腺病毒介导CTLA4Ig对舍格伦综合征小鼠涎腺分泌功能的影响

目的检测CTLA4Ig-重组腺病毒载体(Ad-CTLA4Ig)在小鼠舍格伦综合征中的治疗作用.方法采用完全弗氏佐剂 同种鼠颌下腺抗原激发诱导小鼠舍格伦综合征.实验组在激发后2 h予以Ad-CTLA4Ig腹腔注射,对照组激发后注射胸腺肽.比较各组动物颌下腺形态学改变,每周饮水量、静态唾液总流率的变化.结果CTLA4Ig-重组腺病毒实验组颌下腺病理学改变不明显,并且静态唾液总流率高于对照组(P＜0.05),而每周饮水量明显低于对照组(P＜0.05).结论Ad-CTLA4Ig可防治小鼠舍格伦综合征的发生,并对临床治疗舍格伦综合征提供了实验基础.     

CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植的体外实验研究

目的 探索重组腺病毒载体（Recombinant adenovirus,rAdv）介导CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植免疫耐受的分子机制。方法 构建CTLA4Ig重组腺病毒载体,转染猪树突状细胞（Dendritic Cell,DC）,以猪表皮细胞匀浆液为刺激原,观察DC递呈猪表皮抗原刺激人T细胞增殖、活化及信号转导的影响;同时,以CTLA4Ig转染小鼠DC细胞,观察该DC膜表面分子CD40、CD80表达。结果 CTLA4Ig转染DC能显著抑制人外周血T淋巴细胞增殖能力（P＜0.01）和T细胞肌醇磷脂信号系统转导活性,IL－2分泌亦受到明显抑制（P＜0.05）;转染CTLA4Ig的小鼠DC膜表面分子CD80表达降低（P＜0.05）。结论 腺病毒介导CTLA4Ig基因转染转皮能诱导人外周血T淋巴细胞免疫耐受。     

消风宣窍汤对小鼠变应性鼻炎模型效应机制研究

目的?探讨消风宣窍汤对变应性鼻炎（AR）小鼠治疗效应及其相关机制。方法?48只BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,消风宣窍汤组,孟鲁斯特组,每组12只。采用OVA致敏建立小鼠AR模型。灌胃治疗1周,观测小鼠鼻部症状积分,体质量、胸腺和脾脏质量及指数,鼻黏膜组织学改变,血清总IgE、OVA特异性IgE以及胸腺IL-4、IL-17、IL-33、IFN-γ水平。结果?消风宣窍汤能够显著降低AR小鼠鼻部症状,减轻变应性反应引起的体质量、胸腺质量、胸腺指数的增加,能够显著减少血清总IgE、OVA特异性IgE的水平,抑制胸腺IL-4、IL-17、IL-33、IFN-γ产生,且在降低胸腺IL-33水平方面,消风宣窍汤效果优于西药孟鲁斯特组。结论?消风宣窍汤对AR小鼠疗效确切,其可能通过抑制胸腺细胞因子水平发挥抗AR效应。      

重组腺病毒介导的CTLA4Ig基因在哺乳动物体内表达的研究

目的 了解CTLA4Ig腺病毒在不同哺乳动物体内的转染能力及表达情况。方法 用所构建的CTLA4Ig腺病毒通过静脉或腹腔注射到Balb/c小鼠，Wistar大鼠，兔，小香猪，羊体内，应用蛋白质斑点印记检测CTLA4Ig在以上动物血清中的表达情况，同时还观察各动物脏器的病理改变及动物的生存情况。结果 重组腺病毒转染7d后大鼠，小鼠血清出现CTLA4Ig持续表达2周。各动物未见异常死亡，各脏器未见明显病理改变。结论 CTLA4Ig重组腺病毒能够有效转染Balb/c小鼠，Wistar大鼠。     

实验性变应性鼻炎鼠类模型的建立

目的：建立稳定的实验性变应性鼻炎（AR）鼠类模型。方法：将NIH小鼠和SD大鼠雌雄各60只，随机分为实验组（n=60）和对照组（n=60）。实验组经腹腔隔日1次注射卵清蛋白（OVA）变应原7次后，鼻腔滴入OVA鼻内激发；对照组以生理盐水替代OVA。结果：实验组均出现鼻痒、喷嚏、流清涕等变应性鼻炎的临床特征（评分〉5分），鼻粘膜和肺组织见大量的嗜酸性粒细胞浸润，粘膜水肿、腺体增生且鼻粘膜表面纤毛破坏等组织形态学变化。对照组均无上述变化。结论：本实验成功建立OVA变应原致敏的变应性鼻炎鼠类模型，具有操作简单、重复性好的优点，为今后变应性鼻炎的诊断、治疗及研究工作提供了有效的方法及组织形态学依据。     

益气脱敏法对变应性鼻炎患者血清IgE、IL-4含量的影响

目的探讨益气脱敏法对变应性鼻炎患者血清IgE、IL-4含量的影响,及寻求二者相关性。方法总结31例实验组患者服用益气固表脱敏汤治疗疗效（症状积分）,并选取12例非变应性鼻炎住院病人设为对照组,测定治疗前后IgE和IL-4水平,且将资料进行统计学分析。结果实验组变应性鼻炎患者在用药前、后比较,血清中IgE浓度和IL-4浓度明显下降（P〈0．01）,而实验组用药前与对照组比较,IgE浓度和IL-4浓度明显增高。结论IgE及IL-4参与了变应性鼻炎的免疫发病过程。益气固表脱敏汤治疗变应性鼻炎具有确切疗效,有抑制浆细胞产生IgE及IL-4的功能。血清IgE和IL-4相关性分析中证实二者具有相关性,说明IL-4具有诱导产生IgE并调控IgE的作用。      

腺病毒介导CTLA4Ig基因在体外培养细胞中的表达

目的 鉴定腺病毒介导免疫调节基因CTLA4Ig在体外培养细胞中的表达能力和细胞毒性。方法 以肾小管上皮细胞（PK－15），血管内皮细胞（ECV－304）为靶细胞，观察感染强度为100，200，400时CTLA4Ig重组腺病毒转梁靶细胞后不同时相细胞存活百分率；以免疫组化以及Westerb blot分别检测CTLA4Ig在细胞以及上清中的表达。结果 转染后2d,4d，转染组两种细胞存活百分率与对照组相比无显著差异；转染后24h,CTLA4Ig在PK－15和ECV－304中的阳性率表达率分别为93．7％和90．2％；Westerb blot检测到两种细胞上清中均有CTLA4Ig表达。结论 重组腺病毒对非包装靶细胞毒性很小，能够介导CTLA4Ig基因对靶细胞的高效转染，并使其表达分泌型CTLA4Ig，具备了以基因治疗诱导免疫耐受的潜能，为介导CTLA4Ig基因转染移植物和抗原提呈细胞提供了一种安全有效的载体。     

共刺激阻断剂CTLA4Ig基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的 构建共刺激阻断剂CTLA4Ig基因重组的腺病毒载体。方法 将CTLA4Ig cDNA插入腺病毒表达质粒；将重组质粒与病毒基因组质粒共转染293细胞，产生重组腺病毒；采用dot-ELISA和PCR法筛选并获得CTLA4Ig阳性表达的重组腺病毒。结果 同源重组后，以dot-ELISA法筛选到2个293细胞的CTLA4Ig蛋白阳性表达空斑，PCR证实为含CTLA4Ig基因和腺病毒基因的重组体AdvCTLA4Ig。结论 本研究构建了CTLA4Ig基因重组的复制缺陷型腺病毒AdvCTLA4Ig，为进行器官移植基因治疗研究提供了工具。     

生命早期短双歧杆菌干预对变应性鼻炎小鼠的免疫调节作用

目的 探讨生命早期短双歧杆菌(Bifidobacterium Breve, B. breve)干预对卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导变应性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）小鼠模型的免疫调节作用。方法：24只新生BALB/c雌性小鼠随机分为A组（AR组）、B组（阴性对照组）及C组（B. breve干预组）,每组8只。C组小鼠从出生后第一天即开始给予口服B. breve干预,每日一次,连续8周。第9周龄开始,使用OVA进行腹腔注射（每周一次,连续2周）及鼻腔滴注（每日一次,连续6周）建立AR模型。A、B组小鼠均给予生理盐水口服干预,A组采用OVA进行腹腔注射及鼻腔滴注建立AR模型,B组小鼠予以生理盐水腹腔注射及鼻部激发。观察末次鼻部激发后10分钟内小鼠喷嚏及抓鼻次数,采用Luminex及ELISA检测各组血清IL-4 、IL-10、IFN-γ和OVA特异性IgE（OVA-SIgE）水平,采用流式细胞术检测脾细胞悬液中CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞的比例,取鼻腔粘膜HE染色。结果：与AR组比较,B. breve干预可减少小鼠末次鼻部激发后10分钟内喷嚏及抓鼻次数（P＜0.001、P＜0.001）,更好的维持黏膜正常形态,降低血清IL-4、IL-10及OVA-SIgE水平（P 值分别为P=0.03、P＜0.001及P＜0.001）,提高脾细胞悬液中CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞的比例（ P＜0.001）;B. breve组血清IFN-γ水平与AR组无统计学差异（P =0.276）。结论：生命早期B. breve口服干预可以有效抑制小鼠后期AR症状,这一作用可能是通过抑制Th2细胞反应及增强CD4+CD25+Treg细胞功能实现的。     

苍耳子水提取物对变应性鼻炎豚鼠鼻黏膜病变和血清炎症细胞因子的影响

目的 观察苍耳子水提取物对变应性鼻炎豚鼠鼻部行为学症状、鼻黏膜组织病理变化和血清炎症细胞因子的影响。方法 将SPF级豚鼠随机分成正常组,模型组,氯雷他定组,玉屏风散组,苍耳子水提取物高剂量（4 g/kg）、中剂量（2 g/kg）、低剂量（1 g/kg）组。除正常组豚鼠外,其余各组豚鼠采用卵蛋白和氢氧化铝腹腔注射并局部刺激的方法复制变应性鼻炎豚鼠模型。模型复制成功后,给药14 d,5%卵蛋白隔日滴鼻1次。观察各组豚鼠鼻部行为学症状评分,光学显微镜下观察鼻黏膜组织病理变化,采用酶联免疫吸附法检测血清免疫球蛋白E（immunoglobulin E, IgE）、白细胞介素-4（interleukin-4, IL-4）和干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）水平。结果 与模型组相比,苍耳子水提取物高、中、低剂量组均可不同程度降低变应性鼻炎豚鼠鼻部行为学症状积分（P＞0.05）;高、中、低剂量苍耳子水提取物改善鼻黏膜病理变化;苍耳子水提取物呈剂量依赖性地降低血清IgE、IL-4水平（P＜0.05）,升高IFN-γ水平（P＜0.05）。结论 不同浓度苍耳子水提取物均可改善变应性鼻炎豚鼠鼻部行为学症状,减轻鼻黏膜病理变化,调节血清炎症细胞因子水平。     

Gene therapy for allergic rhinitis with recombinant adenovirus vector containing CTLA4Ig in mice

Objective: To examine the role of recombinant adenovirus vector containing CTLA4Ig gene( Ad-CTLA4Ig) in the treatment of induced allergic rhinitis in mice. Methods: Allergic rhinitis was induced by sensitizing and challenging with ovalbumin ( OVA). Ad-CTLA4Ig was intraperitoneally injected 30 min before OVA challenge. Adenovirus vector without inserted CTLA4Ig cDNA served as the control. The symptoms and morphological changes of nasal mucosa of each group were observed, and the serum levels of IgE against OVA were detected with ELISA. Results: There were no obvious symptoms and pathological changes in Ad-CTLA4Ig treated group, in which the serum OVA-specific IgE levels were significantly lower than that in control groups (P < 0. 05). Conclusion: Ad-CTLA4Ig prevents and treats allergic rhinitis of mice, implying the possibility of the usage of Ad-CTLA4Ig against allergic rhinitis in clinic in future.     

Intranasal application of Epstein-Barr virus/lipoplex to abrogate eosinophillia in murine model of allergic rhinitis

Allergic rhinitis is strongly associated with thenasal mucosal inflammation caused by theoverproduction of cytokines secreted by the allergen specific type-2 T helper (Th2) cells. Th2 cytokines, such as interleukin (IL)-4 and IL-5, can induce eosinophil infiltration and hyperresponsiveness of nasal mucosa.1 IL-12, a heterodimeric cytokine, which strongly promotes the differentiation of the type-1 T helper (Th1) phenotype and suppresses the expression of Th2 cytokines. Therefore, immunother…     

消风宣窍汤对变应性鼻炎豚鼠模型IgE、IL-4、IFN-γ、组胺的调控作用

[目的]探讨消风宣窍汤治疗变应性鼻炎（Allergic Rhinitis,AR）的作用机理。[方法]将60只Hartley豚鼠随机分为正常组、模型组、消风宣窍汤高、中、低剂量组、氯雷他定组。卵蛋白（OVA）建立变应性鼻炎豚鼠模型,药物干预后,ELISA法检测各组豚鼠血清总IgE、IL-4、IFN-γ、组胺的水平。[结果]与正常组比较,模型组IgE、IL-4、组胺水平显著升高、IFN-γ水平明显下降（P〈0.01）;与模型组比较,消风宣窍汤高剂量组能显著降低血清总IgE、IL-4、组胺水平,升高IFN-γ水平（P〈0.01）,消风宣窍汤中、低剂量组、氯雷他定组能降低血清总IgE、IL-4、组胺水平,升高IFN-γ水平（P〈0.05）。[结论]消风宣窍汤能促进IFN-γ的产生,抑制IL-4的形成,促进Th1/Th2分泌的细胞因子之间恢复平衡,从而减轻EOS的活化,减少IgE的合成,减少组胺的释放,从多方面阻止变应性鼻炎的炎症反应,达到治疗效果。     

益生菌DNA对变应性鼻炎疗效的动物实验研究

目的益生菌DNA对卵清蛋白（OVA）诱发的变应性鼻炎疗效的动物模型研究。方法培养益生菌,提取DNA,取6-8周Balb/c小鼠OVA造模成功后随机分为益生菌DNA滴鼻组及生理盐水对照组,每组15只。用已提取的益生菌DNA液滴鼻治疗,对照组采用生理盐水代替。采用ELISA法检测各组血清IgE及IL-4,IL-10,IFN-γ,IFN-γ/IL-4。结果益生菌DNA滴鼻组IgE显著高于对照组（P〈0.05）,益生菌DNA滴鼻组IL-10,IFN-γ,IL-4均低于对照组（P〈0.05）,而FN-γ/IL-4高于对照组（P〈0.05）。结论益生菌DNA干预治疗通过调整模型动物Th1/Th2细胞因子平衡对变应性鼻炎起一定防治作用。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白2在过敏性鼻炎小鼠模型中的表达及与血管生成的关系

目的 观察过敏性鼻炎中肿瘤坏死因子α诱导蛋白2（tumor necrosis factor-α-inducible protein-2,TNFAIP2）的表达及与血管生成的关系.方法 建立卵清蛋白（ovalbumin,OVA）诱导的过敏性鼻炎小鼠模型,检测TNFAIP2和血管内皮细胞标记（CD31）的表达,并分析相关性.结果 成功建立OVA诱导的过敏性鼻炎小鼠模型,表现为小鼠挠鼻次数、血清OVA特异性IgE浓度、鼻黏膜局部嗜酸细胞和肥大细胞的聚集均显著高于正常对照.TNFAIP2 mRNA和蛋白及CD31mRNA在过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜局部的表达均明显高于正常对照.TNFAIP2和CD31mRNA的表达存在正相关.结论 TNFAIP2参与了过敏性鼻炎的发生,且可能与血管生成有关.     

鼠李糖乳杆菌对过敏性鼻炎小鼠模型的免疫调节作用

目的 探讨鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus GG,LGG)对卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠模型的免疫调节作用. 方法 6~8周龄BALB/c小鼠,随机分为阴性对照组、LGG组及AR组,每组各10只.采用Luminex法检测各组血清IL-4 、IL-10和IFN-γ水平.ELISA测血清OVA特异性IgE(OVA-sIgE)水平,采用流式细胞术检测脾细胞悬液中CD4+CD25+ T细胞比例.结果 与AR组比较,LGG可明显降低血清IL-4、IL-10及OVA-SIgE水平(P<0.05),提高脾细胞悬液中CD4+CD25+ T细胞比例( P<0.05);LGG组血清IFN-γ水平与AR组比较,差异无统计学意义(P=0.215).结论 LGG能通过抑制Th2细胞反应及增强CD4+CD25+ T细胞活性发挥抗过敏作用.     

经方薯蓣丸对变应性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影响

目的：探讨经方薯蓣丸对变应性鼻炎（AR）大鼠模型的疗效及对血清IgE、IL-4含量的影响。方法60只大鼠随机分为正常对照组、模型组、辛芩颗粒组、经方薯蓣丸高、中、低剂量组（3.2,1.6,0.8g/kg）,每组10只。对除正常对照组外的5组大鼠采用卵清蛋白（OVA）致敏和激发进行造模,造模成功后给药,经方薯蓣丸高、中、低剂量组分别采用薯蓣丸浓缩水煎液灌胃,辛芩颗粒组给予辛芩颗粒灌胃。治疗14d后采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测各组大鼠血清IgE、IL-4含量。结果造模后各组大鼠行为学评分均明显高于正常对照组（P＜0.01）;治疗后各组行为学评分及血清IgE、IL-4含量较模型组均有降低（P＜0.05）;与辛芩颗粒组相比,中剂量组血清IgE、IL-4含量明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论经方薯蓣丸对AR大鼠模型的疗效显著,其作用机理可能与降低血清IgE、IL-4含量有关。     

CTLA4—Ig对过敏性哮喘作用的研究

目的：通过CTLA4－Ig阻断B7／CD28的结合防止CD＋4T激活,探讨其治疗哮喘的可行性。方法：分别用6只BALB／C小鼠作为正常,哮喘,治疗组,于气道激发后24h进行外周血,支气管肺泡灌洗液89BALF）细胞计数及分类,细胞因子测定和病理切片。结果 ：哮喘组BALF细胞数增加,炎性细胞比例上升,全身及局部IL－4水平增高,病理示气道民性炎症性改变,治疗组可减轻上述改变,两组比较差别有显著性。结论：CTLA4－Ig可引起抗原特异性免疫耐受,抑制哮喘反应。     

祛风胜湿方对变应性鼻炎小鼠免疫球蛋白E及水通道蛋白5的影响

目的 观察祛风胜湿方对变应性鼻炎小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)及水通道蛋白5(AQP5)的影响。方法 以卵清蛋白(OVA)+氢氧化铝基础致敏、局部以OVA激发复制变应性鼻炎小鼠模型,将其分为正常对照组、模型组、祛风胜湿方组、氯雷他定组。灌胃给药14天,观察各组对变应性鼻炎小鼠血清IgE、AQP5及鼻黏膜组织病理形态学的影响。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠血清IgE及AQP5均显著增高(P<0.05);与模型组比较,各药物干预组的上述指标均显著降低(P<0.05)。结论 祛风胜湿方作用机制可能与其抑制IgE及AQP5表达有关。本实验为揭示中医"风能胜湿"与"祛风止痒"理论提供了实验数据支持。