Tet-on基因表达系统调控HIF-1α表达对肝癌细胞凋亡的影响

目的探讨HIF-1α表达在体外对肝癌细胞凋亡的影响。方法利用Tet—on基因表达系统调控HePG2细胞HIF-1α的表达，观察细胞凋亡。结果酶切和DNA测序证实Tet—on基因表达系统反应质粒P^tre-hif-1α构建成功。获得了受强力霉素调控、稳定表达HIF-1α的肝癌细胞。经阿霉素诱导凋亡后，强力霉素终浓度为0μg／ml、0．02μg／ml、0．2μg／ml、1μg／ml、2μg／ml、5μg／ml时的细胞凋亡率分别为59．6％、50．9％、38．1％、30．5％、23．9％、18．3％；强力霉素0．02μg／ml、0．2μg／ml、1μg／ml、2μg／ml、5μg／ml处理细胞后，Casepase-3活性分别降低了2．3、5．5、8．7、12．6、18．8倍。RT—PCR检测结果显示，随着强力霉素浓度的增加，HIF-1α表达水平增加，Survivin和Bcl-2基因表达强度逐渐增加，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论HIF-1α基因在体外可以抑制肝癌细胞凋亡，而且随着HIF-1α表达水平的增加，对肝癌细胞的凋亡抑制作用进一步加强，可能与HIF-1α诱导survivin和Bcl-2的表达及抑制casepase-3的活性有关。     

两个邻近带蒂肌皮瓣修复面颊部洞穿缺损11例临床观察

面颊部软组织洞穿缺损的修复比较棘手。1995年3月～2005年12月，我们采用两个邻近带蒂肌皮瓣修复面颊部软组织洞穿缺损11例，效果较满意。现报告如下。     

可溶性CD40分子与EGFP融合基因的构建及在树突状细胞中的表达及功能鉴定

CD40与T细胞表面对应的配体CD154（CD40L）相互作用后，可以进一步刺激抗原提呈细胞，上调其CD80／CD86的表达，促进T细胞的活化。可溶性CD40蛋白（soluble CD40，sCD40）由CD40信号肽和胞外功能区构成，能够与膜表面CD40竞争性结合CD40L的功能区域。     

老年肝癌患者肝癌切除术后早期肠内营养支持治疗的临床价值

目的探讨老年肝癌患者肝癌切除术后早期肠内营养支持治疗的临床价值。方法将接受肝癌切除术治疗的76例老年肝癌患者随机分为观察组（38例）与对照组（38例）,观察组患者术后早期接受肠内营养治疗,对照组患者术后接受肠外营养治疗。结果①手术前,2组患者总胆红素（TBIL）、丙氨酸氨基转移酶（AIJT）、白蛋白（ALB）、拟胆碱酯酶（PCHE）、前白蛋白（PA）相比差异无统计学意义（P〉0．05）。手术后第7天,观察组TBIL、ALT显著低于对照组,ALB、PCHE、PA显著高于对照组（P〈0．05）。②手术前,两组患者CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、CD4＋T细胞／CD8＋T细胞比值相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。手术后第7天,观察组上述指标显著高于对照组（P〈0．05）。③观察组术后肺部感染、胆瘘发生率显著低于对照组（P〈0．05）。结论术后早期肠内营养支持治疗可以显著改善老年肝癌患者肝癌切除术后的营养状况及免疫力,降低并发症发生率。     

陈氏简易全肝血流阻断技术的临床应用：附280 例报道

目的：评价陈氏简易全肝血流阻断技术（第一肝门加肝下下腔静脉阻断）对肝创面出血程度的影响。方法：总结2010年1月—2013年1月280例肝脏外科手术患者的临床资料,将肝脏创面出血程度分成0~IV级,观察单纯施行第一肝门阻断及施行陈氏简易全肝血流阻断之后肝断面出血程度的变化。结果：280例患者施行第一肝门阻断之后有98例（35.0%,98/280）获得良好术野,其中肝创面出血程度0级45例,I级53例。另182例在加行肝下下腔静脉阻断之后有115例（41.1%,115/280）获得良好术野,其中肝创面出血程度0级55例,I级60例;47例（16.8%,47/280）肝创面出血程度有所减轻,其中II级39例,III级8例;13例（4.6%,13/280）肝创面出血程度无明显变化,其中II级10例,III级3例;3例（1.1%,3/280）IV级,肝静脉主干损伤导致大出血;4例（1.4%,4/280）因血压降至60 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）以下放弃施行肝下下腔静脉阻断。结论：陈氏简易全肝血流阻断可安全有效地控制术中肝脏断面的出血,其操作简单,有利于实现清晰肝切除、精准肝切除。

     

p1 6和p27在乳腺癌中的表达及其预后意义

目的：研究p16和p27在乳腺癌中的表达并探讨其对预后的意义。方法：对84例乳腺癌,20例乳腺不典型增生以及20例正常乳腺组织进行p16和p27表达的检测并分析其结果。结果：乳腺癌组p16阳性率和p27高表达率均明显高于对照组（P＜0．05）。p16表达与淋巴结转移,临床分期相关（P＜0．05）,p27表达与淋巴结转移,临床分期,局部复发和远处转移相关（P＜0．05）,p16阳性患者术后生存率明显高于p16阴性者（P＜0．05）,p27高表达的乳腺癌术后生存率明显高于p27低表达者（P＜0．05）,p16在乳腺癌中的表达与p27的表达相关（P＜0．01）,p16阳性并且同时有p27高表达的乳腺癌术后生存率明显高于p16阴性并且同时p27低表达者（P＜0．05）,但与单独p16阳性或单独p27高表达者相比无显著差异（P＜0．05）,结论：乳腺癌组的p16的阳性率和p27高表达率明显高于对照组,p16阳性,p27高表达的乳腺癌患者预后好;p16,p27都是乳腺癌独立的预后因子。     

The Roles of Four Multi-drug Resistance Proteins in Hepatocellular Carcinoma Multidrug Resistance

The roles of multi-drug resistance protein 1 (MDR1), multi-drug resistance related pro- tein 1 (MRP1), lung resistance protein (LRP) and breast cancer resistance protein (BCRP) in the multi-drug resistance (MDR) of hepatocellular carcinoma (HCC) were studied. By exposing HepG2 cell line to progressively increased concentrations of adriamycin (ADM), HepG2 multi-drug resistant subline (HepG2/ADM) was induced. The MDR index of HepG2/ADM was detected by using MTT. The expressions of the four MDR proteins in the three cell lines (L02, HepG2, HepG2/ADM) were investigated at mRNA and protein levels by real-time RT-PCR and Western blot respectively. Our re- sults showed that when the ADM concentration was under 100 μg/L, HepG2 could easily be induced to be drug-resistant. The IC50 of the HepG2/ADM to ADM was 282 times that of HepG2. The expres- sion of MDR1 and BCRP mRNA in HepG2/ADM cells were 400 and 9 times that of HepG2 cells re- spectively while there was no difference in the mRNA expressions of MRP1 and LRP. There was no difference between HepG2 and L02 cells in the mRNA expressions of the four genes. At the protein level, the expressions of MDR1, BCRP and LRP but MRP1 in HepG2/ADM were significantly higher than those of HepG2 and L02. Between HepG2 and L02, there was no difference in the ex- pressions of four genes at the protein level. HepG2/ADM is a good model for the study of MDR. The four genes are probably the normally expressed gene in liver. The expressions of MDR1 and BCRP could be up-regulated by anti-cancer agents in vitro. The MDR of HCC was mainly due to the up-regulation of MDR1 and BCRP but MRP1 and LRP. These findings suggest they may serve as targets for the reversal of MDR of HCC.     

Survivin在NF-κB圈套寡核苷酸促进肝癌细胞HepG2凋亡中的作用

目的观察核转录因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究Survivin在其诱导肝癌细胞HepG2凋亡中的作用。方法将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NF-κB圈套寡核苷酸转染至HepG2细胞中,荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位观察,凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测转染前后NF-κB活性变化;流式细胞仪和TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡抑制蛋白Survivin的改变。结果NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降。与未处理组、转染错义组相比,转染NF-κB圈套寡核苷酸组的HepG2细胞凋亡率增加,Survivin蛋白表达下调[(39.8±1.9)、(42.7±2.5)vs(20.1±3.1)]。结论NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肝癌细胞HepG2凋亡的作用,其机制可能与下调Survivin的表达有关。     

乳腺癌耐药蛋白在肝癌多药耐药中的作用及其机制探讨

目的研究乳腺癌耐药蛋白(breastcancer resistance protein,BCRP)在肝癌中的表达及其意义。方法通过培养液中ADM浓度递增诱导法筛选培养,建立HepG2/ADM肝癌多药耐药细胞株;采用荧光定量PCR及免疫组织化学技术,分别在mRNA和蛋白质水平检测BCRP在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HepG2及HepG2/ADM与未经化疗的癌组织、多次化疗后的癌组织、癌旁组织的表达差异。结果HepG2/ADM的BCRPmRNA表达是HepG2的9倍(P<0.01);L02和HepG2中BCRPmRNA的表达无差异(P>0.05);化疗后病人癌组织BCRPmRNA平均表达是未化疗病人癌组织的4.2倍(P<0.01);化疗病人癌组织BCRPmRNA平均表达是癌旁组织的3.4倍(P<0.01);未化疗病人癌和癌旁组织间的表达无差异(P>0.05);免疫组织化学显示BCRP在胞膜表达;BCRPmRNA和蛋白表达具有一致性。结论HepG2/ADM多药耐药细胞株是一个较好的研究肝癌多药耐药的模型。BCRP基因在正常肝细胞中表达,而在多次化疗后的病人和HepG2/ADM中表达上调,提示化疗药物诱导BCRP的表达,BCRP的高表达与肝癌多药耐药有关。     

自体腹膜修补门静脉的临床疗效

门静脉缺损可用自体静脉或人造血管等进行修补，自体静脉来源有限、取材不便，人造血管组织相容性较差，修补静脉易形成血栓、门静脉狭窄等情况，2011年1月至12月我中心采用自体腹膜修补门静脉治疗6例原发性肝癌伴门静脉瘸栓患者，取得满意疗效。