严重烧伤感染后细胞因子风暴发生发展机制浅析

严重烧伤感染早期,机体天然免疫细胞杀伤功能持续低下,引起免疫系统持续代偿性分泌大量细胞因子,以提高抗细菌感染能力;细胞因子分泌一旦失控,就会形成细胞因子风暴。严重烧伤感染后期,持续的急性髓系增生引起的骨髓动员能力耗竭、免疫应答水平低下、促修复的抑炎因子分泌增加,将导致机体处于免疫抑制状态。烧伤感染后,细胞因子风暴是由过度的促炎刺激、炎症调节不足或两者共同引起。本文拟从免疫学角度,就严重烧伤感染后机体抗病原菌感染免疫反应的改变进程,严重烧伤感染早期细胞因子风暴和后期机体免疫抑制状态的发生及转化机制做一简要总结。未来研究方向建议从以下方面展开:严重烧伤后先天免疫细胞细菌杀伤功能低下的机制,急性髓系增生导致髓系抑制细胞（MDSC）和有核红细胞增多在细胞因子风暴发生发展过程中的作用机制,巨噬细胞吞噬杀伤细菌功能障碍与分泌细胞因子功能亢进的关键调节机制,巨噬细胞M1型/M2型以及效应T细胞/调节性T细胞动态平衡破坏在引发机体免疫抑制状态中作用及关键调节机制。     

基因治疗人类多发性硬化症的可能性研究:腺病毒转染CTLA-4Ig对动物实验性自身免疫性脑脊髓炎病理过程的抑制或阻断作用

背景实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)同人类的多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)的病理机制相类似,因此认识和阻断EAE的病理过程是攻克MS的关键.目的寻求一种可能抑制或阻断EAE病理过程,加速神经功能恢复进程的方法.设计随机对照的实验研究.单位解放军第三军医大学附属西南医院神经内科和烧伤研究所.材料实验在解放军第三军医大学动物实验室完成.实验材料豚鼠4只(雌雄不限,体质量300～400 g),Wistar大鼠40只(雌雄不限,体质量180～200 g).方法用所构建的CTLA-4Ig腺病毒通过侧脑室注射到Wistar大鼠EAE模型体内观察其疗效,用冷冻切片观察CTLA-4Ig在脑组织中的表达,观察发病情况、病理改变.主要观察指标①两组大鼠致敏后的发病天数、发病只数及潜伏期及神经功能评分情况.②光镜下观察两组大鼠病理学改变情况.结果发病情况生理盐水对照组大鼠于致敏后第10天开始发病.于第16天全部发病,平均发病天数为12.2 d,临床评分平均为3.1;腺病毒介导的CTLA-4Ig组于致敏后第14天开始发病,第18天共发病6只,平均发病天数为14.1 d,临床评分平均为2.4.病理结果侧脑室注射AdCTLA-4Ig后24,48,72 h取脑组织做冷冻切片在荧光显微镜下观察侧脑室周围和脊髓有荧光.在光镜下可见对照组大鼠的脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润,炎性细胞聚集在血管周围呈现袖套样改变,髓鞘染色(Loyez染色)可见髓鞘脱失;腺病毒介导的CTLA-4Ig组的脑脊髓组织炎性细胞浸润明显减轻,形成的血管套样改变也减少,髓鞘脱失也减少.结论CTLA-4Ig可诱导T细胞失活化,有效地抑制细胞及体液免疫,能阻断以T细胞过度活化为主要原因的自身免疫性疾病EAE的病理过程,可以提高大鼠的神经功能评分,有效地改善神经功能症状.     

人骨保护素重组腺病毒抑制去势骨质疏松大鼠骨吸收作用的研究

目的:观察携带人骨保护素基因的重组腺病毒(recombinantadenovirusvectorcarryinghumanosteoprotegeringene,Ad-hOPG)在大鼠体内表达及对去势骨质疏松大鼠的治疗作用。方法:首先将不同滴度的Ad-hOPG(1×1011～1×1013pfu/L)注入SD大鼠体内,观察其表达特点。然后选用10月龄雌性SD大鼠15只,随机分为假手术对照组、卵巢切除+生理盐水注射组、卵巢切除+Ad-hOPG治疗组,每组5只,分别在去势8周后开始给药,给药后在不同时像点测定人骨保护素(humanosteoprotegerin,hOPG)血清浓度;在给药后第48d时用双能X射线骨密度仪(dualenergyXrayabsorptiometry,DEXA)测定各组大鼠骨密度值,并取大鼠胫骨干骺端做组织切片。结果:1×107～1×109pfu的Ad-hOPG表达时限较短,1×1010pfu则表达了长达46d,选择1×1010pfu做进一步实验;假手术对照组、卵巢切除+生理盐水注射组没能检测到hOPG的血清浓度,而卵巢切除+Ad-hOPG治疗组hOPG的血清浓度第2天就达到25mg/L,6d达到高峰,46d时仍有0.0042mg/L;卵巢切除+Ad-hOPG治疗组的骨密度值明显高于卵巢切除+生理盐水注射组(P<0.01),甚至比假手术对照组还高;卵巢切除+Ad-hOPG治疗组大鼠骨形态学也较假手术对照组明显改善。结论:Ad-hOPG在大鼠体内成功的较长时间表达,对去势大鼠骨质疏松治疗取得     

同种与异种胎胸腺混合移植诱导供者皮肤移植免疫耐受

目的:探讨同种异种胎胸腺混合移植达到供者皮肤移植的耐受。方法:实验于2003-03/12在第三军医大学创伤、烧伤、复合伤实验室完成。将F344大鼠胎胸腺和C57BL/6小鼠胎胸腺混合移植到BALB/C裸小鼠的双肾包膜下4个月后,用流式细胞仪技术检测裸小鼠外周血中CD3+和CD4+T细胞,用单向混合淋巴细胞培养了解T细胞对ConA以及同种异种淋巴细胞的反应性,异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。结果:①混合移植胎胸腺4个月后,受者裸小鼠外周血中CD3+和CD4+T细胞占总白细胞的25.9%,正常裸小鼠外周血中CD3+和CD4+量极少(2.43%)。②受者T细胞对ConA以及无关的SD鼠异种淋巴细胞的反应性强(刺激指数分别为23.23与12.75),而对供者F344及C57BL/6淋巴细胞不发生增殖反应(刺激指数分别为1.12与0.98)。③受者对供者F344及C57BL/6鼠皮肤移植物86d不发生排斥,而对无关的SD鼠皮肤移植物15d即发生排斥。结论:受体对胸腺供体来源的F344和C57BL/6皮肤及宿主本身的BALB/C皮肤移植耐受,而对无关的SD鼠皮肤移植物较短时间内即发生了排斥,并且抗DNA自身抗体水平与正常鼠相似。表明同种和异种胸腺混合移植后受体可重建有免疫功能的T淋巴细胞,并能诱导供者特异性免疫耐受的发生。     

小鼠DETCs表型及功能的初步研究

目的通过分析小鼠表皮内T淋巴细胞(dendritic epidermal T cells,DETCs)的形态、表型及细胞因子的表达情况,揭示小鼠DETCs活化后能够发挥抗原递呈功能。方法通过免疫荧光的方法观察DETCs的形态,通过流式细胞技术分析DETCs的表型及细胞因子的表达情况。通过DETCs和na觙ve CD4+T细胞进行共培养,观察DETCs对淋巴细胞分化方向的影响。结果 DETCs在形态上表现出抗原递呈细胞的树突状特征,活化后分泌一定水平的IFN-γ,DETCs活化后在体外与na觙ve CD4+T细胞共培养可以诱导该型T细胞向Th1方向分化。结论小鼠DETCs具有抗原递呈细胞的基本特征,是皮肤免疫微环境的重要组成部分。     

混合胸腺移植防止器官特异性自身免疫损害的实验研究

目的 探讨同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植防止器官特异性自身免疫损害的可行性。方法 BALB／c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺建立异种．同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。术后6个月内比较各组发生自身免疫性疾病情况,观察胃的组织学变化,并用ELISA检测受体血清抗DNA自身抗体及用间接免疫荧光法检测的自身抗体。结果 异种组80％发生自身免疫性疾病而死亡,血清中自身抗体明显高于混合组,异种组胃组织有明显的炎性损害而混合组未观察到明显的炎性改变。结论 异种胸腺植入裸小鼠可引起宿主自身免疫损害,而同系或同种异种混合胸腺移植能够有效阻止自身损害的发生。     

巨噬细胞在创面愈合中的调节作用及其相关机制

创面愈合是一个被精准调控的复杂过程, 包含了炎症、抗炎、再生等多个阶段。由于巨噬细胞具有明显的可塑性, 可以在具有差异化的创面愈合过程中发挥重要的调节作用。巨噬细胞若未能适时表达特定功能, 将会影响组织的愈合功能并导致组织病理性愈合。因此, 了解巨噬细胞在创面愈合的不同阶段发挥的不同功能并进行针对性调控, 对促进创伤组织的愈合再生有重要意义。该文根据创面愈合的基本过程, 阐述了创面内不同类型巨噬细胞发挥的不同功能及其基本机制, 并强调了未来可能应用于临床治疗的巨噬细胞调控策略。     

烧伤合并多发伤后播散性毛霉菌感染1例

我科于1998年10月27日收治1例火药爆炸烧伤合并多发伤后毛霉菌感染病人,现报告如下。临床资料病例:女性,33岁,因火药爆炸烧伤面、躯干、四肢,伴挤压伤3ｄ入院。伤后患者昏迷约30ｓ,持续性肉眼血尿,1ｈ后入当地医院治疗。烧伤创面外涂自制油膏,右小腿中下1/3处胫腓骨骨折,予以清创缝合,石膏托外固定,补液治疗经过不详。入院查体:脉博118次/ｍｉｎ,呼吸26次/ｍｉｎ,血压15.0/9.0ｋＰａ(113/68ｍｍＨｇ),神志恍惚,躁动,双眼瞳孔等大等圆,鼻毛烧焦,咽后壁水肿,无声音嘶哑,双肺呼吸音粗糙,心率118次/ｍｉｎ,心律齐,腹部膨隆,臀部、背部大片皮下瘀…     

HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白

目的利用激光共聚焦显微镜观察未知蛋白（HT036）与纤维化相关蛋白（P311）的细胞内表达与共定位。方法构建带绿色荧光的HT036真核表达载体，经鉴定正确后，与前期构建带红色荧光的P311真核表达载体共转染人胚肾上皮细胞株（HEK293），同时共转染空载体做对照，激光共聚焦显微镜下观察蛋白在细胞内表达、分布和共定位。结果HT036真核表达载体经聚合酶链反应（PCR）、双酶切和测序鉴定正确，与P311共转染HEK293细胞后，激光共聚焦显微镜观察到绿色和红色荧光表达。HT036和P311主要分布在细胞胞浆，两者在HEK293细胞中存在共定位，而对照组则无该现象。结论通过酵母双杂交筛选出的P311相互作用蛋白HT036，在活体细胞内存在空间上的共定位，进一步证明它们之间的相互作用，为探讨P311纤维化机制提供新的切人点。