LPS刺激对RAW264.7细胞p38蛋白激酶的细胞内定位的影响

探讨Ｐ３８蛋白激酶信号传导的过程及其在细胞中的特异性作用机制。方法应用间接荧光标记免疫探讨技术及共聚焦激光扫描技术观察单核细胞中Ｐ３８蛋白激酶的分布及ＬＰＳ对其分布的影响。结果Ｐ３８在未受刺激的卢核及皮生长因子（ＥＧＦ）刺激的单核细胞胞浆和胞核中荧光强度均呈弥散性分布：脂多糖（ＬＰＳ）刺激使细胞核区的荧光强度明显增强,而胞浆区域的荧光强度降低。激酶动力学的研究显示,。Ｐ３８激活先天于Ｐ３８移位。Ｌ     

脂多糖激活p38在诱导肿瘤坏死因子α基因表达中的作用

目的探讨防治内毒素休克的新方法，研究脂多糖（ＬＰＳ）诱导肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）表达的分子机制。方法用蛋白激酶活性测定检测ＬＰＳ刺激引起的激酶活性变化；共聚焦激光扫描技术显示ｐ３８激活移位；用反转录聚合酶链反应和报告基因系统研究ＴＮＦα基因转录的分子机制。结果发现ＬＰＳ刺激ＲＡＷ细胞引起ｐ３８激活并由胞浆移位至胞核。ＬＰＳ刺激引起ＴＮＦαｍＲＮＡ表达增加，而且由ＬＰＳ引起的ＴＮＦα的转录活性可被ｐ３８特异性抑制剂所抑制。结论激活的ｐ３８通过磷酸化转录因子增加ＴＮＦα基因转录活性，这是中毒性休克时ＴＮＦα生成增加的一个重要机制。ｐ３８是ＬＰＳ诱导ＴＮＦα基因表达的重要调节物质。     

p38蛋白激酶不同亚型在RAW264.7细胞中的定位

目的 探讨p38的4种亚型在细胞中的分布以及对外界刺激的反应。方法 应用激光共聚焦显微镜对RAW264.7单核细胞内的4种亚型进行定位观察。结果 p38(、p38(在未受刺激的静息细胞内的荧光强度呈弥散性分布,受脂多糖（LPS）刺激后,细胞核荧光强度明显增强,细胞浆荧光强度降低,提示LPS诱导p38(和p38(磷酸化活化后移位入细胞核。p38(在静息和受LPS刺激后的细胞中均呈散在、弥漫性地分布,提示p38(刺激后无移位现象。静息时,p38(弥散地分布于细胞,刺激后细胞核膜部荧光强度增高,提示受刺激后p38(移位于核膜周围。结论 p38不同亚型在细胞受LPS刺激后移位表现不同,可能与它们在组织和细胞分布的特异性及作用途径有关。     

细菌脂多糖诱导THP1细胞丝裂原信号传导通路活化及细胞因子释放

丝裂原活化的蛋白激酶(ＭＡＰＫ)系列包括一蛋白激酶瀑布群,即癌基因ｐ21ｒａｓ和或蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ),ｒａｆ1蛋白激酶,丝裂原活化蛋白激酶的激酶1和2(ＭＥＫ)以及ＭＡＰＫ(也称细胞外信号调节的蛋白激酶ＥＲＫ)。细菌脂多糖是巨噬细胞的强力活化剂,能刺激巨噬细胞释放多种细胞因子和二十烷类免疫反应介质。已有报道,细菌内毒素脂多糖(ＬＰＳ)刺激ＭＡＰＫ磷酸化及活化并诱导肿瘤坏死因子(ＴＮＦα)和ＩＬ1β产生[1]。为明确ＬＰＳ及癌基因ｒａｓ和蛋白激酶ｒａｆ在调节丝裂原信号传导通路活性中的作用,更好了解ＬＰＳ激活单核巨噬细胞的…     

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C亚型表达的关系

目的探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的关系。方法(1)用Westernblotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布;(2)流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果(1)PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高,而PKCβ、ε无显著变化,PKCγ、ζ则未测出表达;(2)流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高,PKCβ、ε则无显著差别。结论PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中,PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。     

脂多糖对血管平滑肌细胞一化氮合酶基因表达的影响

探讨脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ,ＬＰＳ）对大鼠血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ,ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ,ＮＯ）合成的影响。方法细胞培养,ＲＮＳ迹分布和亚硝酸盐含量。结果ＬＰＳ是ｉＮＯＳ的强效诱导物,可在转录水平上诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳｍＲＮＡ表达,促进ＮＯ的合成,其作用强度与ＬＰＳ剂量呈正相关;刺激     

商陆皂甙甲对人外周血单核细胞产生肿瘤坏死因子的抑制作用

研究商陆皂甙甲对脂多糖刺激人外周血单核细胞产生肿瘤坏死因子的影响。方法：用Ｌ９２９细胞作靶细胞的生物测定法，检测与ＥｓＡ共育的受ＬＰＳ刺激的人外周血单核细胞上清中ＴＮＦ的含量。结果：当ＥｓＡ浓度在１和１０μｍｏｌ／Ｌ时，受ＬＰＳ刺激的人单核细胞产生ＴＮＦ显著减少。     

KBV2000细胞多药耐药蛋白激酶C亚型表达的关系

目的 探讨蛋白激酶C(protein kinaseC，PKC）亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药（multidrug resistance，MDR）的关系。方法 （1）用Western blotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布；（2）流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果 （1）PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高，而PKCβ、ε无显著变化，PKCγ、ζ则未测出表达；（2）流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高，PKCβ、ε则无显著差别。结论 PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中，PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。     

自发性高血压大鼠后肢血管床α1肾上腺素受体亚型特征

研究自发性高血压大鼠阻力高管α１肾上腺素受体亚型特征。选用大鼠后肢血管床灌流功能性实验和分别表达３种α１－ＡＲ亚型的克隆细胞上放射性配体结合实验。结果，ＳＨＲ和和正常大鼠后肢血管床α１－ＡＲ介导收缩的ｐＤ２ＷＦＨＧＷＶ ＫＬＪ Ｏ ５．３６±Ｓ     

层粘连蛋白总糖肽增强巨噬细胞肿瘤杀伤功能的机制探讨

目的：探讨层粘连蛋白总糖肽（ＬＮ－Ｇｐｓ）增强巨噬细胞（Ｍψ）杀伤黑色素瘤Ｂ６１－ＭＢＫ细胞作用的机制。方法：将细菌脂多糖（ＬＰＳ，５ＥＵ／ｍｌ），甘露聚糖（Ｍａｎｎａｎ，１０ｍｇ／ｍｌ），ＬＮ－Ｇｐｓ（２００μｇ／ｍｌ）及ＰＢＳ（对照），１００μｌ／孔，分别刺激小鼠腹腔Ｍψ，并于持续刺激６，８，１６，２４，３２，４０ｈ后观察Ｍψ对Ｂ１６细胞的直接杀伤作用及其条件培养基对Ｂ１６细胞的杀伤作用。结果     

大鼠血管功能性α1肾上腺素受体的亚型分析

研究大鼠不同血管中α１ 肾上腺素受体（α１ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ,α１ＡＲ） 亚型的分布情况及其功能意义。方法：采用离体血管收缩功能实验,测定α１ＡＲ 选择性拮抗剂抑制大鼠血管ＮＥ收缩反应的功能性亲和常数（ｐＡ２） ,与分别表达α１Ａ、α１Ｂ和α１ＤＡＲ的克隆细胞上结合常数（ｐＫｉ）作相关性分析,以判断血管中的α１ＡＲ 亚型分布。结果：哌唑嗪、ＷＢ４１０１ 、５ＭＵ、ＢＭＹ７３７８ 和ＲＳ１７０５３ 分别竞争性地抑制血管对ＮＥ 的收缩效应,ｐＡ２ 值与这些拮抗剂对克隆α１Ａ、α１Ｂ、α１ＤＡＲ 的ｐＫｉ 值间的决定系数在肺动脉分别为０ ．０５、０．４５、０．７７ ;在肠系膜动脉分别为０．０２、０．４７ 、０ ．８７ ;在尾动脉分别为０ ．７７ 、０ ．７７ 、０ ．４４ ;在门静脉分别为０ ．７９ 、０ ．８１、０ ．２７。结论：大鼠肺动脉、肠系膜动脉的功能性α１ＡＲ主要为α１ＤＡＲ;而尾动脉与门静脉的功能性α１ＡＲ主要是α１Ａ和α１Ｂ亚型。     

IL—12,LPS对肾小管上皮细胞中lck／P38信号传递的影响

目的：探讨ＩＬ－１２、ＬＰＳ对肾小管上皮细胞中ｌｃｋ基因表达及活性改变的影响，明确ｌｃｋ／Ｐ３５信号传递途径在炎症过程的作用。方法：用原位杂交、放射自显影分别检测ｌｃｋ基因表达及ｌｃｋ活性，用免疫印迹法对明小管上皮细胞在ＩＬ－１２、ＬＰＳ刺激下其Ｐ３８磷酸化进行测定。结果：肾小管上皮细胞径ＩＬ－１２，ＬＰＳ刺激后ｌｃｋｍＲＮＡ表达水平增高，ｌｃｋ知性在刺激后５ｍｉｎ时最强，加入ｌｃｋ抑制剂ＰＰ１     

IL—1受体Ⅰ型在大鼠颈上节神经元中的表达

目的 在蛋白水平研究３ＩＬ－１受体１城大鼠颈上节中的表达。方法 免疫组织化学ＡＢＣ方法。结果 在正常大鼠颈上节中，有大量ＩＬ－１受体１型免疫反应阳性细胞，多为中、小型神经节细胞，也有一些小强荧光细胞（ＳＩＦ）呈ＩＬ－１受体１型阳性。ＬＰＳ免疫刺激后，阳性细胞的数量和染色强度无明显变化。结果 大鼠颈上节神经元存在ＩＫ－１受体，表明周围植物性神经元能对促炎性细胞因子起反应。本研究为免疫性细胞因子影响植     

山莨菪碱对核因子-κB活化的抑制作用

观察山莨菪碱和脂多糖共同处理单核细胞（Ｍ）后对核因子－ｋＢ抑制蛋白降妥和核因子－ｋＢ活化的影响。方法分离、培养Ｍ,分为正常对照组;ＬＰＳ刺激组;６５４－２干预组（６５４－２ １０ｎｇ／ｍｌ）预孵育１ｈ后加入ＬＰＳ１０μｍｇ／ｍｌ）分别在刺激前（０）、刺激后０．２５、０．５、１和２ｈ留取Ｍ。检测Ｍ中ＩｋＢα水平和核提取物中ＮＦ－ｋＢ的活性。结果ＬＰＳ刺激组ＩｋＢα水平１５ｍｉｎ开始降低３０ｍｉｎ降到     

不同浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞表达p21WAF1的影响

目的：观察不同浓度的葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞ｐ２１ＷＡＦ１表达的影响。方法：大鼠腹膜间皮细胞在含糖１３．８ｇ／Ｌ和３８．６ｇ／Ｌ的无血清培养基培养２４ｈ后,用流式细胞仪分析细胞周期分布,用ＲＴ－ＰＣＲ法测定ｐ２１ＷＡＦ１的表达水平。结果：经含糖１３．８ｇ／Ｌ和３８．６ｇ／Ｌ培养基培养２４ｈ后腹膜间皮细胞大多出现细胞肥大和停滞于细胞周期的Ｇ１期,以３８．６ｇ／Ｌ组明显。高浓度葡萄糖刺激ｐ２１ＷＡＦ１     

胰岛素对蛋白激酶C亚型在人动脉平滑肌细胞中分布和含量的影响

目的：了解动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）含量及亚型分布，以及与细胞增殖的关系。方法：采用点印迹技术及ＭＴＴ方法，检测了人ＡＳＭＣ颗粒部分与胞浆部分ＰＫＣ的６种亚型的含量和分布。结果：①人ＡＳＭＣ细胞中主要有ＰＫＣα、ＰＫＣβ、ＰＫＣζ３种亚型分布，并发现６３％分布在胞浆中；②人ＡＳＭＣ细胞ＰＫＣ总量随着佛波酯（ＰＭＡ）、胰岛素浓度的增加而增加，人ＡＳＭＣ细胞增加数量也随着ＰＭＡ、     

胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR中P-gp与PKC同工酶亚型α的表达

目的 观察Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）与蛋白激酶Ｃ同工酶亚型（ＰＫＣα）在ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ耐药细胞系的相关表达及其功能。方法 采用免疫细胞化学检测Ｐ－ｇｐ在ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及其亲本药敏细胞ＳＧＣ７９０１的表达;免疫荧光双标及激光共聚焦显微镜技术（ＬＣＳＭ）观察Ｐ－ｇｐ与ＰＫＣα的相关表达;流式细胞仪检测细胞内罗丹明１２３（Ｒ１２３）的荧光强度。结果 Ｐ－ｇｐ及ＰＫＣα在细胞膜上有共同表达部位     

培养细胞SAA3启动子调控基因表达及对炎症信号的响应特性研究

利用构建的血清淀粉样蛋白启动子报告基因表达观察ＳＱＱ３启动子／增强子应用于调控目的基因在培养细胞株的表达及对炎症刺激的响应特性,探索ＳＡＡ３用于调控靶基因的可能性,方法：ｐＳＡＡ３ＣＡＴ３采用脂质体转当Ｕ９３７细胞,肝细胞株ＳＭＭＣ７７２１,４８ｈ后ＬＰＳ,重组ｒＩＬ－６＋ｒＩＬ－１、ａｎｄ ｋｔａ ｘｌｅｑｉｔｄ ｗｘ ｈ ｉｇｅ ａｔｙ ｆｍ ｋ,ｉｍｊ ｐｇ ｉ ｍ ｊｆｕｊＣＡＴｒ ｙｔｅ     

PKC亚型选择性与辐射诱导肝HepG2细胞凋亡

目的 探讨PKC在X线辐射诱导HepG2凋亡中发挥抗凋亡作用的PKC亚型选择性.进一步明确引起放射耐受的PKC亚型.方法 MTT法检测细胞存活率;HepG2细胞常规方法培养;细胞分对照组(不加任何处理因素)、辐射组(单纯6 GyX线辐射);Varian2100直线加速器,6 MV X线,剂量6 Gy,剂量率为400 cGy/min辐射细胞;流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度和阳性细胞百分数及细胞凋亡率.结果 辐射组HepG2细胞的PKCa平均荧光强度为2.28,与对照组细胞比较,差别具有显著统计学意义(P<0.05);辐射组细胞PKC 8平均荧光强度为5.03,与辐射前比较差别显著(P<0.01);而PKCζ、γ、ε、θ在两组细胞中平均荧光强度较低,且两组间差别不显著(P>0.05),未检测到PKC B的表达.PKCα、δ的阳性细胞百分数在对照组及辐射组较其他所测亚型为高,且辐射亦使这两种PKC亚型的阳性细胞百分数升高;其他所测亚型阳性细胞百分数较低,且辐射对它们的影响不明显.结论 PKC α、δ可能在辐射诱导凋亡的保护作用占主导地位.     

bax加强表达对Raji细胞程序性死亡效应

目的：研究ｂａｘ过量表达对Ｂｕｒｋｉｔ淋巴瘤细胞株细胞程序性死亡的效应及其机理。方法：亚克隆构建可过量表达ｂａｘα的真核表达载体，通过脂质体转染法导入Ｒａｊｉ细胞株中。ＰＣＲ及免疫荧光定量鉴定ｂａｘα在Ｒａｊｉ细胞株中的表达；流式细胞仪检测凋亡率。结果：成功构建ｐＳＦＦＶｂａｘαＳ和ｐＳＦＦＶｂａｘαＡＳ两种质粒，转染Ｒａｊｉ细胞后，测得转染ｐＳＦＦＶｂａｘαＳ的Ｒａｊｉ细胞的ｂａｘα表达量明显高于转染空载ｐＳＦＦＶｎｅｏ质粒的Ｒａｊｉ细胞株。φ（胎牛血清）＝０．０１诱导两种Ｒａｊｉ细胞４８ｈ，Ｒａｊｉｂａｘα的凋亡率为４８．６％，Ｒａｊｉ０的凋亡率为６．４％。结论：ｂａｘα在Ｒａｊｉ细胞中的加强表达可明显促进细胞的凋亡。