:NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白增加可能与肾癌的发生和进展有关;2μmol/L以上浓度As2O3可以全面抑制786-0细胞中p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白和p65 mRNA的表达,抑制NF-κB DNA结合活性,可能是As2O3抑制786-0细胞增殖的另一种机制,NF-κB有可能成为抗肾癌治疗的靶点之一.     

小白菊内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的探讨小白菊内酯（PTL）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖、核因子-κB（NF-κB）活性和单核细胞趋化蛋
白-1（MCP-1）表达的影响。方法采用正常葡萄糖组（糖浓度为5.6 mmol/L）和高糖组（糖浓度为30 mmol/L）、高糖+PTL组,分
别体外培养大鼠肾小球MC,MTT法检测MC的增殖,ELISA法检测培养液上清中MCP-1的浓度,Western Blot法检测IκBα反
映NF-κB的活性,EMSA法检测NF-κB的活性。结果高糖诱导后MC增殖、MCP-1表达和NF-κB活性明显增强,NF-κB结合蛋
白IκBα明显降解;应用PTL干预后,MC增殖、MCP-1表达和NF-κB活性均明显降低,IκBα降解被抑制。结论PTL能抑制高糖
诱导的肾小球MC NF-κB活化及MCP-1的表达,从而为PTL用于临床防治糖尿病肾病提供了一定的理论依据。
     

耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞NF-κB的激活与耐药的关系

目的:观察耐药MCF-7/Adr和其药敏亲本系MCF-7乳腺癌细胞中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的激活水平,以及其抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对耐药的逆转效应,探讨NF-κB在耐药调控中的作用. 方法:凝胶电泳迁移率法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)测定NF-κB的DNA结合活性.免疫印迹杂交法(Western blot)检测多药耐药基因(MDR1)产物P-糖蛋白(P-pg)的表达.MTT法测定阿霉素(Doxorubicin,DOX)作用上述细胞的药物半数抑制浓度值(IC50). 结果:耐药MCF-7/Adr细胞中NF-κB 的DNA结合活性(积分吸光度:267±9)显著高于MCF-7细胞中NF-κB 的DNA结合活性(积分吸光度:34±2, P<0.01).DOX单独作用于MCF-7/Adr,IC50为(37.4±2.1)μmol/L,与PDTC共同孵育后DOX的IC50值则显著下降为(6.8±0.8)μmol/L(P<0.05).抑制NF-κB的激活不影响P-pg的表达(P>0.05). 结论:与其亲本药敏细胞相比较,MCF-7/Adr中的NF-κB呈高水平的激活状态.抑制NF-κB的激活可以部分逆转MCF-7/Adr的DOX抵抗,提示NF-κB参与乳腺癌耐药机制的形成.