基于GC-TOF-MS代谢组学研究黄连解毒汤对大鼠粪便代谢的影响＊

目的 通过GC-TOF-MS代谢组学探讨不同剂量的黄连解毒汤对SD大鼠粪便代谢组的影响，进而为黄连解毒汤的作用机制提供参考。方法 SD大鼠45只适应性喂养7天后，随机分为5组：黄连解毒汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、抗生素组和空白组，每组9只。中药干预组不同剂量黄连解毒汤灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；抗生素组，1 mL/次，2次/天；空白组生理盐水灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；末次给药后，禁食禁水12 h，处死并收集大鼠粪便。采用气相色谱-飞行时间质谱（Gas Chromatography Tandem Time-of Flight Mass Spectrometry，GC-TOF-MS）检测各组大鼠粪便，运用多元分析OPLS以及单变量统计学方法筛选差异代谢物，通过MetaboAnalyst平台进行代谢通路分析。结果 对于粪便中的内源性代谢物小分子，高剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：核糖、硫酸、棕榈酸、花生酸、茜素等；中剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：乌头酸、胆固醇、乳酸、棕榈油酸、茜素等；低剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：硫酸、棉子糖；氨苄西林钠影响的主要有：蛋氨酸1、麦角固醇、正亮氨酸1、棕榈酸、硫酸、乳酸等；不同剂量的黄连解毒汤和氨苄西林钠都能够影响到半乳糖代谢及硫代谢通路。结论 黄连解毒汤可改善糖尿病和心脑血管疾病相关的代谢物小分子，不同剂量的黄连解毒汤对粪便代谢的影响不同，其中中剂量的影响最为广泛。     

基于16S rRNA测序研究葛根芩连汤对菌群失调性腹泻大鼠肠道菌群结构的影响

目的 采用16S rRNA技术研究葛根芩连汤对菌群失调性腹泻大鼠肠道菌群结构的影响。方法 将60只健康SD大鼠随机分为6组，分别为正常组、模型组、葛根芩连汤高、中、低剂量组，丽珠肠乐组，每组10只。除正常组外，每日按头孢拉定178.6 mg·kg^-1，硫酸庆大霉素31.25 mg·kg^-1混合抗生素进行灌胃造模，造模成功后，葛根芩连汤高、中、低剂量组灌胃葛根芩连汤（7.02，3.51，1.755 g·kg^-1），丽珠肠乐组按0.125 g·kg^-1灌胃，正常组与模型组给予无菌蒸馏水灌胃，体积分数均为10 mL·kg^-1，连续给药7 d，将大鼠麻醉后取大鼠结肠内容物，提取粪便DNA后进行16S rRNA高通量测序并分析其结果。结果 葛根芩连汤明显调节菌群失调性腹泻模型大鼠的物种数量及Alpha与Beta多样性，提高菌群生物丰富度指数与多样性指数，正向调节菌群失调性腹泻模型大鼠的3种差异菌门（厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门）与14种差异菌属（拟杆菌属、狄氏副拟杆菌属、布劳特氏菌属等）。结论 葛根芩连汤对菌群失调性腹泻模型大鼠肠道菌群有调节作用，揭示了肠道菌群与菌群失调性腹泻之间的生理病理机制。     

葛根芩连汤对菌群失调性腹泻大鼠模型结肠组织PINK1/Parkin表达的影响

目的 通过观察葛根芩连汤(GQT)对菌群失调性腹泻大鼠模型动物结肠组织PINK1/Parkin表达水平的影响，探讨GQT治疗腹泻的作用机制。方法 180只SPF级SD大鼠(雌雄各半)随机分为空白组(30只)和造模组(150只),造模组采用复合抗生素灌胃法建立菌群失调性腹泻大鼠模型。模型成功后将造模组随机分为5组，即模型组、丽珠肠乐组、GQT高、中、低剂量组，30只/组。GQT高、中、低剂量组分别按7.02,3.51,1.755 g·kg^-1,丽珠肠乐按0.125 g·kg^-1灌胃，1次/d,连续21 d,模型组和空白组给予蒸馏水灌服，各组灌胃体积均为10 mL/kg。分别在治疗后7、14、21 d进行样本采集。应用荧光定量PCR技术(RT-PCR)及免疫组化法(IHC)分析结肠组织PINK1/Parkin相对表达水平；应用免疫印迹法(WB)法检测P62、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白表达。结果 综合模型大鼠粪便、临床症状及电镜观察结果表明本次造模验证成功。RT-PCR分析PINK1和Parkin mRNA表达结果表明，模型组大鼠基因表达较空白组显著升...     

四君子汤对 IEC-6 细胞增殖相关指标及大鼠胃肠黏膜 c-Myc 表达的影响

目的观察四君子汤对IEC-6 细胞（大鼠小肠上皮细胞）增殖,多胺调控生长相关基因细胞周期检测点 激酶2（Checkpoint kinase 2,Chk2）、c-Myc 表达,以及对大鼠胃肠黏膜c-Myc 蛋白表达的影响。方法采用 SD 大鼠制备空白血清及四君子汤含药血清;无负荷细胞实验设空白对照组、腐胺组（10 μmol·L-1）及四君子汤 含药血清低、中、高（5%、10%、20%）剂量组;α-二氟甲基鸟氨酸（α-difluoromethylornithine,DFMO）负荷细 胞实验设空白对照组、DFMO 组（2.5 mmol·L-1）、腐胺组（10 μmol·L-1）及四君子汤含药血清低、中、高（5%、 10%、20%）剂量组;动物实验将SD 大鼠随机分为空白对照组、模型组（吲哚美辛组）及四君子汤低、高（5、 15 g·kg-1）剂量组。采用MTT 法检测IEC-6 细胞增殖情况;qPCR 法检测细胞Chk2、c-Myc mRNA 表达; Western Blot 法检测细胞Chk2、p-Chk2、c-Myc 蛋白表达和大鼠胃肠黏膜的c-Myc 蛋白表达。结果①细胞实 验：与空白对照组比较,10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药24 h 后IEC-6 细胞的增殖（P＜0.01）,提高 p-Chk2 蛋白及c-Myc mRNA/蛋白表达水平（P＜0.05,P＜0.01）;5%、10%、20% 四君子汤含药血清可促进给 药48、72 h 后细胞增殖（P＜0.01）,促进Chk2 mRNA/蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）。与DFMO 组比较,5%、 10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药48 h 后细胞增殖（P＜0.01）,提高c-Myc mRNA/蛋白表达（P＜0.05, P＜0.01）;10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药72 h 后细胞增殖（P＜0.01）,促进Chk2 及p-Chk2 蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）;20%四君子汤含药血清可促进Chk2 mRNA 表达（P＜0.05）。②动物实验：与模型组比 较,四君子汤5、15 g·kg-1 可上调模型大鼠胃黏膜及小肠黏膜c-Myc 蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）。结论 四君子汤可促进IEC-6 细胞增殖,其作用机制可能与影响多胺信号通路,上调生长相关基因Chk2、c-Myc 表达有关。四君子汤可提高胃肠黏膜损伤模型大鼠胃及小肠黏膜c-Myc 蛋白表达水平。     

体内p21基因敲除表现出严重放射性心脏损伤

目的 研究p21基因在放射性心脏损伤(RIHD)中的作用,探讨p21基因敲除对小鼠RIHD表型的影响。方法 p21^-/-小鼠作为实验组,p21^+/-小鼠为对照组。采用小动物照射研究平台对小鼠进行10Gy全心照射,建立RIHD模型。收集照射后6周小鼠心脏标本,测量大体标本并行HE染色;Vevo2100超声成像系统检测小鼠室壁厚度及左室射血分数;缺氧探针法检测心脏组织缺氧;Tunel法检测心脏细胞凋亡。结果 相较于p21^+/-小鼠,p21^-/-小鼠生存期显著缩短(P=0.004);舒张期、收缩期室间隔变薄(P=0.049、P=0.006),左室后壁增厚(P<0.001),左室射血分数下降(P=0.004);心脏组织肉眼观增大,HE染色示心脏组织炎症细胞聚集,心肌细胞排列紊乱;心脏组织缺氧和凋亡明显。结论 p21^-/-小鼠受照后引起生存期缩短、心功能减弱、心脏结构异常、心脏组织缺氧和凋亡,表现出更严重RIHD。p21在心脏照射后的修复中起重要作用。     

陕西省盲校盲童致盲原因调查分析

目的:了解陕西省儿童盲和严重视力损害的原因,以确定潜在的可预防性和可治疗性因素。方法:参照世界卫生组织儿童视力障碍检查法,2004-06对陕西省某盲校33名盲童的盲及低视力情况进行调查,分析其致盲原因。结果:33名盲童中2名为严重视力损害(6.06%),31名为盲(93.94%)。最常见致盲解剖部位依次为视网膜(36.37%)、青光眼(24.24%)、晶状体(15.15%)、视神经(9.09%)、角膜(9.09%)和全眼球(6.06%)。先天和遗传因素为盲校学生致盲致残的主要原因,占90.91%;后天性占9.09%。视网膜色素变性、先天性青光眼和先天性白内障等为主要原因,占先天因素的70%。可避免性盲16例(48.48%),其中可预防者3例(9.09%),可治疗性者13例(39.39%)。结论:营养性和感染性致盲已较少见,先天和遗传性因素是目前陕西省儿童盲的主要原因。