混合胸腺移植防止器官特异性自身免疫损害的实验研究

目的 探讨同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植防止器官特异性自身免疫损害的可行性。方法 BALB／c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺建立异种．同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。术后6个月内比较各组发生自身免疫性疾病情况,观察胃的组织学变化,并用ELISA检测受体血清抗DNA自身抗体及用间接免疫荧光法检测的自身抗体。结果 异种组80％发生自身免疫性疾病而死亡,血清中自身抗体明显高于混合组,异种组胃组织有明显的炎性损害而混合组未观察到明显的炎性改变。结论 异种胸腺植入裸小鼠可引起宿主自身免疫损害,而同系或同种异种混合胸腺移植能够有效阻止自身损害的发生。     

创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮移植存活期的临床应用

目的　观察创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮存活期的临床效果。方法　 12例大面积烧伤切痂创面应用CTLA4Ig重组腺病毒自体微粒皮和异体皮移植。临床观察异体皮存活时间、微粒皮封闭创面情况、用EP Ⅰ型水蒸仪测定创面水分蒸发量及组织学观察。结果　创面应用CTLA4Ig重组腺病毒能显著延长异体皮移植物的成活期 [对照组 ( 16.9± 3 .7)d ,实验组 ( 2 5 .6± 5 .5 )d] ,淋巴细胞浸润较少 ,自体微粒皮移植创面愈合率明显增高 ;实验部位水分蒸发量保持较低水平 ,而对照部位于术后 9d逐渐升高。结论　局部应用CTLA4Ig 重组腺病毒是一种有效延长烧伤创面异基因移植皮肤存活期的方法。     

人白介素-10在NIH3T3细胞中的表达及生物学效应的初步观察

目的观察IL-10的免疫抑制作用.方法将构建好的pLXHIL-10载体,经包装细胞PA317包装后感染小鼠成纤维细胞株NIH3T3,用ELISA和原位杂交的方法检测hIL-10的表达,并对其生物学活性进行初步观察.结果检测到感染细胞中有hIL-10 mRNA的表达,感染细胞培养上清中存在hIL-10,证实感染细胞培养上清对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用.结论hIL-10可抑制混合淋巴细胞反应.     

调节性T细胞的MACS分选和纯度鉴定

目的 建立CD4^ CD25^ 调节性T细胞（Regulatory T Cells,Treg)的磁珠（MACS）分选方法，并对分选结果进行纯度鉴定。方法 采用T细胞纯化柱分离小鼠脾脏T淋巴细胞，以抗－CD8－FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8^ T细胞，再以抗－CD25－FITC抗体和义气风发FITC标记磁珠相结合的阳性选择法选出CD25^ T淋巴细胞；以FACS流式细胞法检测分选的CD4^ CD25^ 调节性T细胞纯度。结果 MACS磁珠分选法能够成功分选出CD4^ CD25^ 调节性T细胞，分选平均纯度达到73％，分选细胞活力为95％。结论 MACS磁珠分选法能够分选出高纯度的Treg细胞，该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力。     

CTLA4Ig-重组腺病毒载体延长大鼠异基因原位移植气管存活期

目的　研究腺病毒介导的CTLA4Ig基因在大鼠异基因原位气管移植中的作用。 方法　建立异基因大鼠原位气管移植模型。分别采用腹腔注射生理盐水 (Saline组 ,2ml/只 )、腹腔注射CTLA4Ig重组腺病毒载体 (Ad CTLA4Ig组 ,2× 10 9PFU/只 )和肌肉注射环胞素A(CsA组 ,5mg/kg) ,观察术后大鼠的存活时间和移植气管的病理改变。 结果　Ad CTLA4Ig组大鼠存活时间为(2 7 3± 5 88)d ,较Saline组 (7 3± 1 63 )d和CsA组 (18 3± 1 70 )d明显延长 (P <0 0 5 )。同时 ,术后 10dAd CTLA4Ig组大鼠气管组织学改变与CsA组大鼠比较无明显差异。结论　Ad CTLA4Ig可延长大鼠异基因原位移植气管的存活时间     

CD40及CTLA4模拟小分子肽诱导免疫耐受的实验研究

目的 最新实验数据显示了CD28－B7和CD40－CD154共刺激信号通路在T细胞活化与效应过程中起重要作用。治疗策略关键在于干扰这些通路，诱导移植物宿主产生免疫耐受。方法 我们运用生物信息学和多肽合成技术模拟CTLA4和CD40小分子肽，以阻断这些信号通路。通过MLC，IL－2测定及同源小鼠皮肤皮肤移植实验，检测了不同剂量的两种小分子短肽在体内和体外对免疫反应的影响。结果 所有治疗组的巴细胞增殖降低，IL－2表达低下。在不同水平与时间段，皮肤移植物存活时间显著延长。结论 成功模拟CTLA4和CD40小分子肽，该小分子肽能有效地阻断调节T细胞活化的CD28－B7和CD40－CD154分子连接，是潜在的具有临床应用价值的免疫抑制剂。     

重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞活化的抑制作用

目的 探讨基因重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。方法 于不同时相点在Con A刺激的小鼠脾淋巴细胞及BALB/c与昆明种小鼠混合淋巴细胞培养中加入不同剂量hCTLA4Ig，应用^3H-TdR掺入法测定淋巴细胞增殖情况。结果 重组hCTLA4Ig能显著抑制ConA刺激的脾淋巴细胞及混合淋巴细胞反应中的细胞增殖。结论 重组hCTLA4Ig能抑制鼠淋巴细胞的活化。     

人CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体构建及鉴定

目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中，脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig-IRES2-EGFP转染PA317细胞，在G418选择压力下，通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA317细胞克隆，MTT法测定CTLA4Ig生物学活性。结果 成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体，生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响。结论 IRES序列调控CTLA4Ig与EGFP双基因在细胞中同时独立表达。     

rhCTLA4Ig对烧伤创面异基因移植皮肤存活期的影响

目的 探讨重组CTLA4Ig蛋白延长烧伤创面异基因移植皮肤存活情况。方法 大鼠背部烧伤创面移植人断层皮肤，观察术后不同时间给予不同剂量rhCTLA4Ig对移植皮肤存活情况的影响。结果 rhCTLA4Ig能一定剂量依赖性延长大鼠烧伤创面移植人断层皮肤的存活时间，且存活时间及病理学检查均发现术后24h给药较术后立即给药效果更好。结论 重组CTLA4Ig可用于延长烧伤创面异基因移植皮肤的存活期。