黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇含量的影响

目的:观察黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)表达及胆固醇含量的影响,探讨黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法:SD大鼠给予大、中、小剂量黄连解毒汤灌胃后制备含药血清。用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264. 7巨噬细胞分化为泡沫细胞,将细胞分为空白组、模型组、黄连解毒汤含药血清大剂量组、中剂量组、小剂量组,每组1. 5×10~6个细胞,分别加入无血清培养液和不同浓度含药血清干预24h,总胆固醇及游离胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量,实时荧光定量PCR检测细胞ABCA1 mRNA的表达。结果:与模型组比较,黄连解毒汤含药血清各剂量组泡沫细胞内总胆固醇(TC)含量明显降低(P 0. 05或P 0. 01),大剂量组游离胆固醇(FC)含量显著下降(P 0. 01);含药血清各剂量组ABCA1 mRNA表达均明显升高(P 0. 05)。结论:黄连解毒汤上调泡沫细胞ABCA1的转录与表达,促进胆固醇流出,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

NF-κB活化对THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出与炎症因子表达的影响及右归丸的干预机制研究

目的:通过脂多糖(LPS)干预单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞制备高胆固醇模型,探讨右归丸含药血清对THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出与炎症因子表达的影响。方法:利用LPS培养THP-1源性泡沫细胞诱导24h制备高胆固醇细胞模型,给予右归丸含药血清小、中、大剂量干预。通过比色法检测干预后的THP-1源性泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;酶联免疫吸附法测定细胞内的细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;逆转录-聚合酶链反应法检测细胞NF-κB p65、SREBP1c、ABCA1mRNA的含量和蛋白表达。结果:10 ng/ml LPS培养THP-1源性泡沫细胞成功复制了高胆固醇细胞模型。右归丸大、中、小剂量组THP-1源性泡沫细胞内TC、FC、CE、IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、SREBP1c、ABCA1mRNA含量以及NF-κBp65、SREBP1c、ABCA1mRNA蛋白表达水平与正常组比较,差异均有统计学意义(P 0.05或P 0.01)。结论:右归丸可能是通过抑制NF-κB p65和SREBP1c基因表达而调节血脂,同时通过抑制炎症因子的释放来预防动脉粥样硬化,为临床预防和治疗动脉粥样硬化提供了新的靶点。     

基于miR-33a调控ABCA1表达探讨血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:通过观察血管软化丸是否通过调控miR-33a,进而影响下游信号ABCA1的表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出,研究血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:通过病理学检测观察血管软化丸对动脉粥样硬化的影响,通过体外实验建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,然后用血管软化丸含药血清处理,Real-Time PCR技术检测细胞miR-33a表达。细胞随机分为空白对照组、血管软化丸含药血清处理组、血管软化丸含药血清+miR-33a mimic处理组,RT-PCR和Western blotting法检测细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,油红O染色和高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,[3H]法检测细胞内胆固醇流出。结果:体内实验显示,各中药组血管各层结构正常,排列整齐,局部有小灶性的钙化颗粒物沉积,病变轻,斑块小,泡沫细胞和脂质减少,弹力板基本完整,病变程度明显低于空白对照组。与空白对照组相比,血管软化丸高、中、低三个剂量组小鼠主动脉的miR-33a表达量降低、ABCA1基因和蛋白相对表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05)。体外实验显示,在不影响细胞活性状况下,血管软化丸含药血清呈浓度和时间依赖性下调miRNA33a表达;血管软化丸含药血清能明显上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,但能被转染miRNA33mimic抑制;血管软化丸含药血清可减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂质蓄积,但能被细胞中转染miRNA33 mimic所弱化;EGCG减少细胞内胆固醇蓄积是与其促进细胞内胆固醇流出有关,细胞中转入过量miRNA33a可以抑制胆固醇流出。结论:血管软化丸可通过减少miRNA33a的生成,进而上调ABCA1表达,促进巨噬细胞中胆固醇流出,这可能是血管软化丸抗动脉粥样硬化作用的分子机制之一。     

通脉降浊煎剂含药血清对泡沫细胞胆固醇流出率的影响

目的研究通脉降浊煎剂含药血清(TDMS)对泡沫细胞胆固醇流出率的影响及可能机制。方法采用50mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞48h,建立巨噬细胞源泡沫细胞模型,添加TDMS,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞),ox-LDL组(50mg/L ox-LDL),β-环糊精(β-CD)组(50mg/L ox-LDL+10mmol/Lβ-CD),正常血清(CS)组(50mg/L ox-LDL+等体积正常血清),TDMS组(50mg/L oxLDL+5%TDMS)。检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和细胞胆固醇流出率;采用Western blot方法检测细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达;Real-time PCR方法检测细胞内ABCA1、miR-33a、miR-33bmRNA表达。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和胆固醇流出率均增加(P0.05,P0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平降低(P0.01),miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均升高(P0.01)。与ox-LDL组比较,β-CD组与TDMS组细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均下降,胆固醇流出率增大(P0.05,P0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平升高(P0.01),细胞内miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均降低(P0.01)。结论 TDMS通过调节miR-33a/b和ABCA1表达,从而提高胆固醇流出率,降低泡沫细胞内胆固醇含量。     

黄连解毒汤含药血清对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症因子影响研究

目的:观察黄连解毒汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞炎症因子表达的影响。方法:以大、中、小剂量黄连解毒汤水煎剂灌胃SD大鼠制备含药血清,采用MTT法观察含药血清对细胞增殖的影响,选择各剂量浓度为20%的含药血清体外干预LPS刺激的巨噬细胞;采用Griess法检测NO释放量,采用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α及IL-6含量。结果:采用LPS刺激细胞后,引起NO、TNF-α及IL-6因子的高表达,与正常对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);采用黄连解毒汤含药血清干预后,可明显抑制NO、TNF-α及IL-6因子的高表达,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:黄连解毒汤含药血清可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,可能是该方防治动脉粥样硬化的重要机制。     

黄连解毒汤含药血清对牛主动内皮细胞miR-133a/Caveolin-1/eNOS通路影响的研究

目的研究黄连解毒汤含药血清对牛主动脉内皮细胞(BAECs)miR-133a/Caveolin-1/eNOS通路的影响。方法选用WKY大鼠制备含药血清,将BAECs分为正常组、空白血清组、卡托普利组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,检测各组细胞NO、ET-1及eNOS含量变化,RT-PCR检测各组细胞miR133a、Caveolin-1、eNOS mRNA表达,Western-Blot检测各组细胞Caveolin-1、eNOS、p-eNOS蛋白表达。结果与正常组比较,空白血清组NO与eNOS含量明显降低(P0.01),ET-1水平明显高于各干预组(P0.05),各干预组细胞中NO、eNOS的含量明显升高(P0.05,P0.01),血清中ET-1的含量明显降低(P0.05)。与正常组比较,空白血清组细胞中miR-133a、eNOS mRNA表达明显降低(P0.01),Caveolin-1 mRNA表达明显升高(P0.01),黄连解毒汤中、高剂量组、卡托普利组miR-133a、eNOS mRNA表达明显升高(P0.01),Caveolin-1 mRNA表达明显降低(P0.01)。与正常组比较,空白血清组中Caveolin-1蛋白表达明显升高(P0.01),空白血清组eNOS、p-eNOS蛋白表达明显降低(P0.01)。卡托普利组、黄连解毒汤中、高剂量组Caveolin-1蛋白表达水显明显降低(P0.05、P0.01),卡托普利组、黄连解毒汤高剂量组eNOS、p-eNOS表达明显升高(P0.01)。结论黄连解毒汤含药血清可能通过升高BAECs细胞miR-133a、eNOS mRNA表达水平、升高eNOS、p-eNOS蛋白的表达水平、降低Caveolin-1 mRNA及蛋白表达水平发挥保护血管内皮功能的作用。     

基于PPARγ/LXRα/ABCG1通路探讨黄连解毒汤对泡沫细胞脂质蓄积的干预作用

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ/肝脏X受体α/ATP结合盒转运体G1 (PPARγ/LXRα/ABCG1)信号通路观察黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞源性泡沫化脂质蓄积的影响，探讨清热解毒法干预动脉粥样硬化的部分作用机制。方法 采用80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7建立泡沫细胞模型。制备黄连解毒汤高(6.3g/kg)、低剂量组(3.15g/kg)含药血清以及正常对照组血清进行干预。收集细胞上清液，通过油红O染色观察巨噬细胞内脂滴形成及泡沫化程度；CCK-8法观察黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞活力的影响；生化仪检测细胞内总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)水平；酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清脂蛋白脂酶(LPL)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量；流式细胞仪测定细胞凋亡水平；蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定细胞PPARγ、LXRα、ABCG1蛋白的表达；实时荧光定量聚合酶链式反...     

护心方对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及ABCA1表达的影响

目的观察护心方对THP-1细胞源性泡沫细胞Apo AI介导的胆固醇流出及ABCA1表达的影响。方法 THP-1细胞诱导分化成巨噬细胞后,在ox-LDL刺激48 h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞,以护心方含药血清作用24 h。采用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,Western blot检测细胞ABCA1的蛋白表达水平,q PCR检测细胞ABCA1的mRNA表达水平。结果护心方含药血清可增加泡沫细胞胆固醇的流出且呈时间依赖性(P0.05),同时能上调诱导后的泡沫细胞ABCA1蛋白水平(P0.05),但对ABCA1 mRNA的表达水平无影响。结论护心方可通过提高泡沫细胞ABCA1蛋白表达水平,增加细胞内Apo AI介导的胆固醇流出,是其临床治疗动脉粥样硬化的机制之一。     

黄连解毒汤对糖尿病大鼠肝脏核因子-κB、肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:研究黄连解毒汤对糖尿病大鼠肝脏核转录因子-κB(NF-κB),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨黄连解毒汤治疗糖尿病的机制。方法:实验采用高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)复制大鼠糖尿病模型,连续给黄连解毒汤(11.5,5.7,2.85 g.kg-1)8周后测定空腹血糖(FGB)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)含量,同时计算肝脏和胰腺质量指数;采用免疫组织化学的方法检测大鼠肝脏中NF-κB,TNF-α含量。结果:黄连解毒汤高剂量组能显著降低大鼠血清中CHO,TG,LDLC含量,各剂量组均升高HDLC含量,明显降低胰腺的质量指数;大鼠肝脏NF-κB,TNF-α的表达明显低于模型组。结论:黄连解毒汤对高脂饮食加小剂量STZ所致糖尿病大鼠有一定的治疗作用,其机制可能是通过调节NF-κB,TNF-α蛋白的表达,从而抑制了炎症信号的通路。     

黄连解毒汤调控单核、巨噬细胞及泡沫细胞分化的实验研究

目的观察黄连解毒汤体内调控载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠外周血单核细胞亚型分化,黄连解毒汤含药血清体外调控巨噬细胞和泡沫细胞亚型分化的作用。方法将15只ApoE^-/-小鼠随机分为ApoE^-/-普食组、ApoE^-/-高脂组及ApoE^-/-高脂加中药治疗组,每组5只,分别给予普食及高脂饮食4周。5只C57BL/6野生型小鼠作为野生普食对照组,ApoE^-/-高脂加中药组给予黄连解毒汤5 g/（kg·d）灌胃,其他组给予等量纯净水灌胃。4周后流式细胞仪检测外周血单核细胞亚型。另选30只SD大鼠给予黄连解毒汤5 g/（kg·d）灌胃,每12 h 1次,共5次,制备黄连解毒汤含药血清。采用5%黄连解毒汤含药血清对体外原代骨髓衍生的巨噬细胞（bone marroW-derived macrophage,BMDM）和泡沫细胞分化进行干预,流式细胞仪检测巨噬细胞和泡沫细胞表面受体CD206表达（CD206^＋M2型）比例;实时定量PCR检测巨噬细胞和泡沫细胞M1型因子Nos2和M2型因子Arg1的表达。结果 ApoE^-/-小鼠高脂饮食喂养4周后,外周血炎症型单核细胞（Ly6C^high）比例增高;黄连解毒汤干预可显著降低炎症型单核细胞比例（P〈0.05）。与对照血清比较,5%黄连解毒汤含药血清可显著增加CD206＋M2型BMDM的比例（P=0.034）。实时定量PCR结果 显示,含药血清可上调巨噬细胞M2亚型基因Arg1的表达水平（P〈0.05）,抑制巨噬细胞M1亚型基因Nos2的表达水平（P=0.017）。在ox-LDL促进M2型泡沫细胞分化的基础上,黄连解毒汤含药血清可进一步提高CD206＋M2型泡沫细胞比例及Arg1的表达（P〈0.01）。黄连解毒汤含药血清抑制Th1因子作用下的M2型泡沫细胞向M1型逆转,显著提高Arg1表达水平,降低Nos2表达水平（P〈0.01）。结论黄连解毒汤能降低高脂导致的ApoE^-/-小鼠外周血炎症性单核细胞亚群比例;黄连解毒汤含药血清体外促进M2型巨噬、泡沫细胞分化。黄连解毒汤可能通过调节?     

黄连解毒汤对糖尿病大鼠血清chemerin水平的影响

目的研究黄连解毒汤干预糖尿病大鼠血清chemerin水平的变化情况,初步探讨黄连解毒汤改善胰岛素抵抗的作用机制。方法实验采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素（STZ）复制大鼠糖尿病模型,连续给黄连解毒汤6周后测定空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量,同时以测定脂肪因子chemerin水平的变化。结果给予黄连解毒汤组治疗的糖尿病大鼠,其血清中FBg、TC、Tg、LDL-C水平显著低于模型组（P〈0.01）,HDL-C水平高于模型组（P〈0.01）,血清chemerin水平显著低于模型组（P〈0.01）。结论黄连解毒汤对高脂高糖饮食联合小剂量STZ所致糖尿病大鼠有一定的治疗作用,能改善胰岛素抵抗,其机制可能是通过调节脂肪因子chemerin的表达,从而降低了炎症信号通路,改善了脂肪组织的慢性炎症反应,继而改善胰岛素抵抗。     

化瘀祛痰方药对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、CD36表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、CD36表达的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:体外培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)使巨噬细胞泡沫化。细胞随机分为空白对照组、模型组、补气组、化瘀组、祛痰组和全方组。油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析ABCA1、CD36 mRNA水平。结果:模型组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,全方组和祛痰组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低。RT-PCR结果提示模型组细胞ABCA1、CD36 mRNA水平显著升高;而化瘀祛痰方药及祛痰拆方含药血清可显著升高ABCA1 mRNA,显著降低CD36 mRNA水平。结论:化瘀祛痰方药及祛痰方可抑制ox-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化,该作用可能与其上调ABCA1基因、下调CD36基因表达,从而减弱THP-1细胞对ox-LDL摄取有关。     

清热解毒法对新西兰兔动脉粥样硬化模型主动脉斑块稳定性的研究

目的通过构建新西兰兔动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型,研究清热解毒中药对AS斑块稳定性的影响。方法新西兰雄兔随机分为正常组、模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,氯喹组及立普妥组。干预后应用血管内超声(IVUS)测定外弹性膜面积(EEMA)、管腔面积(LA)、斑块面积(PA)和斑块负荷(PB);计算斑块的不稳定性指数(Ⅵ)。结果IVUS检测EEMA各组间无统计学差异(P>0.05);LA方面,黄连解毒汤高剂量组及立普妥组较模型组、黄连解毒汤中、低剂量组及氯喹组增加(P<0.05),而氯喹组较黄连解毒汤中、低剂量组有所下降(P<0.05);PA方面,黄连解毒汤低、中、高剂量及立普妥组较模型组有所下降(P<0.05);黄连解毒汤高剂量组和立普妥组较黄连解毒汤低、中剂量组下降(P<0.05),氯喹组与黄连解毒汤低、中剂量组相比有所增加(P<0.05);PB方面,黄连解毒汤低、中、高剂量组和立普妥组低于模型组(P<0.05);黄连解毒汤高剂量组和立普妥组与黄连解毒汤低、中剂量组相比下降(P<0.05),氯喹组与黄连解毒汤低、中剂量组相比有所增加(P<0.05);在LA、PA、PB方面,黄连解毒汤高剂量组与立普妥组相比无差异(P>0.05)。结论黄连解毒汤可以减小PA及PB,增加LA及降低Ⅵ,具有稳定斑块的作用,且呈剂量依赖性,剂量越高稳斑效果越好,其效果与立普妥相当。     

黄连解毒汤对糖尿病大鼠脂肪因子visfatin表达的影响

目的 :研究黄连解毒汤对糖尿病大鼠肝脏visfatin表达的影响,探讨黄连解毒汤改善胰岛素抵抗的作用机制。方法 :实验采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,分为空白组、模型组、对照组、治疗组,连续给药6周后测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量及肝脏visfatin表达的变化。结果:治疗组血清FBG、FINS、TC、TG、LDL-C水平显著低于模型组(P0.01),HDL-C水平高于模型组(P0.01);治疗组肝脏表达visfatin显著低于模型组(P0.01)。结论:黄连解毒汤能显著降低糖尿病大鼠血脂血糖,改善胰岛素抵抗,其机制可能是调节脂肪因子visfatin的表达,降低炎症信号通路,改善脂肪组织的慢性炎症反应。     

芎芍胶囊含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察芎芍胶囊大鼠含药血清中脂质对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞24 h,建立RAW264.7源性泡沫细胞模型,添加大鼠含药血清,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞)、模型组(80 mg/L ox-LDL)、正常血清组(10%正常大鼠血清)及正常血清对照组(80 mg/L ox-LDL+10%正常大鼠血清)、辛伐他汀组(80 mg/L ox-LDL+10%辛伐他汀血清)、芎芍胶囊血清组(80 mg/L ox-LDL+10%芎芍胶囊血清)。通过油红O染色观察细胞内胆固醇分布;以胆固醇检测试剂盒检测正常血清组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组血清总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)含量,检测各组细胞内TC及FC含量。结果模型组细胞形态及染色结果符合泡沫细胞标准;正常血清组、正常血清对照组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组细胞内均含有大量脂滴,且各组细胞内脂质着色无明显差异。与正常血清组比较,辛伐他汀血清、芎芍胶囊血清组TC差异均无统计学意义(P>0.05),辛伐他汀血清组FC含量升高(P<0.01),芎芍胶囊血清组FC含量降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组、正常血清组、正常血清对照组、辛伐他汀血清组细胞内TC、FC含量均增加(P<0.01),芎芍胶囊血清组细胞内TC含量无明显增加(P=0.09),FC含量明显增加(P<0.05)。与模型组比较,芎芍胶囊血清组细胞内TC含量有所降低(P=0.034),FC含量浓度差异无统计学意义(P=0.478);与正常血清对照组比较,芎芍胶囊血清组TC含量降低(P=0.026),FC含量差异无统计学意义(P=0.354)。结论大鼠源性血清本身含有大量脂质,可造成RAW264.7细胞出现胆固醇蓄积,甚至泡沫化,掩盖了芎芍胶囊可能促进泡沫细胞胆固醇流出的作用,不适用于探索RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇流出的药物研究。     

黄连解毒汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌IRS-1表达及酪氨酸磷酸化水平的影响

目的:观察黄连解毒汤对大鼠骨骼肌胰岛素受体底物1(IRS-1)表达及其磷酸化水平的影响,探讨其改善胰岛素抵抗的分子机制.方法:采用小剂量链脲佐菌素尾静脉注射加高糖高脂饲料喂养方法建立Wistar大鼠胰岛素抵抗模型,以黄连解毒汤干预治疗10周,检测血糖和血清胰岛素,用免疫沉淀和Western印迹方法检测黄连解毒汤治疗后胰岛素抵抗大鼠骨骼肌组织内IRS-1蛋白表达水平和酪氨酸磷酸化水平的改变.结果:黄连解毒汤治疗后,胰岛素抵抗大鼠肌肉组织内IRS-1表达较模型组增加,IRS-1酪氨酸磷酸化水平较模型组显著增加.结论:黄连解毒汤提高胰岛素抵抗大鼠骨骼肌组织IRS-1蛋白表达和酪氨酸磷酸化水平,这可能是其降血糖并改善组织胰岛素敏感性的机制之一.     

基于GC-TOF-MS代谢组学研究黄连解毒汤对大鼠粪便代谢的影响＊

目的 通过GC-TOF-MS代谢组学探讨不同剂量的黄连解毒汤对SD大鼠粪便代谢组的影响，进而为黄连解毒汤的作用机制提供参考。方法 SD大鼠45只适应性喂养7天后，随机分为5组：黄连解毒汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、抗生素组和空白组，每组9只。中药干预组不同剂量黄连解毒汤灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；抗生素组，1 mL/次，2次/天；空白组生理盐水灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；末次给药后，禁食禁水12 h，处死并收集大鼠粪便。采用气相色谱-飞行时间质谱（Gas Chromatography Tandem Time-of Flight Mass Spectrometry，GC-TOF-MS）检测各组大鼠粪便，运用多元分析OPLS以及单变量统计学方法筛选差异代谢物，通过MetaboAnalyst平台进行代谢通路分析。结果 对于粪便中的内源性代谢物小分子，高剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：核糖、硫酸、棕榈酸、花生酸、茜素等；中剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：乌头酸、胆固醇、乳酸、棕榈油酸、茜素等；低剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：硫酸、棉子糖；氨苄西林钠影响的主要有：蛋氨酸1、麦角固醇、正亮氨酸1、棕榈酸、硫酸、乳酸等；不同剂量的黄连解毒汤和氨苄西林钠都能够影响到半乳糖代谢及硫代谢通路。结论 黄连解毒汤可改善糖尿病和心脑血管疾病相关的代谢物小分子，不同剂量的黄连解毒汤对粪便代谢的影响不同，其中中剂量的影响最为广泛。     

黄连解毒汤对高脂血症大鼠血脂及氧自由基代谢的影响

目的:探讨黄连解毒汤(Huanglian Jiedu Decoction,HJD)对实验性高脂血症大鼠血脂及氧自由基代谢的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,立普妥组(0.2 mg·kg-1),HJD低、高剂量组(6,12 g·kg-1)。除正常对照组外,其他组大鼠喂饲高脂饲料建立高脂血症模型。连续ig 8周后,测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TAG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high-densitylipoprotein cholesterol,HDL-C)水平,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,并观察肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,HJD各组能明显降低实验大鼠血清TC,TG,LDL-C,MDA含量,显著提高HDL-C含量和SOD,GSH-Px活性,并能减轻肝细胞脂肪变性。结论:HJD能有效调节高脂血症大鼠血脂代谢,提高机体抗氧化能力,改善肝组织病理损害。     

黄连温胆汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质蓄积的影响

目的观察黄连温胆汤对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝脏脂质蓄积的影响,从自噬角度探讨其作用机制。方法50只雄性SD大鼠随机分为空白组10只和造模组40只,造模组采用高脂高糖饮食诱导IR大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、黄连温胆汤组和二甲双胍组,分别予蒸馏水、黄连温胆汤药液和二甲双胍溶液灌胃,连续8周。透射电镜观察大鼠肝组织自噬小体形成情况;油红O染色观察肝脏脂质蓄积;ELISA检测大鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);GPO-PAP法检测大鼠肝组织三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量;Western blot检测肝组织LC3、p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR蛋白表达;RT-PCR检测肝组织mTOR mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠肝组织红色脂滴明显增多,并有少量自噬小体形成,FPG、FINS和HOMA-IR明显升高(P<0.01),肝组织TC、TG含量明显增加(P<0.05,P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62蛋白表达降低,p-mTOR/mTOR比值降低(P<0.01);与模型组比较,黄连温胆汤组和二甲双胍组大鼠肝组织红色脂滴数量减少,未见明显自噬小体,FPG、FINS和HOMA-IR明显降低(P<0.05,P<0.01),肝组织TC、TG含量减少(P<0.05,P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低,p62蛋白表达升高,p-mTOR/mTOR比值升高(P<0.05,P<0.01)。各组大鼠肝组织mTOR mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄连温胆汤可改善IR大鼠肝脏脂质蓄积,其机制与上调大鼠肝组织p-mTOR蛋白表达,抑制肝脏自噬有关。     

化浊解毒含药血清对大鼠肝星状细胞增殖及细胞因子的影响

目的:观察化浊解毒含药血清对体外培养活化的大鼠肝星状细胞增殖及活性的影响,探讨化浊解毒方治疗肝纤维化的作用机制.方法:不同剂量(分别含有生药30,60,120 g·L-1)的化浊解毒方,按0.01 mL·g-1体重SD大鼠灌胃给药,以制备含药血清;常规培养活化的肝星状细胞( HSC-T6),用不同浓度的含药血清进行干预,用MTT,ELISA,RT-PCR法分别检测肝星状细胞增殖、细胞上清液中Ⅰ型胶原的含量以及细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因的表达.结果:与正常血清组比较,化浊解毒方含药血清各浓度组均呈现出抑制HSC增殖的作用(P＜0.05),且呈剂量和时间依赖性.与正常血清组比较,化浊解毒方含药血清各个浓度组在作用48 h后,细胞上清液中的Ⅰ型胶原的含量均降低(P＜0.05),均能下调细胞中TGF-β1 mRNA的表达(P＜0.05).结论:化浊解毒方之所以能有效的治疗肝纤维化可能与化浊解毒方抑制肝星状细胞的增殖和活性有关.