DNA甲基转移酶与EZH2在急性白血病中的表达及临床意义

目的:探讨DNA甲基转移酶(DNMT)1与EZH2在急性髓系白血病(AML)中的表达及其相关性、临床意义。方法:采用荧光定量PCR技术检测50例AML患者骨髓细胞中DNMT1与EZH2mRNA的表达水平,分析DNMT1表达水平与临床特征和预后的关系以及与EZH2的相关性。结果:50例AML患者骨髓细胞中DNMT1mRNA的表达显著高于30例正常供者(2.72±0.73 vs 0.89±0.27,P<0.01);EZH2的表达水平也显著高于正常供者(4.39±1.06 vs 1.87±0.33,P<0.01);EZH2与DNMT1的表达水平呈显著正相关(r=0.51,P=0.002);DNMT1表达水平与外周血幼稚细胞比例≥60%(P<0.05)、白细胞计数≥50×109/L(P<0.05)显著相关;DNMT1高表达组患者中位生存时间15个月(95%CI:9-19个月),显著低于DNMT1低表达组患者的32个月(95%CI:27-40个月)(P=0.006)。结论:DNMT1和EZH2在AML患者中均高表达,两者表达水平呈正相关,DNMT1与AML患者预后不良相关。     

急性髓细胞白血病病人骨髓geminin和cdt1基因表达及意义

目的 探讨急性髓细胞白血病(AML)病人骨髓细胞中geminin和cdt1基因表达水平及其与AML发病和预后关系.方法 采用SYBR Green实时定量逆转录聚合酶链反应(SYBR-RT-PCR)技术,检测47例不同病程AML病人(包括25例初治者,16例完全缓解者,6例未缓解或复发者)骨髓细胞中geminin和cdt1 mRNA的表达,并对25例初治病人进行6个月随访.结果 初治、未缓解或复发AML病人geminin和cdt1表达较对照组及完全缓解组高,差异有显著性(H=4.95、3.22,Z=2.67～4.95,P＜0.01);完全缓解组geminin和cdt1表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1的表达呈明显正相关(r=0.59,P＜0.01);且初治组、完全缓解组及未缓解或复发组两者的表达均呈明显正相关(r=0.49～0.87,P＜0.05).25例AML初治病人随访6个月,死亡6例,存活19例,死亡组geminin表达高于存活组,差异有统计学意义(t=2.16,P＜0.05),而两组cdt1表达差异无显著性(t=0.61,P＞0.05).结论 AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1表达可能与AML的病程有关;geminin在初治病人中的高表达可能是AML病人的不良预后因子.     

死亡相关蛋白激酶在急性白血病细胞中的表达及临床意义

目的 探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)表达与急性白血病(AL)患者临床特征之间的关系.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测DAPK mRNA在54例AL患者(AL组)及18例骨髓移植供者和健康体检者(对照组)骨髓细胞或外周血中的相对表达量.结果 AL组DAPK mRNA表达量(0.104 8±0.094 1)明显低于对照组(0.356 7±0.106 1),差异有统计学意义(P＜0.01).急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DAPK mRNA表达(0.057 7±0.099 5)低于急性髓系白血病(AML)患者(0.119 80±0.088 42),差异有统计学意义(P=0.003 7).DAPK mRNA表达改变与患者WBC计数、纤维蛋白原呈正相关(P＜0.05);与患者的性别、年龄、AML亚型、初诊AL第一次诱导缓解治疗疗效等结果均无相关性(P＞0.05).结论 DAPK mRNA表达在白血病细胞中显著降低.     

AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤1(MN1)基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病(AML)病情发展及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测38例AML病人(初治组16例,缓解组12例,复发组10例)骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组。结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%。初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降(F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P<0.01);缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义(q=2.121、2.756,P<0.05);在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(q=2.361、2.723,P<0.05)。MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标。     

靶向EZH2的shRNA表达对SW480细胞的抑制作用及5-Fu对其影响的研究

目的 研究EZH2特异性shRNA对人结肠癌细胞株SW480细胞的抑制作用和化疗药物5-FU对其干预作用的影响。方法 体外将EZH2特异性shRNA表达载体转染SW480细胞,RT-PCR和Western blotting检测细胞EZH2 mRNA及蛋白的表达,M TT法检测细胞增殖活性;将靶向EZH2的shRNA表达的SW480细胞接种于裸鼠,5-FU对其进行干预,RT-PCR检测瘤组织EZH2 mRNA的表达。结果 与阴性对照组相比,基因沉默组EZH2 mRNA表达明显降低(P<0.01),EZH2蛋白表达明显降低(P<0.05);与空白对照组相比,基因沉默组细胞生长受到明显抑制(P<0.05);接种于裸鼠后,与正常组相比,5-FU基因沉默组与基因沉默组瘤组织体积、质量、EZH2 mRNA的表达均明显降低(P<0.01),与基因沉默组相比,5-FU基因沉默组EZH2 mRNA的表达明显降低(P<0.05)。结论 靶向EZH2的shRNA表达在体外及体内均可显著抑制SW480细胞EZH2 mRNA和蛋白表达及细胞生长;5-FU能显著抑制体内EZH2基因沉默的SW480细胞EZH2 mRNA的表达。     

乳腺癌组织中lncRNA TUG1和EZH2表达水平及其与预后的相关性

目的探讨乳腺癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)和Zes te基因增强子同源物2(EZH2)表达水平及其与患者预后的关系。方法选取2013年2月至2015年12月西南医科大学附属医院收治的102例乳腺癌患者的组织标本为乳腺癌组,另选取癌旁正常组织为癌旁对照组(102例),通过实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中lncRNA TUG1与EZH2表达水平,采用免疫组织化学法检测EZH2蛋白的表达情况。根据检测结果将患者分为lncRNA TUG1低表达组与高表达组,EZH2分为阴性表达组与阳性表达组。分析lncRNA TUG1、EZH2的表达与临床病理参数的关系,采用Pearson法分析lncRNA TUG1、EZH2相关性;采用Kaplan-Meier法对乳腺癌患者的生存情况进行分析;COX多元回归分析影响患者死亡的危险因素。结果乳腺癌组中lncRNA TUG1与EZH2的相对表达量分别为(6.58±0.22)、(1.06±0.12),均显著高于对照组的(2.13±0.14)、(0.30±0.03),差异均有统计学意义(P0.05);且乳腺癌组织中EZH2蛋白阳性率(65.69%)显著高于对照组(37.25%),差异有统计学意义(P0.05)。临床病理参数显示lncRNA TUG1与淋巴结转移、TNM分期、分子亚型及Ki67有关,EZH2与淋巴结转移、分子亚型有关,差异均有统计学意义(P0.05);ln cRNA TUG1与EZH2表达呈显著正相关(r=0.689,P=0.031)。Kaplan-Meier曲线显示,lncRNA TUG1低表达组无病生存率、总生存率(83.86%、84.03%)均高于高表达组(45.87%、60.05%),EZH2阴性表达组无病生存率、总生存率(81.27%、86.62%)均高于阳性表达组(58.17%、48.29%),差异均有统计学意义(P0.05);lncRNA TUG1、EZH2表达均为阳性组患者的无病生存率、总生存率(31.60%、36.80%)均显著低于阴性组(76.60%、85.90%),差异有统计学意义(P0.05);COX多元回归分析显示lncRNA TUG1、EZH2表达均是乳腺癌患者死亡的危险因素,差异有统计学意义(P0.05)。结论乳腺癌组织中lncRNA TUG1、EZH2均高表达,两者呈正相关且表达水平与患者预后相关,可作为乳腺癌患者预后的评定指标。     

DNMT3B对人脐带间质干细胞成骨分化能力的影响

目的研究DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)调控人脐带间质干细胞骨生成的作用。方法利用RNA干扰法获得两株DNMT3B基因低表达的人脐带间质干细胞(Human Umbilical Mesenchymal Stem Cells,hUMSCs)。在使用qPCR和免疫组织化学法确定DNMT3B表达缺失后,对hUMSCs进行骨生成定向诱导分化。并利用免疫组织化学法和茜素红染色评价突变型和野生型hUMSCs成骨能力差异。结果由RNA干扰获得的两株突变型hUMSCs中两株突变型中DNMT3B表达量分别下降至野生型hUMSCs的12.67±0.45%和35.60±0.76%(P<0.05)。而在DNMT3B突变型hUMSCs中间质干细胞标记物CD73和CD90基因mRNA的表达水平也分别下降(P<0.05)。CD73水平分别是野生型细胞的15.83±0.44%和16.60±0.37%(P<0.05);CD90的水平分别是野生型细胞的35.23±0.30%和58.64±0.71%(P<0.05)。在骨生成过程中,免疫组化染色后镜下比较显示DNMT3B突变型的细胞表达Osteocalcin较正常细胞低,qPCR结果表明RUNX2,IBSP和ALPL基因的mRNA表达量水平较正常细胞均明显下降(P<0.01),其中shD3B-1和shD3B-2的RUNX2基因表达水平分别为正常细胞的55.09±0.53%和53.77±0.47%(P<0.01);IBSP基因表达水平分别为正常细胞的53.21±0.81%和41.75±0.44%(P<0.01);ALPL基因表达水平分别为正常细胞的15.55±0.10%和17.86±24%(P<0.01)。同时茜素红染色检测也显示其成骨后细胞成骨功能减弱。结论 DNMT3B突变或缺失会导致hUMSCs骨生成能力下降。     

急性髓系白血病患者独立生长因子1B表达与各亚型诊断及临床治疗结局的关系

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者独立生长因子1B(GFI1B)的表达与各亚型诊断及临床治疗结局的关系。方法:选取AML患者60例(AML组)、急性淋巴细胞白血病患者(ALL组)26例、慢性粒细胞白血病患者(CML组)18例、骨髓增生异常综合征患者(MDS组)24例，健康志愿者(对照组)10例。采用定量聚合酶链反应(RQ-PCR)法检测各组患者GFI1B基因表达水平；并将AML患者根据法国(Franch)、美国(American)和英国(Britain)制定的(FAB)分型标准分型，对患者治疗结局进行分层比较。结果:AML组患者的GFI1B mRNA表达水平显著高于ALL组、CML组、MDS组和对照组，差异具有统计学意义(均P<0.05);CML组患者的GFI1B mRNA表达水平高于ALL组、MDS组和对照组，差异具有统计学意义(均P<0.05);ALL组、MDS组患者的GFI1B mRNA表达水平高于对照组，差异具有统计学意义(均P<0.05);M₇型AML组患者的GFI1B mRNA表达水平显著高于其他分型的AML患者，差异具有统计学意...     

急性髓系白血病患者骨髓溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1的表达分析

目的: 探讨急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者骨髓中溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1（lysophosphatidylcholine acyltransferase 1, LPCAT1）的表达和临床意义。方法: 应用实时定量PCR技术检测60例不同临床分型的AML患者和27例健康对照骨髓标本LPCAT1 mRNA的表达。结果: 与对照组相比,AML患者LPCAT1 mRNA的表达水平显著降低（P<0.001）。60例AML患者中27例（45％）存在LPCAT1 mRNA低表达,而27例对照均未见LPCAT1 mRNA低表达改变,差异有统计学意义（χ2=17.618,P<0.001）。LPCAT1 mRNA低表达与年龄、性别、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白、FAB分型及核型危险分级等均无临床相关性（P>0.05）。LPCAT1 mRNA区分AML患者的受试者工作特征（ROC）曲线下面积为0.896（95% CI:0.825~0.967,P<0.001）,LPCAT1 mRNA表达的截断值为0.173时,敏感性和特异性分别为88.3%和81.5%。 结论: LPCAT1低表达是AML中的常见分子事件,或可用于AML辅助诊断。     

急性髓系白血病CDX2和β-catenin基因表达的相关性

目的研究急性髓系白血病（AML）患者CDX2与β-catenin基因表达的相关性。方法实时定量PCR方法检测92例初诊
AML、30例非恶性血液病患者（对照）CDX2及β-catenin mRNA表达,Western blot检测其中的26例AML、8例非恶性血液病患
者CDX2、β-catenin蛋白表达。结果AML组CDX2 mRNA和蛋白表达阳性率分别为84.78%和76.92%,对照组未检测到表达
（P<0.01）;β-catenin mRNA和蛋白在两组均表达,但AML组显著高于对照组（P<0.01）。CDX2、β-catenin mRNA表达均与初诊
时白细胞数、LDH水平呈正相关（P<0.01）。AML患者获得完全缓解时,CDX2 mRNA转阴、β-catenin mRNA表达显著下降,复
发时两者均增高。AML患者CDX2与β-catenin无论在mRNA和蛋白水平表达均呈显著正相关（P<0.01）。结论AML患者存
在CDX2基因过表达及Wnt/β-catenin信号通路激活,且CDX2与β-catenin表达呈显著正相关。
     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。     

大鼠/小鼠证候及辨证论治方法学的探索与发展

从大鼠/小鼠四诊和辨证方法的提出与创建,大鼠/小鼠计量化辨证方法的建立,荷瘤小鼠证候发生和演变的揭示,大鼠/小鼠异病同证、同病异证的研究,荷瘤小鼠个体化辨证论治及计量化疗效评价,以及不同证候荷瘤小鼠神经—内分泌—免疫网络基因转录与剪接的特征等方面,总结项目组长期以来所提出的系列假说及开展的大量研发工作,对所解决的学术问题,以及该领域存在问题、前沿和发展趋势做了评述。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

Hyperuricemia and gout among Taiwan Aborigines and Taiwanese-prevalence and risk factors

Gout is a metabolic disorder which normally undergoes 4 stages: hyperuricemia, acute gouty arthritis, an intercritical period, and final tophus. Priority associated with gout is hyperuricemia. Only 5%-10% of patients with hyperuricemia will develop gout. Indeed, the serum uric acid level is correlated with the prospects of gouty attack.1 Therefore, study of gout epidemiology should focus on the hyperuricemia of a community or ethnic population. Twenty-three million people live in Taiwan, among them, an ethnic minority of 330 000 native inhabitants (called "Aborigines"), who live mainly in high mountain areas. The rest are "ethnic Taiwanese", most of whom came from the southern Mainland Chinese provinces some 400 years ago. Some of the "ethnic Taiwanese" arrived from the central and northern areas of Mainland China 50 years ago. The languages, dietary habits and cultures of the Taiwanese and Aborigines are completely different.2     

联合应用抗生素测定并鉴别超广谱和Ⅰ型β—内酰胺酶

目的：联合用抗生素测定并鉴别大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌产生的超广谱和Ⅰ型β－内酰胺酶。方法：用头孢噻肟（TX）、头孢他定（CTD）、氨曲南（ATN）、奥格门丁（AOA）、头孢西丁（CXT）和亚胺培能在MH琼脂上进行双纸片搭格耕检测和鉴别大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、沟沟肠杆菌的超广β－内酰胺酶（ESBLs)及Ⅰ型β－内酰胺酶。结果：265株大肠埃希菌、95株肺炎克雷伯菌、67株阴沟肠杆菌均对亚胺培能敏感;对三代头孢菌素的耐药率分别为23．4％、36．8％、58．2％,产生的能水解超广谱β－内酰胺类抗生素的β－内酰胺酶可分为两类,这些菌株对CXT有不同的耐药性,CTX＋CTD＋ATN的ESBLs检出率与单一CTX、CTD、ATN的检出率差异有显性,与CTX＋CTD的ESBLs检出率差异无显性（P＞0．05）。结论：应用不同抗生素可将水解超广谱β－内酰胺类抗生素的β－内酰胺酶分为ESBLs和Ⅰ型,有不同的耐药特点;联合应用两种以抗生素可提高检出率,双纸片搭桥法适合临床使用,临床分离菌株应用将超广谱和Ⅰ型β－内酰胺酶的检测作为常规。     

经络腧穴理论的形成与发展

从<脉书·十一脉><黄帝内经>等文献人手,梳理了血气、经络、腧穴理论的形成与发展,简要介绍了四肢部的基本腧穴、躯体部要穴,以及腧穴配伍的基本要义.     

Hyperuricemia and gout among Taiwan Aborigines and Taiwanese-prevalence and risk factors

Gout is a metabolic disorder which normally undergoes 4 stages : hyperuricemia, acute gouty arthritis, an intercritical period, and final tophus. Priority associated with gout is hyperuricemia. Only 5% - 10% of patients with hyperuricemia will develop gout. Indeed, the serum uric acid level is correlated with the prospects of gouty attack. Therefore, study of gout epidemiology should focus on the hyperuricemia of a community or ethnic population. Twenty-three million people live in Taiwan,among them, an ethnic minority of 330 000 native inhabitants ( called “Aborigines” ), who live mainly in high mountain areas. The rest are “ethnic Taiwanese”,most of whom came from the southern Mainland Chinese provinces some 400 years ago. Some of the “ethnic Taiwanese” arrived from the central and northern areas of Mainland China 50 years ago.The languages,dietary habits and cultures of the Taiwanese and Aborigines are completely different.     

浅谈梅毒的流行与防治

本文报告了梅毒的流行、预防和各期的治疗及胎传梅毒的治疗。     

胆管癌发生与发展的相关基因调控的研究

胆管癌是一种胆管常见的恶性肿瘤,临床上外科根治性切除率低,预后差。近年来随着对胆管癌发病机制研究的不断深入,人们开始从基因水平探索胆管癌的发生和发展机制。已发现胆管癌的发生可能由于ras通路、RB通路等多个信号转导通路中多种基因的点突变、缺失和过度表达,同时伴有多个抑癌基因的共同甲基化。而胆管癌的转移与nm23基因和mammaglobin B基因的过表达有密切联系,同时整合素、CD44等也参与了癌转移的过程。