蛇床子素诱导内质网应激抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的机制研究＊

目的 研究蛇床子素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法 采用20 - 100 μM蛇床子素干预SMMC7721人肝癌细胞24 h、48 h和72 h，运用MTT方法检测细胞增殖；采用20 - 80 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞24 h，运用流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达；采用 60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h，运用流式细胞术检测细胞周期，以实时荧光定量PCR技术检测GRP78、DDIT3、GADD34、ATF4、EIF2A、GDF15、CDKN1B、FOXO3、RICTOR、SGK1基因表达，Western blot方法检测CyclinD1、CyclinE1、p27^Kip1和CDK4细胞周期蛋白及GRP78、GRP94、PERK、XBP-1s、CHOP、p-eIF2α(Ser51)内质网应激蛋白表达。各实验均以0.1% DMSO为对照组，并以0.1 μM毒胡萝卜素为内质网应激诱导剂组。结果 与对照组比较，100 μM蛇床子素干预24 h显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，其抑制率为36.76%（P < 0.05）；60 - 100 μM蛇床子素干预48 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为30.84%-52.49%（P < 0.05）；40 - 100 μM蛇床子素干预72 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为32.7%-73.15%（P < 0.05）。大于60 μM蛇床子素可诱导SMMC7721肝癌细胞晚期凋亡且显著抑制促凋亡蛋白Bax表达（P < 0.05）。60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h后，G1期细胞数增加、G2期和S期减少，且CyclinD1、CyclinE1和p27^Kip1蛋白表达显著被抑制（P < 0.05）。20 - 80 μM蛇床子素处理SMMC7721肝癌细胞24 h后，均显著促进GRP78、DDIT3（CHOP）、ATF4、FOXO3、RICTOR和SGK1基因表达（P < 0.05）； 20 μM蛇床子素显著促进GADD34和EIF2A基因表达（P < 0.05）；80 μM蛇床子素显著促进GDF15基因表达（P < 0.05），且CHOP、XBP-1s蛋白表达显著增强。结论 蛇床子素通过诱导内质网应激反应以抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，从而发挥抗肝癌活性。     

氢化可的松诱发虚证模型小鼠的证候特征再评价及肾上腺皮质功能变化研究

目的研究氢化可的松诱发虚证模型小鼠的证候特征及其可能的物质基础。方法将60只雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组和模型组,每组30只。正常对照组自由饮水与摄食,模型组自由饮用剂量递减的氢化可的松溶液。其中,0.015 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用3天;0.010 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用5天;0.007 5 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用7天。在造模的第8天、第15天,采用本课题组建立的小鼠四诊标准采集技术与辨证方法判断小鼠的证候属性;于造模的第3天、第8天、第15天分批处死小鼠,取肾上腺组织,分别抽提RNA和蛋白质,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达,以Western blotting法检测类固醇合成急性调节蛋白(STAR)表达,并以ELISA方法检测血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。结果 ?与正常对照组比较,模型组小鼠在造模期间,消瘦、体质量增长显著减慢(P0.05),被毛蓬松易脱落、光泽度下降,活动度降低、喜蜷缩,体温尤其是尾部温度下降,爪部色泽变化不明显。②造模第15天,与正常对照组比较,模型组小鼠气虚证、阴虚证明显,肾上腺、脾脏与胸腺持续性萎缩(P0.05);血液ACTH水平下降(P0.05);肾上腺皮质激素合成过程重要受体Srb1、Ldlr基因表达降低(P0.01),类固醇激素合成酶Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达及其酶的调节因子Fdx1、Fdxr、Nr4a1、Nr4a2、Nr5a1基因表达显著下降(P0.05),以及STAR蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论氢化可的松复制的小鼠模型属于虚证模型,具有气虚与阴虚证的特征;参与肾上腺皮质激素合成的重要功能分子涉及相关证候的发生。     

集成数字证书的非接触式医院一卡通平台设计与应用

针对暨南大学附属第一医院一卡通平台建设中遇到的问题，介绍流程再造后医院的非接触式一卡通综合管理平台，该平台综合使用M1卡、CPU卡及非接触式电子签名技术，实现一卡通系统数据资源最大化利用及医院对患者与职工的数字化、智能化、一体化管理。     

温补肾阳中药对虚证模型小鼠肾上腺皮质激素合成的调节作用

  目的：研究温补肾阳中药及其配伍对虚证模型小鼠肾上腺皮质激素合成的影响。  方法：120只雄性ICR小鼠随机分成10组,即对照组、模型组、淫羊藿(5.3 mg·kg-1·d-1)组、仙茅(4.3 mg·kg-1·d-1)组、巴戟天(4.3 mg·kg-1·d-1)组、杜仲(5.3 mg·kg-1·d-1)组、补骨脂(5.3 mg·kg-1·d-1)组、菟丝子(6.0 mg·kg-1·d-1)组、肉苁蓉(5.3 mg·kg-1·d-1)组以及配伍(各单味中药等比例混合,4.7 mg·kg-1·d-1)组,每组12只。除对照组外,其他各组小鼠灌胃给予0.66 mg·kg-1·d-1氢化可的松溶液,连续14 d,以复制药源性虚证模型。造模同时,各中药干预组及配伍组小鼠灌胃给予相应药液,连续14 d。末次给药后,称量小鼠体质量;采集血清和双侧肾上腺组织。ELISA检测血清皮质酮含量;PCR检测肾上腺相关基因的表达,包括类固醇激素合成酶(Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Hsd3b1)、胆固醇转运分子(Star、StarD3、Npc1、Npc2)、胆固醇摄取分子(Ldlr、Scarb1)、胆固醇合成限速酶(Hmgcr)、胆固醇储存分子(Lipe、Acat1)、胆固醇流出分子(Abca1、Abcg1)、胆固醇稳态分子(Srebf2、Nr1h3);Western blot检测肾上腺CYP11A1、CYP21A2、HSD11B1、StAR、NPC1、NPC2、LDLR、SRBI、HSL、ACAT1的蛋白表达。  结果：①与模型组相比,各中药干预组及配伍组小鼠的体质量和血清皮质酮含量无明显变化(P>0.05)。②与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Cyp21a1 mRNA表达和CYP11A1蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组相比,淫羊藿组和仙茅组Cyp21a1 mRNA表达明显上调(P<0.05),各中药组及配伍组CYP11A1蛋白表达呈上调趋势。③与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Star和Npc1的mRNA表达及StAR和NPC1蛋白表达显著降低(P<0.05,P＜0.01),NPC2蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比,淫羊藿组、仙茅组、杜仲组、菟丝子组及配伍组StAR蛋白表达明显升高(P<0.05,P＜0.01),各中药组NPC1蛋白表达量增多,以补骨脂作用最为显著(P<0.05),除杜仲组外其他中药干预组及配伍组NPC2蛋白表达明显下调(P＜0.01)。④与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Ldlr、Scarb1的mRNA表达以及LDLR、SRBI的蛋白表达均显著降低(P<0.05,P＜0.01);与模型组相比,仙茅组、补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组Ldlr mRNA表达明显下调(P＜0.01),杜仲组、菟丝子组及配伍组SRBI蛋白表达显著升高(P<0.05,P＜0.01)。⑤模型组小鼠肾上腺Hmgcr mRNA表达及HSL蛋白表达较对照组显著降低(P＜0.01);与模型组相比,仙茅组、巴戟天组、杜仲组、补骨脂组、肉苁蓉组Hmgcr mRNA表达明显降低(P<0.05,P＜0.01),淫羊藿组、补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组HSL蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。⑥模型组小鼠肾上腺Abcg1 mRNA表达较对照组显著升高(P＜0.01);与模型组比较,除肉苁蓉组外,其他各中药干预组及配伍组的Abcg1 mRNA表达均显著降低(P<0.05,P＜0.01)。⑦模型组小鼠肾上腺Srebf2 mRNA表达较对照组显著降低(P＜0.01);与模型组相比,补骨脂组、肉苁蓉组及配伍组Srebf2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P＜0.01),且补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组Nr1h3 mRNA表达显著降低(P<0.05)。  结论：温补肾阳中药可调节氢化可的松诱导的虚证模型小鼠肾上腺皮质激素的合成能力,其中以淫羊藿、仙茅、杜仲、菟丝子的作用较为显著。     

Y1细胞生物学特性及其在肾上腺皮质功能研究中的应用

肾上腺皮质功能减退、肾上腺糖皮质激素分泌减少是肾虚证发生的主要物质基础,因此肾上腺皮质细胞在探索肾虚及补肾机制研究方面具有重要价值。Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞(Y1细胞)已广泛用于肾上腺皮质功能的体外研究。综述Y1细胞的来源、不同细胞系的衍变、类固醇激素的合成途径以及Y1细胞增殖与功能相关的信号通路,以期为肾虚证发病机制、补肾中药的有效成分筛选及作用机制研究提供参考。     

有限切开结合LISS钢板治疗股骨髁间髁上粉碎骨折

目的探讨有限切开结合LISS钢板治疗股骨髁间髁上粉碎性骨折的手术方法及手术疗效。方法有限切开应用LISS钢板以桥接的形式治疗股骨髁间合并髁上粉碎性骨折21例。男13例,女8例;年龄17～36岁,平均29.3岁。其中开放性骨折7例,闭合性骨折14例,合并多发伤17例。结果全部病例得到随访,时间3个月～1年,平均10个月。1年内均无明显骨不连病例。根据美国特种外科医院（hospital for special surger,HSS）功能评分及长管状骨愈合评价标准,本组优6例,良13例,中2例,优良率90.4%。结论股骨髁间合并髁上粉碎性骨折的形式复杂,治疗比较困难,行有限切开应用LISS钢板以桥接的形式进行治疗可最大程度地保留骨折部的血运,有利于骨折的早期愈合并减少术后并发症。     

PBL教学模式在中医学综合实验教学中的实践与评价

背景：探讨中医学综合实验课程引入PBL教学模式的教学效果。方法：观察我校选修该课程的2004级、2005级中医七年制2个本科生班学生,在PBL教学结束后发放并回收问卷调查表。结果：（1）大多数学生对该课程采用PBL教学产生了浓厚的兴趣,堂课气氛十分活跃。（2）71％．100％学生认为该课程引入PBL教学有利于其能力的培养,但是尚有一定比例（0．29％）学生不认可。（3）与传统教学相比较,PBL教学最大优点是提高了学生自主学习的积极性,增强了学生的中医科研思维能力,提升了学生的表达沟通能力。（4）值得注意的是,PBL教学形式相对复杂,学生负担增加,难以完全理解与消化所查阅的中医科研前沿文献。结论：中医学综合实验课程引入PBL教学模式达到预期教学目标,但如何探索PBL教学与传统教学相结合的新模式,值得进一步研究。     

银杏内酯对过氧化氢损伤的皮层神经元和SH—SY5Y细胞亲环蛋白A（CypA）表达的影响

目的：研究银杏内酯（ginkgolides,Gin）对过氧化氢（H2O2）诱导的皮层神经元及SH-SY5Y细胞（神经母细胞瘤细胞）损伤的保护作用及其机制。方法：在培养1周的小鼠皮层神经元培养基中加入H2O2,建立神经元氧化损伤模型,用同样方法建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。采用MTT比色法检测细胞活力,Western Blot技术分析亲环蛋白A的表达变化。结果：H2O2可诱导神经元和SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力降低,可下调亲环蛋白A的表达;Gin预处理12 h可提高细胞活力,可使亲环蛋白A表达增加。结论：Gin可抑制H2O2引起的神经元及SH-SY5Y细胞损伤,该保护作用与其上调亲环蛋白A的表达有关。     

同病异证H22肝癌小鼠甲状腺机能及激素合成关键基因表达特征

目的：观察同病异证H22肝癌小鼠甲状腺机能及激素合成相关基因表达特征。方法：采用标准化诊法技术在接种同样H22腹水癌细胞数的昆明种小鼠中,筛选出不同组别的同病异证肿瘤小鼠,以ELISA法检测血清甲状腺激素水平,以RTqPCR法检测激素合成相关基因mRNA水平的改变。结果：①筛选出濒危组、邪毒组、邪中组、邪微组,及邪中兼气虚组（简称气虚组）等5个同病异证组小鼠。②甲状腺激素T3在肿瘤早期有升高趋势,邪盛衰度增加则出现下降;T4在肿瘤发生后迅速出现抑制。③激素合成相关基因Tshr、Tpo、Nis、Tg等基因转录水平总体表现出邪盛衰度低者表达量相对较高,高者表达量相对较低的趋势。结论：肿瘤发生后,邪盛衰度与荷瘤小鼠甲状腺机能抑制程度有关,邪毒微弱时呈代偿状态,加重后转而出现失代偿状态,是因实致虚,同时激素合成关键基因亦发生相应变化,从而影响甲状腺激素水平。     

双层羊膜覆盖术治疗春季角结膜炎重度角膜盾形溃疡一例

 一例9岁男童,双眼春季角结膜炎,左眼III级盾形溃疡,行左眼病灶切除联合双层羊膜粘合覆盖术,术后给予局部糖皮质激素、抗过敏、免疫抑制剂治疗,角膜恢复上皮完整,残留云翳。（眼科, 2021, 30： 77-78）