乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用

目的　构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体 ,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)S蛋白 ,用以制备乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)酶免试剂盒。 方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列 (adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因 ,并将其插入pPICZB质粒。携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H ,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白。表达产物包被聚丙乙烯反应板 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测HBsAb。结果　酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达 ;表达量约占总蛋白的 2 5 %～ 35 %。表达产物用ELISA测定效价达 1∶2 5 6 0 0 ;Westernblot显示与正常人血清无交叉反应 ;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测 ,灵敏度达 10mIu/ml,特异性达 10 0 % ,重复性及线性良好 ,与国产商品试剂检测结果一致。结论　毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,可用于基因工程原材料的HBsAb酶免试剂盒的研制     

糖尿病大鼠肾组织核因子κB活性与血管紧张素系统的关系

背景:目前已知血管紧张素Ⅱ在糖尿病肾病发病中起重要作用。因此,核因子κB对糖尿病大鼠肾组织血管紧张素系统可能有调节作用。目的:观察抑制核因子κB活性与糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ及其1型受体mRNA表达的关系。设计:完全随机分组设计,对照实验。材料:实验于2000-03/04在中山医科大学实验动物中心完成。选用51只纯种清洁级雄性Wistar大鼠。方法:①对其中39只大鼠进行造模,采用链脲佐菌素溶于枸橼酸缓冲液穴0.1mmol/L,pH=4.5雪,按60mg/kg腹腔内注射,制备糖尿病模型,空腹血糖维持在13.9mmol/L以上则模型制备成功。随机将造模后39只大鼠分为3组:模型组穴n=17,未给予其他干预措施,正常饲养雪和吡咯烷二硫基甲酸酯(核因子κB活性抑制剂)干预组眼n=22,腹腔内注射吡咯烷二硫基甲酸酯(剂量20mg/kg),2次/d演。其余12只为正常对照组,未造成糖尿病模型,正常饲养。②各组饲养18周后取出肾脏,电泳迁移率变动分析技术检测核因子κB活性,采用反转录聚合酶链反应法检测血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达,采用放射免疫分析法检测血管紧张素Ⅰ与血管紧张素Ⅱ含量。37℃水浴后的血管紧张素Ⅰ水平减去4℃检测的血管紧张素Ⅰ水平则为肾素活性。③计量资料差异性比较采用单因素方差分析,非正态分布资料经正态转换后再作统计学处理。主要观察指标:各组大鼠肾组织血管紧张素Ⅰ,Ⅱ含量和肾素、核因子κB活性及血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达比较。结果:正常对照组、模型组、吡咯烷二硫基甲酸酯干预组大鼠各脱失1,6,13只,进入结果分析11,11,9只。①核因子κB活性:模型组明显高于正常对照组和吡咯烷二硫基甲酸酯干预组(P<0.01),正常对照组与吡咯烷二硫基甲酸酯干预组相近。②肾组织肾素活性:3组相近。③肾组织血管紧张素Ⅰ含量:模型组明显高于正常对照组和吡咯烷二硫基甲酸酯组(P<0.01)。④肾组织血管紧张素Ⅱ含量:模型组与正常对照组相近,吡咯烷二硫基甲酸酯组明显低于模型组和正常对照组(P<0.01)。血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达:模型组明显低于正常对照组(P<0.01);吡咯烷二硫基甲酸酯组明显低于模型组和正常对照组(P<0.01)。结论:糖尿病大鼠肾组织核因子κB活性增加,抑制核因子κB活性后可导致糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ水平及血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达下降。     

抗体F(ab′)_2片段制备的新方法—木瓜蛋白酶酶切法

制备抗体的F(ab′) 2 片段的传统方法是胃蛋白酶消化法 ,然而不同IgG亚类对胃蛋白酶消化的敏感性不一样 ,尤其是IgGl最难消化 ,甚至有抗性 ,得率很低[1] 。本文报道了F(ab′) 2 片段制备的一种新方法—木瓜蛋白酶法。我们采用该方法将抗人肝癌抗体HAb18、抗人SIgA单抗 4E3 酶切     

亚致死量~(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓造血细胞程序性死亡特性研究

照射可引起免疫器官萎缩和免疫功能抑制,研究发现其机制为照射后胸腺细胞发生了程序性死亡(programmed cell death,PCD)。骨髓组织对射线也很敏感,造血细胞辐射损伤机制目前尚不清楚。本实验研究从超微结构、DNA裂解、PI染色FACS分析等方面,动态地观察了~(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓细胞的变化。实验采用成年SPFBALB/c小鼠。2.0,4.0,6.0Gy照射后6小时透射电镜显示细胞出现空泡,有不同程度的固缩;第3,6,9,12,24,36小时测得DNA裂解百分率较对照组增高;27000×g上清DNA琼脂糖凝胶电泳有大量小分子片段,分子量约为180bp的整倍数,呈典型梯状图谱;FACS分析也表明PCD细胞百分率于第3小时增高,渐增强,24小时达高峰。实验表明,亚致死量照射可引起骨髓有核细胞PCD。由于造血干细胞在形态上难以辨认,故射线有无引起造血干细胞PCD尚不能肯定,有待进一步研究。     

随机扩增DNA多态性技术在A组链球菌分型上的应用

目的 了解A组乙型溶血性链球菌的基因分型状况。方法 采用随机扩增多态性DNA技术(Random amplified polymorphic DNA，RAPD)，对1988～1994年度．从广东城市和农村，1993～1994年度，从湖北、吉林9～11岁学龄儿童分离的179株GAS进行RAPD分析。结果 ①同一T型的菌株有特征性条带，但有些亚型带型间差异较大：②不同T型间可有相同的带型；③分型率比T分型高，达到96．6％；④有主导RAPD型菌株流行的情况存在。结论 RAPD方法对GAS分型及流行病学中有一定的应用价值，可以区别同一血清型不同地区来源的GAS。     

免疫介导再生障碍性贫血小鼠血清诱导骨髓造血细胞凋亡及？…

目的：探讨再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓造血细胞损伤的机制。方法：以重组的人ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３作为造血细胞存活因子，实验组以再障小鼠血清加入正常小鼠骨髓细胞培养体系，同时设立正常小鼠血清培养组和无小鼠血清培养组两个平行对照组。结果：实验从超微结构、流式细胞仪及ＤＮＡ裂解分析三方面证实再障小鼠血清诱导骨髓细胞发生凋亡。在一定浓度范围内，随再障小鼠血清浓度的增高，其诱导ＤＮＡ裂解百分率逐渐增高。再     

树突状细胞与HIV-1免疫治疗

抗原提呈细胞(APC),尤其是树突状细胞(DCs)的抗原靶向及活化作用,在疫苗研究中是非常重要的。在HIV-1感染中,DCs具有诱导和维持抗原特异性T细胞免疫反应功能。目前临床试验表明DC免疫治疗在HIV-1感染患者身上是安全和有效的。本文主要对DCs的分化、迁移、成熟及HIV-1的DCs免疫治疗效应、抗原类型、临床试验等进行阐述。     

转导入baxα基因的CNE—2B细胞株凋亡及其裸鼠成瘤能力的改变

目的 观察导入ｂａｘα基因并稳定表达的人低分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－２Ｂ）生物学行为变化。方法 琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ片段化；γ－射线照射。结果 ＣＮＥ－２Ｂ在进行正常及受γ－射线照射后传代培养时，其细胞总数的增加速度比导入载体的对照组ＣＮＥ－２Ｐ细胞株明显减慢；自发性细胞凋亡数明显增加。ＣＮＥ－２Ｂ细胞中到１０只裸鼠双侧北部皮下均未风形成移植瘤（０／２０），而对照的１０只裸鼠的成瘤率为１００％     

脑转移瘤的CT诊断与手术选择

<正> 我院自1987年10月～1999年6月经CT诊断、手术治疗和病理症实的脑转移瘤50例。现就其CT影像学特点及手术选择进行分析讨论。 1 临床资料 1.1 一般资料:50例中男27例,女性23例;发现原发病灶者46例,年龄43岁～65岁,平均56岁。 1.2 肿瘤部位:额叶者25例,占50％;顶叶者15例,占30％;颞